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依那普利预处理对大鼠心肌组织解偶联蛋白2和诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的：研究依那普利预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌组织解偶联蛋白2（UCP2）和诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）表达的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：将35只SD大鼠随机分成3组，假手术组7只、缺血再灌注组14只、依那普利预处理组14只。假手术组只穿线不结扎，缺血再灌注组结扎30 min后，再灌注120 min；依那普利预处理组结扎前用依那普利10 mg/（ kg· d）灌胃1周，余处理方法同缺血再灌注组。实验终末采血测血清磷酸激酶（CK）活性及丙二醛（MDA）含量；取3组大鼠左室缺血区心肌组织，采用 RT-PCR和Western blot检测左室心肌组织UCP2和iNOS的表达。结果：3组大鼠间血清CK活性、MDA含量及心肌组织UCP2、iNOS表达量比较，差异均有统计学意义（F＝1523．311、32．124、203．504、235．933、65．794、113．630，P均＜0．001）。缺血再灌注组与假手术组相比UCP2、iNOS表达升高，血清CK活性、MDA含量升高（P均＜0．05）；预处理组与缺血再灌注组相比UCP2表达下降，iNOS表达升高，血清CK活性、MDA含量降低（ P均＜0.05）。结论：依那普利预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用可能与其抑制UCP2表达、增强iNOS表达有关。
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山楂叶提取物防治大鼠非酒精性脂肪性肝病实验研究
目的:观察山楂叶提取物对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠的治疗作用及其作用机制.方法:采用高脂饲料喂养8周诱导SD大鼠NAFLD模型,实验分为正常组、模型组、山楂叶提取物组,8周后分别灌胃给药或饮用水4周.观察体质量、肝脏质量、肝脏指数变化;肝组织油红O染色观察病理情况;检测各组大鼠肝组织三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平;Western blot法检测肝组织细胞色素P450亚型2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)和解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)蛋白的表达情况.结果:与模型组比较,山楂叶提取物组大鼠体质量、肝脏质量、肝脏指数明显降低(P＜0.05).油红O染色提示肝脂含量降低,肝组织TG含量显著降低(p＜0.05),TC有下降趋势;同时肝脏CYP2E1蛋白表达下调(P＜0.05),UCP2蛋白表达上调(P＜0.05).结论:山楂叶提取物对大鼠NAFLD治疗有效,其机制可能与调节脂质代谢、抑制氧化应激有关.
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力竭运动大鼠心肌解偶联蛋白2表达及交感神经系统的变化及其在心肌能量代谢中的作用
目的:探讨力竭运动后大鼠心肌线粒体解偶联蛋白2(UCP2)表达的改变及交感神经系统的变化,并探究其在心肌能量代谢中的作用及意义.方法:雄性Wistar大鼠45只,按简单完全随机原则分为3组,每组15只:对照组(A组),耐力训练力竭组(B组),1次力竭组(C组).4周后,双抗体夹心法测定血浆肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)浓度、血浆游离脂肪酸(FFA)浓度及心肌线粒体三磷酸腺苷(ATP)含量,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法测定心肌线粒体UCP2表达变化.结果:4周后,B组大鼠血浆E、NE浓度明显升高,较A组分别增加103.33％、15.94％,较C组分别增加67.85％、8.21％(均P＜0.01),C组较A组增加75.38％、55.11％(均P＜0.01);心肌组织ATP含量C组低,其次为B组,与A组相比差异有统计学意义(P＜0.01);血浆FFA浓度C组为(0.500±0.020) mmol/L,较B组(0.397±0.021) mmol/L升高25.94％,较A组(0.215±0.050) mmol/L升高132.56％,B组FFA浓度较A组升高84.65％,各组差异均有统计学意义(均P＜0.05);RT-PCR反应及Western bolt结果显示:C组UCP2表达水平较A组高75.64％及37.55％,较B组高21.89％及17.27％,差异均有统计学意义(均P＜0.01);B组UCP2表达水平较A组高44.10％及17.29％,差异有统计学意义(P＜0.01);相关性分析显示血浆FFA浓度与UCP2表达呈正相关(r=0.832,P＜0.01);UCP2表达量与ATP含量呈负相关(r=-0.875,P=0.011).结论:力竭运动训练可使交感神经系统兴奋性增强,儿茶酚胺类物质分泌增多,心肌线粒体UCP2表达增高,在一定程度上导致心肌ATP含量减少,参与了力竭运动引起衰竭心肌能量代谢障碍.
