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习惯性流产患者血清抑制补体活性的研究
目的研究习惯性流产患者血清抑制补体活性的作用及意义.方法将经典补体溶血实验进行改进,在原有反应体系中加入习惯性流产患者血清,测定并计算血清抑制补体活性的百分抑制率(Inhibition %),以反映该血清抑制补体科学研究性的程度.结果有习惯性流产史的非妊娠妇女血清抗补体百分抑制率Inhibition %[(9.7±2.9)%]低于正常对照经产非妊娠妇女[(13±3)%],两者统计学差异有显著性(P＜0.001).结论习惯性流产患者抗补体作用较弱,可能是导致习惯性流产的免疫学病因之一,并提出可否采用脐血输注治疗习惯性流产的设想.
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人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定
目的 实现人补体受体1型(complement receptor type 1,CR1)活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达.方法 用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因,并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9,构建重组质粒pPIC9-CR1-SCR15-18,鉴定后测序;重组质粒电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中,菌落PCR技术筛选阳性转化株;经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达;Ni2*-NTA agarose亲和层析纯化目的蛋白,并用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性.结果 成功构建重组表达质粒pPIC9-CR1-SCR15-18;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中成功分泌表达;表达产物经镍柱快速纯化后,能够明显抑制补体的体外溶血.结论 在毕赤酵母中成功实现了CR1-SCR15-18蛋白的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体溶血的生物活性.
