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精子DNA完整性与精子形态的相关性研究
精子形态与其功能密切相关,任何形态上的缺陷都可能导致其功能下降,引起男性不育[1].已有研究证实,常规检查精液参数正常的男性不育患者可能存在精子DNA异常[2].精子DNA损伤可能影响辅助生殖技术(ART)的结局,增加复发性自然流产的发生率及卵胞浆内单精子注射(ICSI)后代的遗传风险等相关风险[3].因此精子DNA完整性检测不仅有助于探索不育的病因,而且有望成为ART治疗结局的重要评估手段[4].本研究通过对精液常规检查正常的男性精子形态学和精子DNA完整性检测,探讨精子形态学与精子DNA完整性的相关性以及年龄因素对精子形态和DNA完整性的影响.
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精子DNA损伤与宫腔内人工授精妊娠率关系
目的 探讨精子DNA损伤与宫腔内人工授精妊娠率的关系. 方法 收集36对夫妇共46个宫腔内人工授精(IUI)周期的男性精液进行分析,每份精液经优化处理后用于IUI,根据妊娠结局将患者分为妊娠组和非妊娠组,比较两组精子浓度、精子活动率、精子正常形态率及精子碎片化指数(DFI),分析精子DFI与IUI妊娠结局的关系. 结果 IUI妊娠组精子DFI为10.0％,比非妊娠组的20.2％低；妊娠组的精子浓度、精子活动率、精子正常形态率比非妊娠组高；精子DFI与精子浓度之间呈负相关,与精子活动率及精子正常形态率呈负相关.结论 精子DFI可能从精子浓度、活动力及形态等方面影响精子质量,是影响IUI妊娠结局的重要因素之一.
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培养洗涤对不育症精子DNA完整性影响的实验研究
目的 观察不育症精液经培养洗涤前后精子DNA完整性的变化.方法 60例少弱精症患者精液常规分析后分为2组,第1组采用人输卵管液(HTF)培养洗涤,为HTF组,另1组未经任何处理,为对照组,分别用单细胞凝胶电泳法(SCGE)测定精子DNA完整性.结果 与对照组比较,HTF组精液经HTF培养洗涤后,精子活力、活力分级(a+b)级均提高,精子总彗星细胞率、总彗星率较对照组降低,差异有统计学意义.结论 该研究对于探索精子DNA损伤与常规指标之间的相关性、提高少弱精症在辅助生殖技术中的成功率具有实际意义.
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益肾生精颗粒对肾阳虚型弱精子症及精子DNA异常的影响
目的 探讨中药益肾生精颗粒治疗肾阳虚型弱精子症伴精子DNA异常的疗效及机理.方法 将70例符合要求的患者随机分成两组,治疗组35例,对照组35例,治疗组采用中药益肾生精颗粒治疗,对照组采用多维元素片治疗,分别治疗3个月,观察两组治疗前后的精子参数变化.结果 治疗组、对照组的总有效率分别为85.7%和57.1%,治疗组治疗前后精子的浓度、总活力、前向运动、精子DFI比较有明显差别(P<0.01);对照组治疗前后的精子总活力、前向运动比较有明显差别(P<0.05);治疗组治疗后的精子浓度、总活力、前向运动、精子DFI明显优于对照组(P<0.05).结论 益肾生精颗粒能明显改善患者的精子浓度、总活力、前向运动、精子DFI,疗效优于多维元素片.益肾生精颗粒是治疗肾阳虚型弱精子症伴精子DNA异常的有效方法.
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益肾通络方治疗精索静脉曲张症不育患者30例
目的 通过精液质量、精子DNA碎片指数(DFI)等分析指标,研究益肾通络方对精索静脉曲张不育症患者的治疗作用.方法 收集符合纳入标准的该病患者66例,随机分2组,治疗组服用益肾通络方,对照组服用维生素E,治疗组在对照组治疗基础上服用益肾通络方,中间6例脱落,终60例患者纳入统计.结果 治疗组与对照组总有效率分别为83.33％、46.67％,治疗组结果显著优于对照组(P＜0.05).精液量方面,2组治疗后均无明显改变(P＞0.05);精予畸形率方面,治疗组治疗后明显降低(P＜0.05),对照组无明显改变(P＞0.05);2组治疗后均提高精子活力、精子浓度、活动率,降低精子DFI,治疗组结果优于对照组(P＜0.05).结论 益肾通络方具有较好的临床疗效,能显著提高精索静脉曲张不育症患者精子活力、浓度、活动率,精子DNA完整性及配偶妊娠率.
