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正常和退变腰椎间盘蛋白质的双向电泳和质谱鉴定
背景:近年来对于退变腰椎间盘组织蛋白质成分改变的研究取得了很大进展,但是对于正常和退变腰椎间盘整体蛋白质成分改变的分离和差异鉴定却鲜见报道.目的:建立正常和退变腰椎问盘蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨腰椎间盘退变的生物学机制.设计、时间及地点:对比观察,于2007-06/2008-12在南方医科大学病理生理实验室完成.材料:由自愿者提供的正常和退变腰椎间盘组织各6例,年龄21～45岁,其中男9例,女3例;取材范围L3-L5.方法:氯化铯梯度离心去除正常和退变腰椎间盘组织蛋白多糖,通过崮相pH梯度(IPG)等电聚焦和梯度聚丙烯酰胺双向电泳分离蛋白质,分析电泳图像,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对差异蛋白质点进行分析鉴定.主要观察指标:正常腰椎间盘及退变腰椎间盘组织IPG等电聚焦双向凝胶电泳结果.结果:双向电泳显示正常和退变腰椎间盘蛋白质图谱差异显著,从中选取16个差异明显的位点进行质谱仪分析,确定了6种具有显著性意义的差异蛋白质.结论:双向电泳可有效地分离正常和退变腰椎问盘组织蛋白质,通过质谱仪鉴定可以确定其之间差异蛋白质的性质.
关键词： 腰椎间盘 退变 蛋白质组 双向电泳 基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪 -
人椎间盘软骨细胞外基质小分子蛋白的双向电泳和质谱鉴定
目的初步研究双向电泳和质谱鉴定在人椎间盘的蛋白质组特性研究中的价值和作用,为进一步研究椎间盘疾病寻找有效途径.方法取人的正常椎间盘组织(包括纤维环和髓核),针对细胞外基质分子蛋白进行蛋白萃取,通过氯化铯梯度离心去除蛋白多糖,通过固相pH梯度(IPG)等电聚焦和梯度聚丙烯酰胺双向电泳分别分离纤维环和髓核的蛋白质,分析电泳图像,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对蛋白质点进行分析鉴定. 结果双向电泳显示,纤维环和髓核的细胞外基质小分子蛋白无明显差异,纤维环和髓核中的小分子蛋白在pH 3～10、分子量16～250 kd范围内能被很好地分离.对各蛋白质点行质谱仪鉴定,分别确定了其中相同的19种蛋白质.结论双向电泳可有效地分离椎间盘组织中细胞外基质小分子蛋白,通过质谱仪鉴定可以确定其组成成分,为进一步研究椎间盘软骨细胞外基质小分子蛋白的功能及在椎间盘病变中的改变和所起的作用打下基础.
