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淫羊藿苷上调miR-519d表达抑制人SKOV3卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭
目的 淫羊藿苷(Icariin)对人SKOV3卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其可能的机制.方法 针对SKOV3细胞,给予Icariin不同浓度处理不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖的变化;应用realtime PCR方法检测Icariin处理不同时间后miR-519d在SKOV3细胞中的表达变化;利用LipofectAMINE 2000将antimiR-519d以及其阴性对照质粒载体转染至SKOV3细胞,再给予Icariin,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力变化.结果 Icariin显著抑制了SKOV3细胞的增殖,并且呈时间和剂量依赖;随时间变化,Icariin显著上调了miR-519d在SKOV3细胞的表达水平;转染anti-miR-519d后,Icariin的作用被阻断,SKOV3细胞的增殖,以及迁移、侵袭能力基本恢复.结论 miR-519d参与了Icariin抑制SKOV3细胞的增殖,迁移和侵袭的调控过程.
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HOTAIR通过靶向抑制miR-519d促进人卵巢癌SKOV3细胞增殖
目的 研究HOTAIR对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响以及可能机制.方法 使用LipofectamineTM2000试剂将HOTAIR过表达慢病毒载体以及HOTAIR沉默慢病毒载体分别稳定转染SKOV3卵巢癌细胞后,应用Real-time PCR验证其转染效率;应用CCK-8法检测HOTAlR对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响;应用Real-time PCR检测人SKOV3卵巢癌细胞中miR-519dmRNA表达变化.应用双荧光素酶报告基因验证HOTAIR和miR-519d存在靶向结合并明确其结合位点.结果 和对照组相比,HOTAI过表达显著促进了人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,极大降低了miR-519d在SKOV3细胞中的mRNA水平;HOTAIR和miR-519d存在靶向结合,并明确了其结合位点;miR-519d过表达显著抑制了人卵巢癌SKOV3细胞增殖能力;miR-519d过表达有效阻断了HOTAI促进SKOV3细胞增殖的作用.结论 HOTMR能够通过靶向抑制miR-519d,提高人卵巢癌SKOV3细胞的增殖能力.
关键词： HOTAIR miR-519d 增殖 人卵巢癌SKOV3细胞 -
miR-519d/Twist1轴介导BrMC抑制SMMC-7721源性肝癌干样细胞体外致癌能力
目的 探讨8-溴-7-甲氧基白杨素 (8-bromo-7-methoxy-chrysin, BrMC)是否通过上调 miR-519d,下调 Twist1 表达,进而抑制SMMC-7721 源性肝癌干样细胞( liver cancer stem cell-like cells, LCSLCs)体外致癌能力.方法 用球培养法从SMMC-7721细胞系得到第2 代球细胞,命名为 LCSLCs.不同浓度BrMC (1.0、3.0、10.0 μmol·L-1)处理LCSLCs,实时定量PCR检测miR-519d表达水平;球形成和琼脂集落形成实验评价体外致癌能力;荧光素酶报告基因实验和West-ern blot分析Twist1转录活性和蛋白表达;miR-519d模拟物或Twist1基因转导探讨BrMC作用的分子机制.结果 与SMMC-7721 细胞比较, LCSLCs 的 miR-519d 低表达,而Twist1蛋白高表达. BrMC(1.0、3.0、10.0 μmol·L-1)浓度依赖性降低LCSLCs球形成和琼脂集落形成率;并上调miR-519d表达、下调Twist1 蛋白表达.荧光素酶报告基因实验证实,miR-519d可以直接靶向Twist1 mRNA 3′非翻译区,并调节蛋白表达. miR-519d 模拟物增强 BrMC (3.0 μmol· L-1)的作用,然而,Twist1基因转导有效逆转BrMC (3. 0 μmol ·L-1)的效应.结论 BrMC通过调节miR-519d/Twist1信号轴,抑制SMMC-7721源性LCSLCs体外致癌能力.
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MiR-519d靶向调控OCT4抑制膀胱癌细胞系5637增殖
目的:探讨miR-519d对膀胱癌细胞系5637增殖的影响及分子机制.方法:通过转染miRNA mimics在膀胱癌细胞系5637中过表达miR-519d,分别利用MTS及细胞集落形成试验,检测膀胱癌细胞系5637增殖能力的改变.通过双荧光素酶报道实验和Western Blot方法验证miR-519d对OCT4的靶向调控.利用OCT4特异性干扰RNA证实miR-519d通过靶向调控OCT4抑制膀胱癌细胞系5673增殖.结果:在膀胱癌细胞系过表达miR-519d后,细胞活性、增殖能力明显下降;双荧光素酶报道实验结果表明,相对于各对照组,共转染OCT4 3'UTR载体与miR-519d组荧光素酶相对活性明显降低(P＜0.05).过表达miR-519d后5637细胞中OCT4蛋白表达下调.利用siRNA特异性下调OCT4表达后,5637细胞活性及增殖能力同样受到抑制.结论:miR-519d能靶向结合OCT4 3'UTR序列,通过下调OCT4的表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖.