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ROS与精子质量的关系综述
ROS即reactive oxygen species,是需氧细胞在代谢过程中产生的一系列活性氧簇,包括:O2、H2 O2、O2-、-OH等.精子的一些正常的生理活动需要ROX,如获能、超活化、精卵质膜融合过程等.但过多的ROS对精子是有害的,可以通过影响精子形态、活动性、质量及功能包括DNA损害产生作用.精子正常的生理活动会产生ROS,而精索静脉曲张、糖尿病、吸烟、饮酒等因素可导致精子ROS升高,从而影响精子的质量.
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环磷酰胺对小鼠精子DNA的影响及姜黄素干预作用的研究
目的:探讨姜黄素对抗环磷酰胺致小鼠精子DNA损伤的保护作用.方法:成年昆明小鼠随机分成4组:正常组,模型组,姜黄素低、高治疗组.模型组和姜黄素低、高组小鼠按照40mg/kg,腹腔注射环磷酰胺(cp),连续5d,同时姜黄素低、高组小鼠每天给予姜黄素混悬液100mg/kg,200mg/kg灌胃;正常组及模型组小鼠予等量0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,共28d.观察小鼠精子低渗膨胀率,小鼠睾丸组织匀浆后测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量及小鼠精子DNA的完整性.结果:与模型组相比,姜黄素组睾丸组织SOD与GSH-Px含量等均明显升高(P＜0.05、P＜0.01),MDA、ROS含量明显降低(P＜0.05、P＜0.01),吖啶橙荧光染色法(AOT)显示:与模型组相比,姜黄素组小鼠精子DNA的完整性明显升高,有明显的统计学意义(P＜0.01).结论:环磷酰胺可破坏小鼠精子DNA的完整性,导致精子核成熟率下降;姜黄素可以改善环磷酰胺对小鼠精子DNA的氧化作用,提高精子DNA的完整性.
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H19差异甲基化位点MSRE-qPCR分析识别精子DNA新方法的可行性探究
目的:研究位于H19转录起始点-3390 bp的HhaI位点是否为差异甲基化位点,为精子DNA识别提供新依据.方法:从51份血样和20份精子样本提取基因组DNA,每个样本分别在同一反应体系中进行甲基化敏感酶HhaI消化和荧光定量PCR反应(MSRE-qPCR),扩增包含上述HhaI位点的114 bp片段.得到每个样本酶切前后的Ct值,用2-△△Ct计算各样本酶切前后模板DNA相对表达量,将其作为DNA甲基化水平.结果:51份血样中该HhaI位点甲基化水平为(44.4±23.8)％,20份精子DNA甲基化水平为(120.5±52.5)％,差异有统计学意义(P ＜0.001).结论:甲基化水平高于94％可识剐精子DNA,H19差异甲基化区114 bp序列的MSRE-qPCR分析为精子DNA的识别提供了一种新方法.
关键词： H19差异甲基化 甲基化敏感性限制性内切酶 实时定量PCR 精子DNA -
茯苓多糖体外对大鼠精子膜及 DNA 的保护作用
目的：观察茯苓多糖体外对大鼠精子膜功能、精子 DNA 和存活力的保护作用。方法取大鼠精子制备精子悬液，并分为正常组（PBS），生理盐水组，阳性药对照组（维生素 C 组）和茯苓多糖低、中、高剂量组（0.5mg/ml，1.0mg/ml 和5.0mg/ml）。各对照物及茯苓多糖分别与精子悬液共同孵育后，检测精子膜完整性、DNA 损伤程度及存活力。结果低、中、高浓度的茯苓多糖在相同的条件下均可增加精子存活时间，提高精子存活率和活力，降低精子 DNA 损伤比率，对精子膜功能和 DNA 均具有一定的保护作用。其中1.0mg/ml 和5.0mg/ml（中、高）的茯苓多糖组作用明显优于维生素 C 组( P <0.05或 P <0.01)。结论茯苓多糖对大鼠精子膜和 DNA 有明显的保护作用，并可延长精子的体外存活时间。
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精子DNA碎片检测与男性少弱精子症不育患者的相关性分析
随着社会的不断发展,不孕的夫妇逐年增多,约有15%的夫妻在结婚后一年内未能受孕而接受治疗,而又约5%的夫妻治疗后仍不能受孕.而其中由男性引起的不育症比例达到20%,并且这一比例有逐年上升的趋势.临床上对于男性的孕前检查主要局限于精液常规.精液常规的局限性在于只能反映精子的活力和质量,但是由于精液本身容易受到外界及时间的影响,以及不同操作人员操作中的差异,很难完整的评估男性的生殖能力.因此寻求新的评估方式成为现在急需解决的问题,近些年来精子DNA碎片检测成为一项评估男性精子功能的指标,成为研究男性少弱精子症不育患者的热点.因此本研究就精子DNA碎片检测与男性少弱精子症的不育患者的精液常规、精子形态学分析的相关性进行研究.
