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骨髓间充质干细胞向肝样细胞的诱导及分化
背景:研究表明,在体外提供肝细胞及成纤维细胞生长因子等多种因子可诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化,但对其诱导的佳环境还处于摸索阶段.目的:观察体外应用肝细胞生长因子和成纤维生长因子4等多种因子联合诱导骨髓间充质干细胞向肝样细胞的分化能力.方法:采用全骨髓贴壁培养法分离、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,培养第3代时用肝细胞生长因子、成纤维生长因子4、胰岛素铁硒传递蛋白及地塞米松等联合诱导其向肝样细胞的分化.于诱导7,14,21 d后观察细胞形态变化,RT-PCR检测细胞白蛋白、甲胎蛋白、细胞角蛋白的mRNA表达;于诱导14,21 d行PAS糖原染色检测,并采用免疫细胞荧光法检测细胞白蛋白表达.结果与结论:随着诱导时间的延长,骨髓间充质干细胞表现为肝细胞样,并呈集落生长,肝细胞特异性标志物逐渐出现和成熟.细胞诱导至7 d出现甲胎蛋白mRNA表达,14 d表达增高,21 d时表达下降;14 d时细胞角蛋白18、白蛋白 mRNA和糖原出现表达,并随时间延长表达逐渐增加.细胞诱导14 d时,胞浆白蛋白出现表达,至21 d时表达增强.证实骨髓间充质干细胞在肝细胞生长因子、成纤维生长因子4等多种因子诱导作用下,具有强大的向肝细胞分化能力.
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骨髓间充质干细胞及其向肝样细胞分化的潜能
背景：研究表明，在一定条件下骨髓间充质干细胞可诱导分化为肝样细胞，为治疗急性肝衰竭等终末期肝病提供了新的思路。目的：对骨髓间充质干细胞的发现、分离培养、诱导分化及应用前景等方面做一综述。方法：计算机检索中国期刊网全文数据库以及PubMed数据库1999至2014年期间有关骨髓间充质干细胞及其向肝样细胞分化的文章。检索词分别为“肝样细胞，骨髓间充质干细胞，细胞分化”和“hepatocyte-like cel s， bone marrow mesenchymal stem cel s，differentiation”。后选择52篇文章纳入结果分析。结果与结论：目前，肝组织工程的首要问题是寻找性状稳定具有肝特异性功能的种子细胞，成熟肝细胞获取难度较大，并具有产生免疫排斥反应、体外培养困难等缺陷，严重限制了肝移植的开展。骨髓间充质干细胞具有多向分化、自我更新快、易于扩增及培养等优点，被认为是有前途的细胞来源。已有研究表明骨髓间充质干细胞在体内外均可分化为肝细胞，并具有肝细胞的合成和分泌功能。但如何大量扩增此类细胞的同时又能保持其良好的分化潜能、体外培养的佳条件、诱导分化机制和临床应用的安全性等尚需进一步研究和探讨。
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FGF4在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用
目的 观察成纤维生长因4(FGF4)在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用.方法 取乳腺癌组织及癌旁正常组织各40例份,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA.培养正常乳腺细胞株MCF-10A、低转移乳腺癌细胞株T47D、高转移乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA,Western blotting法检测FGF4蛋白.收集T47D,利用pCDNA3.1-FGF4构建过表达FGF4的T47D稳定细胞株T47D-FGF4-oe,以只转染pCDNA3.1的细胞株T47D-NC作为作为阴性对照组;收集MDA-MB-231,利用RNA干扰技术敲除FGF4构建稳定表达FGF4-shRNA的细胞株MDA-MB-231-FGF4-si,以MDA-MB-231-NC作为阴性对照组;Westernblotting法检测FGF4蛋白,MTT实验及划痕实验检测细胞增殖、迁移能力.结果 乳腺癌组织中FGF4 mRNA表达高于癌旁组织(P＜0.05).CF-10A、T47D细胞FGF4 mRNA和蛋白灰度值均低于MDA-MB-231细胞,T47D细胞FGF4蛋白灰度值低于MDA-MB-231细胞(P均＜0.05).T47 D-FGF4-oe细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度高于T47D-NC细胞,划痕距离小于T47D-NC细胞(P均＜0.05).MDA-MB-231-FGF4-si细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度低于MDA-MB-231-NC细胞,划痕距离大于MDA-MB-231-NC细胞(P均＜0.05).结论 FGF4在乳腺癌中显著高表达,并有促进乳腺癌细胞株增殖及转移的作用.
