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聚己内酯/丝胶蛋白静电混纺膜炎症响应的体内评价
背景:研究表明,丝胶蛋白可以增加哺乳动物细胞的增殖,促进伤口愈合,具有良好的抗菌、抗氧化、抗癌的活性,同时具有良好的生物相容性和可降解性,是一种理想的组织工程材料.然而目前对丝胶蛋白能否引起炎症响应仍存在争论.目的:评价聚己内酯/丝胶蛋白静电混纺膜的炎症响应.方法:将不同混合比例的聚己内酯/丝胶蛋白纳米纤维薄膜体内埋植入大鼠背部肌肉,4 周后取出进行组织学观察,通过苏木精-伊红染色和巨噬细胞抗体CD68 免疫组织化学染色评价其炎症响应.结果与结论:聚己内酯/丝胶蛋白7∶3 组混纺膜炎症反应与丝素蛋白膜类似,小于聚己内酯/丝胶蛋白6∶4 组、聚己内酯/丝胶蛋白5∶5 组和聚己内酯组;聚己内酯/丝胶蛋白6∶4 组与聚己内酯/丝胶蛋白5∶5 组与聚己内酯组类似.提示聚己内酯/丝胶蛋白静电混纺膜不会引起显著的炎症响应,少量添加丝胶蛋白可以降低聚己内酯的炎症反应,随着丝胶蛋白含量的增加,炎症反应呈上升趋势.
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蚕丝生丝和熟丝在大鼠皮下降解的实验研究
目的:通过大鼠皮下埋植实验,从组织学角度探讨蚕丝(生丝和熟丝)在体内的降解.方法:将生丝和熟丝在SD大鼠皮下进行埋植,在第7、14、56、84、129、145天取材进行冰冻切片,分别进行H.E染色和DAPI、β-actin和Collagen Ⅰ免疫荧光染色观察.结果:在大鼠皮下埋植一定时间后,蚕丝的外表均被结缔组织包裹而在皮下形成包块.包决的直径在生丝和熟丝手术组间的差异无统计学意义(P＞0.05).在皮下埋植第7天观察到了蚕丝被降解的现象,在皮下埋植第145天仍然能够观察到大量未被降解的蚕丝.结论:蚕丝在体内的降解不是一个匀速的过程,其降解进程与细胞的动员有关,成纤维细胞参与此过程并分泌胶原蛋白.
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正交试验法优选蚕茧中丝胶蛋白的提取工艺
目的:优选蚕茧中丝胶蛋白的佳提取工艺.方法:以丝胶蛋白提取率和丝胶蛋白含量为考察指标,采用单因素试验和正交试验设计,优选蚕茧中丝胶蛋白的佳提取工艺.结果:蚕茧中丝胶蛋白的佳提取工艺为:30倍量1％Na2CO3溶液提取2次,每次3h,提取温度为100℃.蚕茧中丝胶蛋白的提取率可达27.1％.结论:优化得到的提取工艺稳定、可行,可为进一步研究蚕茧中丝胶蛋白的药理药效提供参考.
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丝胶蛋白通过自噬通路调控人胃癌MKN45细胞的增殖
目的 探索丝胶蛋白对胃癌MKN45细胞增殖活性的影响及作用机制.方法 用LC3双荧光自噬病毒转染胃癌MKN45细胞,用嘌呤霉素筛选LC3双荧光自噬病毒的MKN45稳转株.实验分为3组,空白对照组(Blank)、丝胶蛋白阳性组(Sericin)、丝胶蛋白加自噬抑制剂组(Sericin+3-MA).培育48 h后用cck-8试剂测定细胞增殖活性,根据所测数据得出丝胶蛋白半数致死浓度IC50,按此浓度处理细胞并培育48h,用流式细胞仪分别检测凋亡、周期,电镜检测细胞自噬,Western blotting检测LC3、p62、Beclin蛋白表达.将种植胃癌的裸鼠分为2组,即对照组(Saline)、丝胶蛋白阳性组(Sericin),每组5只;分别注射生理盐水和丝胶蛋白,测量肿瘤体积和质量.结果 丝胶蛋白阳性组(Sericin)与空白对照组(Blank)相比,MKN45细胞增殖活性明显受到抑制,且细胞凋亡增加(P<0.01),细胞阻滞于G2/M期(P<0.01).相对于空白组,丝胶蛋白处理后细胞在电镜观察到自噬小体明显增多;Western blotting检测到LC3-2表达上调,Beclin表达增加,p62表达逐渐下调;丝胶蛋白加自噬抑制剂组(Sericin+3-MA)实验结果则介于两者之间.动物实验中,丝胶蛋白阳性组(Sericin)与对照组(Saline)相比,肿瘤体积和质量有显著下降.结论 丝胶蛋白可通过调控胃癌MKN45细胞自噬影响细胞增殖活性.