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活性氧与不育者精子DNA损伤相关性研究
目的 探讨活性氧(ROS)和不育者精子DNA损伤的关系.方法 收集40例精液标本,检测精液中过氧化脂质(LPO)水平及其精子DNA损伤程度.LPO水平以反应产物丙二醛(M DA)的产量表示,测定采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法;精子DNA损伤程度采用TUNEL法测定.结果 生育组MDA值为(8.243±3.076) μmol/L,不育组为(18.971±4.043) μmol/L,2组相比有极显著性差异(P＜0.01);生育组凋亡率(3.68±2.74)％,不育组凋亡率(10.15±4.39)％,2组比较有显著性差异(P＜0.01).结论 精子DNA损伤程度与由ROS介导的脂质过氧化反应水平呈正相关.
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益肾生精方对不育症患者精液质量及精子DNA的影响
目的 观察益肾生精方对弱精子症不育患者精液质量及精子DNA完整性的影响.方法 采用自身对照方法,对符合WHO不育诊断标准的60例患者采用益肾生精方治疗前后进行精液常规分析,用单细胞凝胶电泳法测定精子DNA完整性.结果 经益肾生精方治疗后,显效21例(35％),有效29例(48％),无效10例(17％).患者精液a级精子、a+b级精子平均百分率均较治疗前显著增加(P均＜0.05),精子数量有增加的趋势,但与治疗前比较未见明显差异(P＞0.05);单细胞凝胶电泳试验显示,精子总彗星细胞率较治疗前显著降低(P＜0.05).结论 益肾生精方具有提高不育症患者精子活力及改善精子DNA损伤的作用.
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自拟益肾生精方治疗少弱精不育症的研究
目的 观察益肾生精方治疗少弱精不育症患者的疗效.方法 将180例少弱精不育症患者随机分为2组,治疗组90例患者采用自拟益肾生精方治疗,对照组90例患者采用左卡尼丁口服液治疗,2组均以3个月为1个疗程.观察2组患者治疗后精液质量和精子DNA损伤改善情况,统计2组患者治疗效果.结果 治疗后2组患者精子活率、精子前向运动率、精子前向运动+非前向运动率(PR+NP)、精子计数、精子整体正常形态率均显著提高(P均<0.05),畸形精子指数、白细胞数及未成熟生精细胞数均显著下降(P均<0.05),正常形态精子<4％的例数显著减少(P均<0.05),且治疗组上述指标改善情况均显著优于对照组(P均<0.05).2组患者精子总彗星细胞率和Ⅰ级彗星细胞率均显著降低(P均<0.05),且治疗组均显著低于对照组(P均<0.05).治疗组配偶妊娠率为15.56％(14/90),对照组配偶妊娠率为8.89％(8/90),治疗组显著高于对照组(P<0.05).结论 益肾生精方可提高少弱精不育症患者的精子活力和数量,降低精子畸形率,减轻精子DNA损伤程度,改善精液质量,可明显提高配偶妊娠率.
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五子衍宗丸对精子DNA损伤及精子活力影响及机制
目的:观察五子衍宗丸对精子DNA损伤及精子活力的影响,探讨五子衍宗丸治疗不育症的作用机制.方法:将84例精子DNA损伤患者分为正常对照组、促性腺激素组、五子衍宗丸组,其中促性腺激素组、五子衍宗丸组分别给予促性腺激素、五子衍宗丸干预3个月.采用计算机辅助精子分析(computer-aided sperm analysis,CASA)系统检测精液常规参数,应用流式细胞术进行精子DNA完整性检测.观察五子衍宗丸对精子顶体酶活性及精子形态的影响.使用SPSS 17.0统计软件对治疗后各项指标进行数据分析.结果:治疗3个月后五子衍宗丸组精子总存活率、向前运动精子百分比、精子浓度、DFI以及精子顶体酶活性显著提高;精子形态未发生明显改变.结论:五子衍宗丸能一定程度上改善精子DNA损伤,提高精子活力及精子顶体酶活性.
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流产患者丈夫精子因素初步分析
目的:探讨流产的精子因素.方法:采用精液常规分析、精子形态分析、吖啶橙荧光染色方法对156例自然流产1～4次患者的丈夫及80例正常生育男性的精子进行分析.结果:对照组与流产组a级精子百分率、a+b级精子百分率、精子密度、精子活率、正常形态精子百分率、异常形态精子百分率、尾部异常精子百分率和精子DNA完整率方面差异均有统计学意义(P<0.05).结论:精子运动参数、形态参数、精子DNA损伤可能与流产有关.
