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神经干细胞移植治疗帕金森病的实验研究
目的:神经干细胞的发现为神经系统退行性疾病的治疗,提供了新的方法.通过碱性成纤维细胞生长因子( basic fibroblast growth factor,bFGF)反应性神经干细胞的移植 ,探讨神经干细胞在帕金森病 (Parkinson'disease,PD)治疗中的作用.方法:体外用 bFGF作为丝裂原培养 E16大鼠中脑神经干细胞,经 BrdU标记后植入 PD大鼠纹状体,了解 PD大鼠旋转行为的改善情况.结果:神经干细胞移植组 PD大鼠旋转行为改善明显.结论: bFGF反应神经干细胞移植对 PD有明显的治疗作用.
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人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性研究
目的 :探讨人胚脑源性神经干细胞特性及免疫原性,为神经干细胞 (neural stem cells,NSCs)移植治疗神经系统损伤奠定基础. 方法 :取孕 14周流产胚胎,无菌分离制备大脑神经细胞悬液,用 CD133标记的免疫磁珠分选 NSC,提取 NSCRNA,进行 RTPCR探测 MHCI, MHCII类分子 mRNA转录;用流式细胞术检测细胞表面 MHC-I, MHC-II类分子的表达;用正常成人外周血单个核细胞与培养 NSC共培养和 MTT比色分析法观察淋巴细胞增殖反应;将 NSC小鼠脑内接种,进行组织染色观察细胞移植部位的组织学变化. 结果:新分离和传代的 NSC均发生 MHCI, MHCII类分子 mRNA转录 , MHCI类分子在 NSC表面的表达百分率为 (5.66± 0.37)%, NSC在体外能诱发淋巴细胞增殖反应, A值为 1.09± 0.48和 1.15± 0.29,与阴性对照比差异有显著性意义 (P< 0.05). NSC小鼠脑内移植具有修复神经损伤作用,局部无淋巴细胞浸润和炎症. 结论 :人胚脑源性神经干细胞具有免疫原性,但直接脑内接种未发现引起明显的移植排斥反应.
关键词： 干细胞 神经系统 /细胞学 淋巴细胞增多 移植 主要组织相容性复合物 -
不同培养条件对神经干细胞分化的影响
目的:观察在不同血清浓度的诱导条件下神经干细胞定向分化为两类不同神经细胞的情况. 方法:通过无血清培养的方法,将原代培养所获得的神经干细胞克隆经传代纯化后,分别接种在加入 Neural Basal,DMEM/F12+ 50 g/L胎牛血清以及 DMEM/F12+ 100 g/L胎牛血清 3种不同的培养基的培养皿中, 7 d后进行 NF-200,GFAP免疫双标染色,在显微镜下随机选取 20个视野,记数神经元和胶质细胞的比例.并进行统计学处理. 结果:在无血清、 50 g/L以及 100 g/L胎牛血清浓度下,神经元与胶质细胞的比例分别为: 65%: 35% ,45%: 55% ,33%: 67%.在无血清和低血清浓度下,所分化的胶质细胞为原浆型星形胶质细胞,而在高血清浓度下则分化为纤维型星形胶质细胞. 结论:血清浓度的高低决定了神经干细胞分化为神经元和胶质细胞的比例,并且对所分化的胶质细胞的种类也有影响.在无血清条件下神经干细胞趋向于向神经元分化.
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HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的影响
目的 :观察 HD02对慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化的变化. 方法 :结扎双侧颈总动脉制备慢性前脑缺血大鼠模型 ,采用免疫单标和双标方法检测成体大鼠神经干细胞及分化的功能细胞.给予模型大鼠 HD02水煎剂灌胃,分别于造模后 15,30 d观察神经干细胞增殖分化的变化. 结果 :与正常对照组相比,慢性前脑缺血大鼠大脑皮质、室周区、海马 BrdU阳性细胞数和 BrdU+ NF200,BrdU+ NeuroD,BrdU+ GFAP免疫荧光双标细胞数于造模后 15 d明显增多 (P< 0.01),但造模后 30 d BrdU阳性细胞数和 BrdU+ NF200, BrdU+ NeuroD,BrdU+ GFAP免疫荧光双标细胞数与正常对照组相比差异无显著性意义( P >0.05) ; 造模后 30 d, HD02组 BrdU阳性细胞数和 BrdU+ NF200, BrdU+ NeuroD, BrdU+ GFAP免疫荧光双标细胞数较慢性前脑缺血组明显增多( P< 0.01). 结论 :HD02可显著增加慢性前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化能力.
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HD02对前脑缺血大鼠神经干细胞增殖分化蛋白的作用
目的观察神经干细胞( neural stem cell ,NSC)增殖分化相关蛋白 Notch1、 hes5 、 Mash1 、 NeuroD在 HD02促进慢性前脑缺血大鼠 NSC增殖分化中的作用.方法雄性 SD大鼠 30只,分为正常对照组( 6只)、模型对照组( 12只)、 HD02组( 12只) ,后两组又分成缺血后 15, 30 d小组,每组各 6只,制作 SD大鼠前脑缺血模型,利用 Western blot方法检测 NSC增殖分化相关蛋白变化.结果与正常对照组比较,造模后 15, 30 d、慢性前脑缺血大鼠 NSC增殖分化相关蛋白表达水平显著升高( t=7.42～ 38.16,P< 0.01);与模型对照组比较, HD02可明显表达明显增加 Notch1,hes5,Mash1,NeuroD表达水平( t=3.17～ 36.55,P< 0.05或 P< 0.01).结论 HD02能增加慢性前脑缺血大鼠 NSC增殖分化相关蛋白表达,这可能与 HD02促进 NSC增殖分化有关.
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Numb基因在培养神经干细胞中的表达
目的观察参与细胞发育分化和细胞非对称性分裂的 notch信号传导路的分子 Numb在体外培养的神经干细胞内的分布和表达 , 以期为在体外控制神经干细胞的分化提供新的线索.方法取孕 14 d( E14) Balb/c近交系小鼠胚胎 ,采用无血清培养技术,在体外进行神经干细胞克隆的培养传代,经过免疫细胞化学鉴定后,用 Numb特异性引物对培养的神经干细胞进行 RT-PCR分析, PCR产物经克隆测序后,用地高辛标记,对神经干细胞克隆进行原位杂交.结果在培养的神经干细胞内有大量细胞 (>95% )均为 Numb基因表达信号阳性;干细胞克隆内部中心和边缘相互间未见明显差别.结论 Numb基因可能在神经干细胞的增殖和分化过程中起重要作用.