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维生素E酯预处理对小鼠原位脂肪肝移植的影响
目的探讨供者用维生素E酯(VES)预处理对原位小鼠脂肪肝移植的保护作用及其机理.方法建立小鼠原位肝移植模型.随机分为正常小鼠对照组(n=8)、肥胖小鼠对照组(n=8)、非脂肪肝移植组(n=12)、脂肪肝移植组(n=12)、VES预处理脂肪肝移植组(n=12).术后检测各组血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)相对水平;肝脏组织HE染色,油红O染色脂肪定量,ATP含量及解偶联蛋白2(UCP-2)水平.结果VES预处理脂肪肝移植组移植后2 h存活率为45%,而脂肪肝移植组为25%,差异有显著性(P＜0.05);VES预处理脂肪肝移植组血清ALT与AST水平与ATP浓度分别为(3 233±1 065)U/L、(4 386±924)U/L、0.19±0.01,而脂肪肝移植组分别为(8 320±4 655)U/L、(6 494±2 655)U/L、0.13±0.01,差异有显著性(P＜0.05);VES预处理脂肪肝移植组肝细胞损伤程度明显减轻,线粒体UCP-2水平低于脂肪肝移植组.结论维生素E酯预处理对小鼠脂肪肝移植有一定保护作用.
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Stanniocalcin-1对大鼠神经元缺血性损伤的保护作用
目的:探讨Stanniocalcin-1(STC-1)对神经元缺血性损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法:分离培养大鼠大脑皮质神经元,缺氧/缺糖处理构建神经元缺血性损伤模型.构建过表达STC-1的重组逆转录病毒并转染细胞;UCP2 siRNA转染抑制解偶联蛋白2(UCP2)表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和West-ern Blotting检测STC-1和UCP2的mRNA及蛋白表达;乳酸脱氢酶(LDH)方法测定LDH漏出量和噻唑兰(MTT)方法测定细胞生长活力;检测Caspase-3活性.结果:成功建立缺氧/缺糖神经细胞损伤模型.过表达STC-1,缺氧/缺糖损伤的神经元LDH漏出量减少(P＜0.01),细胞生长活力显著升高(P＜0.05),Caspase-3活性降低(P＜0.05),且Bcl-2蛋白表达量增多(P＜0.01);另外STC-1下游分子UCP2的mRNA和蛋白表达量显著增加(P＜0.01);另外,在过表达STC-1且抑制UCP2的情况下,细胞生长活力明显下降(P＜0.05).结论:STC-1对缺血性损伤的神经细胞起保护作用,可能通过调控UCP2来保护神经细胞.
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解偶联蛋白2基因-866G/A,Ala55Val及Ins/Del多态性与宁夏回族人群脑缺血发病风险的相关性研究
目的 探讨UCP2基因多态性在回族人群中的分布特点及UCP2SNP与脑缺血发病风险的相关性.方法 收集宁夏地区回族正常人群及回族脑缺血患者外周血样本,提取外周血基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性方法检测各样本UCP2基因-866G/A,Ala55Val及Ins/Del多态性.结果 UCP2基因-866G/A,Ala55Val及Ins/Del多态性在宁夏地区回族正常人群与脑缺血患者中分布频率无明显差异(P＞0.05).结论 UCP2多态性与宁夏地区回族脑缺血发病无相关性.