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高温对实验小鼠精液质量影响的研究
目的：本研究以成年雄性昆明小鼠构建不同高温状态下的实验动物模型，测定精子DNA及精子顶体完整率的变化情况，探讨在不同高温状态下小鼠精液质量的变化情况，为研究高温状态影响人类生育能力的机理提供动物实验依据。方法将125只健康雄性成年昆明小鼠随机分为五组，每组25只，其中对照组予以22°C恒温饲养，高温组下设31°C 、34°C 、37°C、40°C四个组，分别于实验开始的第1、3、5、7、9天随机抽取5只测定每组实验小鼠精子DNA及精子顶体完整率的变化情况。结果1、与对照组相比较，各高温组实验小鼠的精液质量均明显异常，且温度越高，精液质量下降越快，差异具有统计学意义（P＜0．01）；2、随着高温持续时间的延长，各高温组实验小鼠的精液质量呈现不同程度的异常，差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论高温可能通过影响雄性小鼠精子DNA损伤及附属性腺的功能，导致精子DNA及精子顶体完整率出现不同程度的异常，从而影响其生育能力。
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男性不育患者精子DNA中8-羟基脱氧鸟苷水平及与精液参数的相关性
本文应用高压液相-电化学(HPLC-EC)技术对52名男性不育患者精子DNA中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)进行测定,同时检测精液量、精子密度、精子活率、正常形态精子率,及头部精子畸形等精液参数,并进行相关性分析.结果显示,当精子DNA中8-OHdG超过10.50时,其头部畸形率明显增加.精子DNA中8-OHdG与精液量(r=-0.47,P＜0.001)、正常形态精子率(r=-0.36,P＜0.01)成一定的负相关,且与头部畸形精子率成正相关(r=0.69,P＜0.001).结果提示,精子DNA中8-OHdG与精液质量存在一定的相关性,表明精液质量的下降与精子DNA的损伤存在一定联系,而内源及外源性活性氧是可能的原因之一,其可能的机制尚需进一步研究.
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精子染色质结构分析预测夫精宫腔内人工授精结局的临床研究
目的:分析精子DNA损伤与宫腔内人工授精(intrauterine insemination,IUI)妊娠率的关系.方法:482例行IUI治疗的患者,常规精液分析,并采用精子染色质结构分析法(SCSA)计算DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI),观察DFI与IUI妊娠率的关系.结果:482例患者中DFI＞ 25％的患者为95例,5例临床妊娠,妊娠率为5.26％；DFI≤25％的患者为387例,59例临床妊娠,妊娠率为15.25％.DFI＞ 25％的患者,其生化妊娠率和临床妊娠率只有DFI≤25％的患者的0.37(95％ CI:0.14～0.96)和0.38(95％ CI:0.16～0.97)倍.54例患者前后2个周期DFI值分别为(15.05±7.98)％与(17.25 +12.18)％,差异无统计学意义(P＞0.05).精子DFI与精子浓度、精子活力、前向运动精子总数呈显著负相关(P＜0.01).结论:SCSA检测的DFI参数是较稳定的指标,DFI和精子浓度、精子活力具有一定相关性.DFI＞ 25％的患者IUI妊娠率明显低于DFI≤25％的患者.SCSA检测的DFI参数是一种较为理想的预测IUI临床妊娠率的指标.
关键词： 精子染色质结构分析法 宫腔内人工授精 精子DNA -
泛素-蛋白酶体系统与精子DNA损伤修复的研究进展
泛素-蛋白酶体系统(UPS)是体内广泛存在的一种蛋白酶体系统,由泛素(Ub)、泛素激活酶(E1)、泛素结合酶(E2)、泛素连接酶(E3)、26S蛋白酶体和去泛素化酶(DUBs)组成,能够调控体内蛋白降解.研究发现UPS除了蛋白降解功能以外,还参与细胞周期调控、免疫应答、信号传导以及DNA损伤修复等过程.精子发生要经历染色体联会、同源重组等过程,精子DNA在这些过程中易受干扰而出现损伤.近年来研究发现,UPS与精子发生当中的DNA损伤修复有关.UPS参与DNA损伤的修复机制包括:泛素化调节DNA损伤修复相关酶类、协助识别DNA损伤位点、募集损伤修复相关蛋白、启动DNA损伤修复途径、维持染色体稳定,从而保证精子发生正常进行.
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精子DNA甲基化异常与男性不育
DNA甲基化/去甲基化是表观遗传学重要的内容并可以控制基因的表达和印迹,越来越多的研究显示DNA甲基化异常与不育男性精子发生异常、特定肿瘤的发生、神经系统疾病、Rett综合征等有关.文章通过总结近来的相关研究资料来阐述精子发生过程中的DNA甲基化状态的改变,探讨精子DNA的甲基化异常与男性不育之间的联系,旨在为男性不育的治疗提供新的临床思路.
