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减体积肝移植模型大鼠肝脏能量差异蛋白的表达
背景：目前，蛋白质组学是一项比较成熟的科研技术，已经在肝移植基础研究领域中初步得到应用，但在大鼠减体积肝移植相关研究中的应用未曾报道。
目的：应用蛋白质组学相关技术探讨大鼠减体积肝移植后与肝脏能量代谢蛋白相关的差异蛋白。
方法：肝移植的供体是Lewis雌性大鼠，受体是Wistar雄性大鼠，供受体体质量差约20 g；移植肝质量/受体肝质量≈50%。采用改良减体积肝移植模型。获取供体肝组织过程中按照要求进行减体积，修整供体肝脏，将门静脉和肝下下腔静脉分别套入不同型号的套管以备套入受体的门静脉和肝下下腔静脉，胆道用细小支撑管植入供体的胆管中以备插入到受体的胆管中；后进行受体的肝移植，受体先切除受体的原来肝脏组织，然后将准备好的供体肝脏植入受体中。造模后1，3和7 d获取移植肝脏组织，然后与预先获取冻存的供、受体肝脏组织应用蛋白组学技术建立双向凝胶电泳图谱，再利用串联质谱分析及数据库对差异表达的蛋白质点进行鉴定。
结果与结论：采用变化倍数大于10倍为标准进行差异蛋白点的选择，结果总共发现了72个差异点，通过鉴定，终32个蛋白的功能比较明确，其中有ATP合成酶β亚基、电子转化黄素蛋白β多肽和质子转运ATP合成酶3个蛋白参与了细胞能量代谢的过程，其分布于肝移植后的第1和7天，占6%。 -
构建截肢创伤模型大鼠肝脏功能变化及硫化氢的影响
背景：截肢是一种特殊类型的创伤，创伤导致肝脏损害的机制及硫化氢对肝脏的作用目前尚不明确。目的：探索构建截肢创伤模型大鼠的肝脏损伤，以硫化氢(H 2 S)对其的影响。
方法：将Wistar大鼠和SD大鼠分别随机等分为正常组、截肢后6，12，24，72 h组、硫氢化钠(NaHS)组、炔丙基甘氨酸组和为正常组、截肢后6 h组、NaHS组、炔丙基甘氨酸组。除正常组外所有大鼠完全截断左侧于膝关节上方1.2-1.4 cm处结构，并在结扎血管后剪断左侧股静、动脉，建立左后肢的截肢模型大鼠。NaHS组及炔丙基甘氨酸组大鼠分别于截肢后即刻腹腔注射28μmol/kg NaHS和50 mg/kg炔丙基甘氨酸。
结果与结论：与正常组相比，截肢后6h组大鼠肝脏和线粒体结构出现了损伤性改变，血浆及肝脏髓过氧化物酶、丙二醛、H2S/胱硫醚γ-裂解酶水平、血浆及肝脏髓过氧化物酶、丙二醛、肝脏线粒体呼吸控制率、膜电位及ATP酶活性明显降低(P<0.05)，NaHS干预后H 2 S/胱硫醚γ-裂解酶水平及以上指标明显升高(P<0.05)，但血浆转氨酶并未明显变化(P>0.05)。应用炔丙基甘氨酸后，以上除线粒体指标无明显变化外，多表现为进一步降低，转氨酶也明显下降(P<0.05)。说明H 2 S可减轻截肢模型大鼠肝脏组织脂质过氧化、炎症反应，并使线粒体功能明显改善，但并未减轻肝脏功能的受损。 -
肝门静脉海绵样变性模型大鼠组织抑制因子及基质金属蛋白酶表达与周围血管新生
背景：目前国内外尚无有效治疗肝门静脉海绵样变性的策略，且其病因的基础研究报道较为鲜见。
目的：拟建立大鼠门静脉海绵样变性模型，检测基质金属蛋白酶2，9，基质金属蛋白酶组织抑制剂1，2在大鼠门静脉及其周围组织的表达及周围血管新生中的作用。
方法：SD大鼠80只随机分为3组。以门静脉部分缩窄法复制门静脉海绵样变性的大鼠模型，以21 G钝针头操作。模型组和假手术组分别设术后2，4，6周3个时间点，对照组即不做任何处理的正常SD大鼠(造影后取材)。各组分别于处理后不同时间点行门静脉造影，免疫组织化学检测血管内皮细胞标记物CD31观察门静脉周围血管变化，并使用实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测大鼠门静脉及其周围组织的基质金属蛋白酶2，9，基质金属蛋白酶组织抑制剂1，2 mRNA的含量和蛋白的表达。
结果与结论：门静脉造影及血管内皮细胞标记物 CD31免疫组织化学显示，模型组门静脉周围新生血管明显增多。RT-PCR与免疫组织化学结果分析显示：对照组和假手术组基质金属蛋白酶2 mRNA及蛋白表达均较同期模型组低(P<0.01，P<0.05)，基质金属蛋白酶9 mRNA及蛋白表达均较同期模型组低。模型组基质金属蛋白酶组织抑制剂1，2各个时间段的表达水平与对照组和假手术组相比差异无显著性意义(P >0.05)；模型组造模后第2周基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶组织抑制剂2比值明显高于对照组和假手术组同期(P <0.05)。结果提示，构建的门静脉海绵样变性的模型大鼠死亡率低，成模率高，且比较稳定。基质金属蛋白酶2，9表达升高以及基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶组织抑制剂2的比值失衡，可能是大鼠门静脉海绵样变周围血管新生的分子机制之一。 -
减体积肝移植模型大鼠肝脏组织miRNAs表达谱变化
背景：活体肝移植后肝脏再生是影响肝移植预后的关键因素，目前尚未见调控活体肝移植术后肝脏再生的特异性微小RNA(miRNA)的报道。目的：分析miRNAs在大鼠减体积肝移植后各时间点表达谱的变化，挑选并验证目的miRNAs，为大鼠减体积肝移植后肝脏再生干预策略提供靶标miRNAs，为临床活体肝移植后肝脏再生研究提供理论依据。方法：分别建立大鼠减体积肝移植模型和假手术模型，利用miRNAs基因芯片技术检测miRNAs表达谱的差异。在差异表达的miRNAs中挑选出目的miRNAs进行实时定量PCR检测，验证芯片结果的可信性。结果与结论：与假手术组大鼠肝组织相比，大鼠减体积肝移植肝脏组织中表达上调的miRNAs有11个，分别为let-7b-5p，let-7c-5p，miR-101a-3p，miR-103-3p，miR-130a-3p，miR-142-5p，miR-186-5p，miR-199a-3p， miR-21-5p，221-3p，miR-34a-5p；表达下调的miRNAs有4个miR-26b-5p，miR-150-5p，miR-19a-3p， rno-miR-146-5p。将挑选出的目的miRNAs进行PCR验证发现，miR-221-3p，miR-199a-3p在24 h，48 h，1周表达量与所对应的芯片结果近似，各自变化趋势与芯片结果一致，说明miRNA芯片结果可信。结果证实，大鼠减体积肝移植后伴有miRNAs表达谱的变化，实验挑选并验证了目的miRNAs。
