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聚羟基烷酸酯与犬骨髓间充质干细胞的体外相容性
背景:聚羟基烷酸酯是将具有良好生物相容性的高强度高模量的聚羟基丁酸脂与聚羟基戊酸脂按一定比例组合,采用熔铸颗粒沥取法制备的新犁支架,经检测其具有高孔隙度的三维网状结构、良好的生物降解性能等优良特性.目的:评价聚羟基烷酸酯作为组织工程支架与犬骨髓间充质干细胞的生物相容性.设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2003-06/2004-03在中山大学组织胚胎实验室完成.材料:聚羟基烷酸酯支架和膜的孔隙率>85%,孔径大小为100～350 μm.方法:原代培养犬骨髓间充质干细胞,传至三四代后,接种至聚羟基烷酸酯膜和泡沫样三维支架上,以单纯细胞培养为对照组.主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞形态;于培养1,2,3周采用40g/L多聚甲醛固定,常规组织切片,苏木精-伊红染色:在培养5,10,14 d用Hoechs33258荧光法定量测定细胞内DNA含量,BCA泫测定蛋白质含量.结果:倒置显微镜观察聚羟基炕酸酯纤维较粗,且透光性差,在相差显微镜下不易观察.第3,4代骨髓间充质干细胞接种全聚羟基烷酸酯膜上2 h后即大部分黏附,3 d后伸展良好,呈纺锤彤或梭形,培养接种1周后,取2个膜状聚羟基烷酸酯固定,苏木精-伊红染色后,见骨髓间充质干细胞增殖可.培养接种2周后,骨髓基质千细胞增殖明显,呈梭形密布于膜状聚羟基烷酸酯上.细胞在聚羟基烷酸酯三维支架的孔隙内立体生长,1周开始细胞间连接,3周广泛连接,分泌大量基质;培养接种3周后,骨髓间充质干细胞增殖较第2周无明显变化.定量测定接种的细胞内DNA含量和蛋向质含量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05).结论:聚羟基烷酸酯作为骨髓间充质干细胞的组织工程支架材料,具有良好的生物相容性.
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载体的组成对地西泮微球释药性能的影响
以天然细菌合成的可降解生物材料聚-3-羟基丁酸酯(poly 3-hydroxybutyrate,PHB),羟基丁酸酯-羟基戊酸酯共聚物（polyhydroxybutyrate-hydroxyvalerate,PHBV),以及PHBV与D,L-PLA共混物，PHBV与明胶（gel）双层结构材料作为药物载体，以抗焦虑药物地西泮(diazepam，DZP)为模药，用O/W单乳化与O/W/O双乳化溶剂蒸发法，制备了地西泮缓释微球（DZP-MS）。微球平均粒径约30～40 μm，平均载药量15%～20%，包封率59%～81%。用扫描电镜观察与比较了4种微球结构形态，阐述了载体材料机构对释药性能影响，初步研究了PHBV/PLA微球动物体内药代动力学。
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聚羟基烷酸酯与绵羊骨髓基质干细胞相容性的研究
目的 评价聚羟基烷酸酯(PHBV)作为组织工程支架与绵羊骨髓基质干细胞(BMSCs)的生物相容性.方法 原代培养绵羊BMSCs,传至2～3代后,接种至PHBV膜和泡沫样三维支架上,光镜和扫描电镜观察细胞形态,计数1、2、6 h时的细胞黏附率;并以接种至培养板上细胞为对照组,每日细胞计数,绘制生长曲线;按培养液量与支架体积10 mL/cm3为标准浓度制备浸提液,并制备标准浓度1/16～16倍的浸提液,以MTT法检测细胞毒性;流式细胞仪分析接种到材料上的细胞周期,计算增殖指数;BMSCs接种于PHBV三维支架上4、8、12 d,以Hoechst33258荧光法定量测定细胞内DNA含量,BCA法测定蛋白质含量.结果 第3代BMSCs接种至PHBV膜上2 h后即大部黏附,黏附率75.6%,与对照组相比差异无统计学意义,绘制生长曲线见细胞生长与对照组无差异;MTT法检测见9个浓度梯度的浸提液毒性均为0级;光镜和扫描电镜观察见细胞接种于PHBV膜上2 h后大部分黏附,3 d后伸展良好,呈纺锤形或梭形,在三维支架的孔隙内立体生长,1周开始细胞间连接,3周广泛连接,分泌大量基质;流式细胞分析见接种于材料上的细胞周期无变化;接种至PHBV三维支架上的细胞内DNA、蛋白质浓度与对照组比较无差异.结论 PHBV作为BMSCs的组织工程支架材料,具有良好的生物相容性.
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聚羟基烷酸酯、聚丁二酸丁二酯及其共混材料的细胞相容性评价比较
取家兔的骨髓间充质干细胞(MSCs)分别种植到聚羟基烷酸酯(PHBV)、聚丁二酸丁二酯(PBS)、及其二者共混材料(PHBV/PBS)上,每组材料又分为有孔和实心两种构型.用MTT实验、乳酸脱氢酶(LDH)实验、甲苯胺蓝染色和电镜等方法,观察MSCs在材料上的生长情况.比较三种材料六种构型分别对MSCs黏附和增殖的影响.结果以共混物实心材料的毒性低,细胞增殖率高.甲苯胺蓝染色结果显示兔MSCs在共混实心材料上的生长佳,扫描电镜结果显示兔MSCs与共混实心材料黏附良好.共混物实心材料很有希望成为制备组织工程血管新型的支架材料.
