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毒死蜱对大鼠脑组织RAGE介导Gq-PKC信号转导途径影响
目的 探讨48％毒死蜱(CPF)对大鼠胆碱酯酶活力及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)介导的Gq-蛋白激酶C(PKC)信号转导途径影响.方法 将大鼠随机分为CPF低(1/40LD50)、中(1/20LD50)、高(1/10LD50)3个剂量组和生理盐水对照组,经口染毒28 d后,用三氯化铁比色法检测大鼠全血胆碱酯酶活力;荧光免疫组化法检测脑组织RAGE、PKC的表达,蛋白质印迹法(western blot)检测脑组织中Gq蛋白的表达.结果 全血胆碱酯酶活力随染毒剂量的增加而降低,对照组和CPF低、中、高剂量组三氯化铁比色法测定值分别为(33.75±5.03)、(29.70±4.01)、(10.40 ±1.95)、(5.25±0.05);RAGE、Gq蛋白、PKC的表达均随染毒剂量的增加而增高,对照组和CPF低、中、高剂量组RAGE免疫反应平均光密度值分别为(0.32±0.01)、(2.01±0.09)、(5.03±0.05)、(8.02±0.04),Gq蛋白的相对含量分别为(0.84±0.01)、(0.90±0.01)、(1.10±0.02)、(1.59±0.01),PKC免疫反应平均光密度值分别为(0.12±0.01)、(2.01±0.03)、(3.52±0.02)、(5.01±0.08).结论 CPF主要通过抑制胆碱脂酶的活力对机体造成损伤,RAGE、Gq蛋白、PKC的高表达可能参与了CPF中毒神经系统病理性信号转导.
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SiO2刺激肺泡巨噬细胞对晚期糖基化终末产物受体及配体的影响
目的 探讨SiO2刺激肺泡巨噬细胞(AM)对晚期糖基化终末产物受体(RAGE)及配体——钙粒蛋白(S100)、高迁移率组蛋白-1(HMGB1)的影响,以为矽肺的早期防治提供理论依据.方法 支气管灌洗法收集SD大鼠肺泡巨噬细胞进行纯化培养并计数细胞为1 ×106个/ml,分空白对照组和实验组,实验组加100 μg/ml SiO2,空白对照组加无血清培养液,培养4、24、48 h.用荧光免疫细胞化学方法、酶联免疫吸附法、Western blot检测肺泡巨噬细胞RAGE、S100和HMGB1的表达.将培养4、24、48 h的SiO2实验组及空白组AM培养上清液培养肺成纤维细胞24 h,用MTT法测量成纤维细胞增殖情况.结果 SiO2能诱导细胞S100、HMGB1的高表达并有时间-效应关系(P＜0.05),但会降低细胞膜RAGE表达,且低于空白对照组,亦具时间-效应关系(P＜0.05)；含SiO2的AM培养上清液能诱导肺成纤维细胞的增殖,也有时间-效应关系(P＜0.05).结论 RAGE在正常肺泡巨噬细胞膜上高表达；SiO2可以降低其表达.SiO2能诱导肺泡巨噬细胞分泌S100、HMGB1,且随作用时间的延长,分泌增多.SiO2的AM培养上清液能诱导肺成纤维细胞的增殖,且随作用时间的延长,数量增加.
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高迁移率族蛋白B-1和钙粒蛋白在矽肺发病中的作用
目的 探讨高迁移率族蛋白B-1 (HMGB1)和钙粒蛋白(S100)在矽肺发病中的作用,为充分认识炎症在其中的地位提供新的理论依据.方法 选C56BL/6小鼠48只,分为6组:对照组及3、7、14、21、42天实验组,每组8只.进行支气管染矽尘,染尘浓度为200 mg/kg.在不同的观察时间处死动物,收集支气管灌洗液,离心后沉淀用于细胞计数.上清液用于检测HMGB1、S100和肿瘤坏死因子-α(TNF-α).分离肺组织,取右肺用Western blot检测RAGE.左肺做病理切片,光镜下观察肺组织的病理改变.结果 (1)支气管灌洗液中巨噬细胞和中性粒细胞在3d和21 d时表现高,与7、14、42 d比较差异有统计学意义(P＜0.05).(2) HMGB1和S100在染尘3～21 d时逐渐增高且具有时间效应关系(P＜0.05),42 d时有所降低.(3) TNF-α在3～14 d染尘时逐渐降低,21 d又升高,42 d时明显下降,且各时段间差异有统计学意义(P＜0.05).(4) RAGE表达水平随观察时间的延长明显降低,并具有时间效应关系(P＜0.05).(5)随着观察时段的延长,肺泡壁增厚,结构明显破坏,肺泡腔逐渐融合,肺组织炎性病灶增多,在42 d时形成了大量的纤维化,几乎看不清肺泡结构.结论 HMGB1和钙粒蛋白可能参与矽肺晚期炎症的形成,其生物学效应的发挥不依赖RAGE受体.
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晚期糖基化终末产物受体及其配体的肿瘤生物学效应
晚期糖基化终末产物受体(RAGE)作为信号传导受体介导晚期糖基化终末产物(AGE)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、钙粒蛋白(S100)、β粉样肽(A)等配体在细胞表面结合,激活细胞内多种信号传导机制,参与了糖尿病慢性并发症、炎症反应、神经再生、Alzheimer病、透析相关性淀粉样变(DRA)、动脉粥样硬化以及肿瘤生长、浸润转移等的生物学效应[1,2].
