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新生期双酚A染毒对小鼠睾丸Boule基因表达的长期影响
目的 探讨新生小鼠双酚A染毒对小鼠睾丸结构及Boule基因表达的长期影响及机制.方法 将12只清洁级妊娠ICR母鼠,待分娩后随机分为空白对照组、阴性对照组(玉米油)和双酚A(100 μg/kg)组.仔鼠从出生第1天开始按4μL/gBW颈背部皮下注射药物,直到出生第21天停止注射,出生第35和70天处死取材.苏木精-伊红染色观察小鼠睾丸组织形态学变化,采用RT-PCR法测定睾丸BoulemRNA表达量变化,免疫荧光和Western blot法检测睾丸内Boule蛋白的表达水平.结果 与空白对照组、阴性对照组相比,出生第35和70天的双酚A组睾丸曲细精管直径与生精上皮厚度显著减小,管腔显著增大(P＜0.05),睾丸中Boule mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论 新生期双酚A染毒可通过降低睾丸组织内Boule mRNA和蛋白质的表达水平进而影响睾丸发育.
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人Boule基因启动子区结合蛋白的生物信息学分析
目的:对精子发生RNA结合蛋白Boule基因启动子区结合蛋白进行生物信息学分析.方法:从基因参考序列数据库获取Boule基因启动子区序列,使用TFSEARCH程序对启动子序列中的转录因子结合位点进行预测.结果:成功获得长度为2 kb的人Boule基因启动子区序列.该启动子区Threshold score≥ 90的共有60个转录因子结合位点,涉及SOX家族、GATA结合蛋白家族、热休克因子家族、锌指蛋白Kruppel家族、POU家族、runt家族、同源异型框基因家族、TALE类同源结构蛋白家族、转录因子螺旋环螺旋家族、IKAROS家族、FOX家族11个家族的转录因子和3个TATA box.结论:Boule基因表达的调控是在一定时间或空间上、一种或多种调节蛋白作用的复杂过程.调控Boule基因表达的转录因子绝大部分与胚胎发育、性别决定、个体生长密切相关.
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唯支持细胞综合征患者睾丸组织Boule基因5’调控序列甲基化分析
目的:探讨唯支持细胞综合征(ScoS)患者睾丸组织中Boule基因5’调控序列甲基化状态. 方法:收集梗阻性无精子症患者(12例)和SCOS无精子患者(15例)睾丸组织穿刺标本,门诊检查排除精索静脉曲张、隐睾、感染等疾病.试剂盒法提取患者睾丸组织基因组DNA,利用生物信息学方法分析Boule基因5’调控序列的序列特征,采用亚硫酸氢钠测序法检测睾丸组织中Boule基因甲基化状态. 结果:Boule基因5’调控区存在一个CpG岛,SCOS患者Boule基因的甲基化水平(61.4％)显著高于梗阻性无精子症患者(21.7％)(P＜0.01),共14个CpG位点甲基化有显著性差异,分别为-58 bp、-50 bp、-48 bp、-38 bp、-28 bp、-24 bp、-20 bp、-15 bp、-1 bp、+5 bp、+8 bp、+15 bp、+29 bp和+58 bp. 结论:SCOS患者Boule基因的甲基化水平显著高于梗阻性无精子症患者,推测这种甲基化变化可能与精子发生障碍有关.
