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5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷标记大鼠骨髓间充质干细胞的有效性
背景:深入准确地研究骨髓间充质干细胞在体内外增殖、分化的规律,寻找安全、有效、灵敏度高、特异性强、简便的标记活细胞的方法至关重要.目的:探索5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的有效性及对其增殖能力的影响.方法:全骨髓贴壁法培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞至第3代.将细胞以5×107 L-1浓度接种于96孔板中,掺入法加入终浓度为0,10,20,50 μmol/L 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷,分别在培养24,48和72 h检测5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷标记细胞的阳性率、标记后的细胞形态,并绘制标记细胞的生长曲线.结果与结论:各浓度组标记率均随标记时间延长而升高(P < 0.05);各时间点标记率随标记浓度的升高而增加,但其差别无显著性意义(P > 0.05).10 μmol/L 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶标记骨髓间充质干细胞72 h即可获得良好的标记率.标记前后各组间充质干细胞生长曲线均呈"S"形.说明在实验浓度范围内应用5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷体外标记骨髓间充质干细胞有效,不影响细胞的增殖,且10 μmol/L 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞72 h即可获得良好的标记率.
关键词： 细胞标记 骨髓间充质干细胞 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷 体外培养 组织工程 -
Edu标记的人脐带间充质干细胞在小鼠慢性输卵管炎模型中的分布与定位
目的:观察5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Edu)标记的人脐带间充质干细胞(hucMSCs)在小鼠慢性输卵管炎模型中的分布与定位.方法:用MoPn衣原体感染液阴道内注射建立小鼠输卵管炎模型,体外培养人脐带间充质干细胞,用10 μmol/L Edu培养液对hucMSCs孵育不同时间(0小时、24小时、48小时、72小时)进行标记,同时检测标记组和未标记组细胞增殖和凋亡情况.感染后4周随机分成hucMSC治疗组及PBS对照组,感染后8周,亚甲蓝通水试验观察小鼠输卵管有无积水、阻塞等慢性输卵管炎表现,病理切片HE染色观察组织形态学改变,荧光共聚焦显微镜下观察Edu标记的hucMSCs移植治疗在小鼠输卵管中的分布与定位情况.结果:实验成功建立了小鼠慢性输卵管炎模型,Edu标记前后的hucMSCs的形态无明显差别,均为成纤维样细胞,细胞增殖及凋亡未见明显影响,细胞生长状态良好.10 μmol/L Edu标记hucMSCs孵育48小时即可获得良好的阳性细胞标记率(45.53±1.19)％.Edu标记阳性的hucMSCs主要分别在输卵管间质中.hucMSCs治疗能够缓解输卵管积水、阻塞情况,减轻慢性炎症.结论:在小鼠慢性输卵管炎模型中可观察到Edu标记的阳性hucMSCs,Edu标记技术可用于hucMSCs在小鼠慢性输卵管炎模型中定位的研究.
关键词： 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷 脐带 间充质干细胞 输卵管炎
