首页 > 文献资料
-
基因转染树突状细胞联合免疫抗血吸虫感染作用
目的 探讨日本血吸虫Sj26和Sj23基因转染树突状细胞(DC)联合免疫抗血吸虫感染保护性免疫作用.方法 利用Sj26-Sj23基因转染、Sj26基因转染、Sj23基因转染、空质粒pcDNA3转染和未处理DC分别免疫BALB/c小鼠3次,攻击感染后计数成虫和虫卵.结果 Sj26-Sj23基因转染DC联合免疫小鼠诱导40.5%的减虫率和58.9%和减卵率,高于单独Sj26基因转染DC免疫组(34.5%和48.5%)和Sj23基因转染DC免疫组(32.6%和40.6%),亦明显高于空质粒pcDNA3转染DC组(16.8%和15.8%)和未处理DC组(14.6%和14.4%),Sj26基因转染DC免疫组和Sj23基因转染DC免染组的减卵率有差异有统计学意义.结论 Sj26-Sj23基因转染DC联合免疫可增强抗血吸虫感染的保护性免疫作用.
-
Sj 26基因转染树突状细胞抗血吸虫感染作用
目的探讨日本血吸虫Sj 26基因转染树突状细胞(DC)抗血吸虫感染保护性免疫作用.方法利用Sj26基因转染、空质粒pcDNA 3转染和未处理DC分别免疫BALB/c小鼠3次,攻击感染后计数成虫和虫卵.结果Sj26基因转染DC免疫小鼠诱导34.5%的减虫率和48.5%的减卵率,明显高于空质粒pcDNA 3转染DC组(16.8%和15.8%)和未处理DC组(14.6%和14.4%),空质粒pcDNA3转染DC和未处理DC组之间差异无统计学意义.结论Sj26基因转染DC可诱导抗血吸虫感染的保护性免疫作用.
-
日本血吸虫多价DNA疫苗的构建
目的构建日本血吸虫多价DNA疫苗. 方法在本室已构建的克隆载体pBluescript-Sj26、pBlue-script-Sj32及pBluescript-Sj23的基础上,根据Sj26 kDa、Sj32 kDa和Sj23 kDa基因序列分别设计一对引物,且在引物中引入1个含多肽接头甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸(G-G-S)的碱基序列.首先将Sj23基因连接入载体pBK中,构建重组质粒pBK-Sj23,然后将Sj26 kDa或32 kDa基因分别连接入载体pBK-Sj23中,构建成多价DNA疫苗pBK-Sj26-Sj23和pBK-Sj32-Sj23.对重组基因鉴定后,检测了质粒在小鼠肌肉中的表达情况. 结果多价DNA疫苗pBK-Sj26-Sj23和pBK-Sj32-Sj23转入了完整的Sj26、Sj23和Sj32基因.多价基因质粒能在小鼠肌肉组织中表达. 结论构建了日本血吸虫多价DNA疫苗.
-
日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞功能的影响
目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染对树突状细胞(DC)功能的影响.方法利用脂质体介导的基因转染技术将日本血吸虫Sj26基因转染DC,流式细胞术(FACS)检测Sj26基因转染的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应检测Sj26基因转染的DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用.结果Sj26基因转染后Sj26蛋白在DC中高表达,摄取抗原的能力降低,与pcDNA3转染的DC和未转染的DC相比,Sj26基因转染的DC能明显刺激混合淋巴细胞反应.结论Sj26基因转染DC后能促进DC的活化,增强DC的生物学活性.
-
Sj26和Sj23基因转染树突状细胞联合抗血吸虫感染的研究
目的 探讨Sj26和Sj23基因转染树突状细胞(DC)联合抗日本血吸虫感染保护性免疫机制.方法 BALB/c小鼠耳廓分别注射Sj26和Sj23基因转染DC(A组)、Sj26基因转染DC(B组)、Sj23基因转染DC(C组)、pcDNA3转染DC(D组)、未处理DC(E组)和RPMI-1640(F组),免疫3次,间隔2周,末次免疫后2周,每鼠经皮肤感染40条日本血吸虫尾蚴.ELISA法检测血清特异性IgG抗体、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经ConA和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4水平,噻唑蓝(MTT)法检测脾淋巴细胞增殖情况.结果 末次免疫后第2周,A组小鼠血清IgG抗体水平显著升高(P<0.001).血清IL-4的水平,各组免疫前、后无明显变化.血清IFN-γ水平,A组小鼠免疫后明显升高(P<0.01).经ConA和SEA刺激后,A组小鼠脾淋巴细胞诱生的IFN-γ水平显著增高,而IL-4水平显著降低(与F组比较,P<0.001).A组小鼠脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后的刺激指数均高于其他各组(与F组比较,P<0.001).结论 体液免疫和细胞免疫共同参与了Sj26和Sj23基因转染DC诱导的保护性免疫作用,其中Th1型免疫应答在抗日本血吸虫感染的保护性免疫中起主要作用.
-
血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性
目的 构建含日本血吸虫相对分子质量为26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应.方法 用RT-PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因.利用重组PCR技术,在Sj26基因的5′端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3′端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26.将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT-PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达.用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群.结果 经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达.免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P＜0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P＜0.05);CD8+细胞百分比高于空白对照组和空载体组 (均P＜0.05), CD4+细胞百分比没有显著变化(P＞0.05).结论 成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26, 表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上.pIRES-Sj26疫苗能增强BALB/c 小鼠的免疫应答反应.
-
日本血吸虫(大陆株)Sj26基因的克隆与序列分析
目的构建日本血吸虫(大陆株)26kDa谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26)基因的真核表达载体,并测定基因序列和进行序列分析.方法用PCR的方法特异性地扩增Sj26基因,并将此基因克隆于真核表达载体pcDN3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增鉴定,用双脱氧链末端终止法进行序列测定,应用BLAST方法分析Sj26基因序列并进行同源性比较..结果 PCR扩增得到特异的Sj26基因,双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3-Sj26重组质粒,测序结果获得的基因片段大小为651bp,编码217个氨基酸残基.基因序列同源性为99%.结论成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-Sj26.
-
日本血吸虫DNA疫苗辅以FQ2诱导小鼠保护性免疫的实验研究
目的探讨日本血吸虫Sj26GSTDNA疫苗辅以佐剂FQ2共同作用对小鼠的免疫保护作用.方法采用FQ2 12 μg/只分别与Sj26 GST DNA疫苗混合经股四头肌接种BALB/c小鼠,共接种3次,同时设Sj26 GSTDNA疫苗组与生理盐水对照组,接种后4周以日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后6周剖杀小鼠,计数减虫率和减卵率.结果FQ2+疫苗组的减虫率与减卵率分别为34.24%与41.12%,而疫苗组的减虫率与减卵率各为28.76%与29.03%,结果显示FQ2+疫苗组的减虫率与减卵率均高于疫苗组,减卵率差异显著(P＜0.05).结论FQ2对Sj26GST DNA疫苗有明显的增效作用,提高了DNA 26Kda疫苗对小鼠的保护作用.