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丝胶蛋白在组织工程中的应用概况
丝胶是一种球状蛋白,对其结构的研究近年来多侧重于部分有机物对丝胶蛋白结构构象的影响上.丝胶的提取已从传统方法向非催化高温水解法、膜过滤和酶水解法转变.丝胶蛋白作为一种生物相容性优良的高分子生物材料,具有独特的凝胶化性能,可用作药物缓释及酶固定化载体,其保湿性和抗氧化性还可用于化妆品、纤维制品及医药领域的开发利用.对于丝胶材料的进一步开发,应整合多学科领域,以期开发后续研究具有广阔的应用前景.该文主要论述了丝胶在组织工程中的应用及其发展前景,可为该领域的研究提供参考.
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PCL/SS纳米纤维支架的制备及相容性研究
采用静电纺丝技术制备了聚己内酯/丝胶蛋白(PCL/SS)纳米三维多孔支架,利用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、傅立叶红外光谱(FTIR)技术、接触角仪等手段对其结构和性能进行了表征.取人皮肤成纤维细胞(FEK4)与支架复合培养,SEM和MTS法观察了细胞在材料上的黏附与增殖情况.结果表明,所制备的含SS纳米颗粒的PCL/SS纳米纤维支架呈相互交联的多孔网状无纺结构,纤维直径均一度与精细度高,且其中SS二级结构没有发生变化.SS加入后改善了材料表面的亲水性,增强FEK4细胞在材料上的黏附及增殖.
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三维多孔共混丝蛋白支架的性能研究
目的 探讨丝胶蛋白比例不同的三维多孔共混丝蛋白支架在分子结构、机械性能和生物学性能等方面的差异. 方法 取丝胶蛋白比例为0%、2%、4%、6%、8%、10%和12%的丝素/丝胶共混丝蛋白水溶液[浓度8%(W/V)],粒径分别为125～200、200～300、300～450、450～600、600～900、900～1 100 μm的NaCl作为制孔剂,制备三维多孔共混丝蛋白支架.大体观察不同丝胶蛋白比例及孔径大小的三维多孔共混丝蛋白支架是否成型.取同源性成型的三维多孔共混丝蛋白支架,扫描电镜观察孔径大小和分布,液体取代法计算孔隙率,X射线衍射仪(X-ray diffractometer,XRD)和红外线光谱仪(fourier transform infrared,FTIR)检测内部分子结构,行机械性能、体外酶降解率检测.取各丝胶蛋白比例均能同源性成型的支架(丝胶蛋白比例为0～12%,NaCl粒径600～900 μm)作为实验组与SD大鼠脂肪干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)复合培养行组织学观察,并行大鼠体内支架降解实验. 结果 大体观察显示,丝胶蛋白比例越增加,与支架能同源性成型的制孔剂粒径范围越大.扫描电镜观察示三维多孔共混丝蛋白支架的孔隙分布均匀、相互贯通;孔径大小在所用制孔剂的粒径范围之内,孔隙率均>90%.XRD分析三维多孔共混丝蛋白支架的特征性峰值出现相对应的角度为20.6°和24.6°,FTIR分析相对应的波长为3 296、2 933和1 629 cm-1,与天然蚕丝特征性峰值相对应的角度和波长一致.三维多孔共混丝蛋白支架机械性能随丝胶蛋白比例增加而增强,比例≥6%时压缩回弹率为100%.不同丝胶比例和不同制孔剂粒径范围对支架的体外酶降解率无显著影响.ADSCs-支架复合培养14 d组织学观察示ADSCs均良好附于各支架上,细胞形态多样,胞浆丰富,核浓缩,于细胞周边可见淡染的ECM.体内植入60 d组织学观察显示丝胶比例不同的共混丝蛋白支架体内降解缓慢,炎性反应程度轻且无显著差异. 结论 添加比例≥6%的丝胶蛋白后三维多孔共混丝蛋白支架的机械性加强,为进一步研制高强度的丝蛋白支架奠定了基础.
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丝胶蛋白对维持性血液透析患者尿毒症性瘙痒疗效的研究
目的 研究丝胶蛋白治疗尿毒症性瘙痒的安全性和有效性.方法 采用随机双盲设计,将25例尿毒症性瘙痒患者随机分为试验组和对照组,每例患者肢体瘙痒处按分组涂抹丝胶蛋白或安慰剂,分别在试验前和试验6 w后,检测患者肢体瘙痒处皮肤水化程度、色素沉积面积等指标,并采用视觉类比标度等对瘙痒改善进行评价.结果 试验组(使用丝胶蛋白制剂)自觉瘙痒评分较试验前明显改善(P<0.05),对照组(使用甘油制剂)自觉瘙痒评分无明显改善(P>0.05);皮肤水分含量试验组较对照组增加,色素沉着面积均较对照组减小(P<0.05),且未出现不良反应病例.另外,试验前后两组在生化指标、血红蛋白、甲状旁腺激素等指标比较无统计学差异(P>0.05).结论 丝胶蛋白治疗尿毒症性瘙痒症,可显著减轻临床瘙痒症状,并增加瘙痒处皮肤水化程度,减少瘙痒处皮肤色素沉着面积,且安全性好.
