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p,p’-DDE对原代培养的支持细胞周期的影响
目的探讨p,p’-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)细胞周期及凋亡的影响.方法 实验采用了从大鼠睾丸组织中分离的支持细胞进行离体原代培养,染毒剂量分别为10、30和50 μmol/L,通过流式细胞仪测定细胞凋亡情况.结果 在凋亡百分比中高剂量组(50μmol/L)与溶剂对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),30和50 μmol/L与溶剂对照组比较在G1、S、G2/M期都有显著的变化(P＜0.05).结论 浓度为50 μmol/L的p,p’-DDE对支持细胞周期有影响,可能引起细胞凋亡.p,p’-DDE可能诱导支持细胞凋亡,影响细胞周期,终可能影响生殖功能.
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磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在p,p’-DDE致青春期雄性大鼠生殖功能障碍中的作用
目的 探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶( PHGPx)在p,p’-DDE对大鼠睾丸生精细胞脂质过氧化及诱导生精细胞凋亡中的作用.方法 将20只健康清洁级50日龄雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组及低(20mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(100mg/kg)剂量P,P’-DDE染毒组,每组5只.采用腹腔注射方式染毒,注射容积为10ml/kg,每隔ld染毒1次,连续进行10d.测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和丙二醛(MDA)的含量.采用Western blotting方法和检测大鼠睾丸组织PHGPx蛋白相对表达情况,采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)测定大鼠睾丸组织PHGPx及B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated proteinX,Bax),细胞色素C(cytC)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3 )mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,60 mg/kgp,p’-DDE染毒组血清SOD、GSH-Px活力和睾丸组织PHGPx蛋白表达水平均降低,l00mg／kgP,P’-DDE染毒组大鼠睾丸组织中PHGPx、CytC、Apaf-1 mRNA表达水平和60 mg/kgP,P’-DDE染毒组Caspase-3 mRNA表达水平较高,60 mg/kg、100 mg/kgp,p’-DDE染毒组Bax mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PHGPx在P,P’-DDE所致男(雄)性生殖功能紊乱中起拮抗作用.
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p,p'-DDE致大鼠跨代雄性生殖毒性效应及Igf2 DMR2区域甲基化的可能机制
[目的]建立宫内p,p’-DDE暴露跨代大鼠模型,观察雄性子代生殖毒性是否具有亲源性遗传特征及可能的表观遗传机制.[方法] SPF级的SD大鼠于孕8～15天给予每天每千克体重100mgp,p,-DDE灌胃,另设溶剂对照组采用玉米油灌胃,孕鼠自由分娩,保留所有雄性仔鼠(F1代),同组别不同窝别的F1代仔鼠于出生后90天按雌雄比1:1交配,产生F2代仔鼠.染毒组和对照组雌雄F2代按以下分组设计两两交配后,产生F3代仔鼠,分组为:①雌雄均为对照组(C ♂-C♀),②雌雄均为染毒组(DDE ♂-DDE♀),③染毒组雄性与对照组雌性(DDE ♂-C♀),④对照组雄性与染毒组雌性(C ♂-DDE♀).用计算机辅助精子分析系统(CASA)分析3代雄性仔鼠成年后的精子质量,亚硫酸氢钠基因组测序法检测Igf2 DMR2区域甲基化水平,实时荧光定量PCR分析印记基因表达.[结果]p,p’-DDE可诱导F1、F2及F3代DDE♂-DDE♀、DDE♂-C♀精子数量和活力下降,F1代精子数量和活力分别从(70.63±11.79)×106/mL、(76.75±7.57)％下降至(50.00±13.08)×106/mL、(62.42±9.40)％;F2代精子数量和活力分别从(82.86±38.60)×106/mL、(82.14±6.44)％下降至(43.75±25.04)×106/mL、(60.88±25.03)％;F3代DDE ♂-DDE♀精子数量及活力分别从(68.89±41.37)×106/mL、(68.56±10.67)％下降至(21.66±4.83)×1&/mL和(29.33±32.70)％,F3代DDE♂-C♀精子数量和活力下降为(28.00±16.60)×106/mL和(34.60±31.60)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).F1～F3代雄性仔鼠精子细胞Igf2 DMR2区域(1、16、18位点)低甲基化,Igf2转录下调,H19转录上调,Igf2口基因的转录水平和Igf2 DMR2甲基化成正相关(r=0.8065).[结论] Igf2 DMR2区域甲基化改变可能在p,p’-DDE诱导的跨代雄性大鼠生殖毒性中起重要作用.