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黄芪多糖对2型糖尿病大鼠心肌UCP2表达和AMPK活性的影响
目的:研究高脂加链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病心肌病大鼠心肌组织中解偶联蛋白2(UCP2)与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达变化,并探讨黄芪多糖(APS)的治疗作用及可能机制.方法:雄性SPF级SD大鼠随机分为:正常对照组(C组,n=8),黄芪多糖对照组(C+APS组,n=8),饲以正常饲料;通过高脂饮食+小剂量STZ(25 mg/kg,尾静脉注射)复制2型糖尿病大鼠模型,将血糖＞13.9 mmol/L者随机分为糖尿病组(DM组,n=8)及黄芪多糖治疗组(DM+APS组,n=8);DM+APS组行黄芪多糖灌胃治疗8周[700 mg/(kg·d)].进行口服葡萄糖耐量(OGTT)试验,检测动物血糖、血浆胰岛素,并计算胰岛素敏感指数(ISI);取心室肌组织提取蛋白,Western blotting检测UCP2、总AMPK和pAMPKα1的表达.结果:DM组出现高血糖、糖耐量降低、低胰岛素敏感性等2型糖尿病特征;DM+APS组UCP2水平较DM组明显增高,伴随pAMPK表达增高(P＜0.05),而在C与C+APS组两种结果无明显差异.结论:APS治疗可以显著改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,主要表现为降低血糖、升高ISI指数,其作用机制可能与增强AMPK活性,增加UCP2表达,改善2型糖尿病大鼠能量代谢等途径有关.
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外源性CoQ10对大鼠心肌损伤中解偶联蛋白2基因表达的影响
目的:观察解偶联蛋白2(UCP2)mRNA在大鼠损伤心肌中的表达及应用外源性辅酶Q10(CoQ10)后,UCP2 mRNA表达的变化及其对心肌的保护作用.方法:采用大剂量异丙肾上腺素(ISO)多点皮下注射造成大鼠心肌损伤模型,36只健康SD大鼠随机平均分为3组:对照组、ISO组、ISO+CoQ10组.Ⅱ导联心电图检测心肌缺血损伤程度,光镜观察心肌病理损伤程度,生化方法检测心肌内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,RT-PCR方法检测心肌细胞内UCP2 mRNA的表达水平.结果:ISO+CoQ10组与ISO组比较,心肌病理损伤程度明显减轻,J点下降减少,MDA含量显著减少,SOD活性增强,UCP2 mRNA的表达明显增加(P＜0.01).结论:UCP2 mRNA的高表达可起到保护心肌的作用,而CoQ10能通过介导其高表达发挥治疗作用.
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糖毒性下UCP2介导的胰岛功能紊乱的研究
目的 研究不同浓度高糖对胰岛INS-1细胞解偶联蛋白2(UCP2)基因表达的影响,探讨UCP2基因与高糖刺激下氧化应激和胰岛素分泌之间的关系,进一步了解糖尿病糖毒性的发病机制.方法 将不同浓度的葡萄糖作用于INS-1细胞,镜下观察INS-1细胞的形态改变,应用可见分光光度计测定丙二醛(MDA)含量,运用ELISA方法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS),同时应用RT-PCR方法检测UCP2基因的表达.结果 ①随着糖浓度的增加,INS-1细胞的凋亡增多,MDA含量逐渐增加,GSIS值逐渐下降,不同糖浓度组比较,差异具有显著性意义(P<0.01).②随着葡萄糖浓度增加,INS-1细胞UCP2 mRNA的表达总体逐渐增强.结论 高糖可促进INS-1细胞凋亡,在高糖作用下活性氧物质(ROS)代谢产物MDA增多,通过激活UCP2的途径引起胰岛细胞胰岛素分泌功能受损.这可能也是糖毒性对胰岛β细胞损害的一个重要环节.
关键词： 解偶联蛋白2 INS-1细胞 糖毒性 氧化应激 高糖刺激的胰岛素分泌 -
抗性淀粉对饮食诱导肥胖大鼠UCP2基因表达的影响
目的 探讨抗性淀粉(RS)对饮食诱导肥胖(DIO)大鼠解偶联蛋白2(UCP2)基因表达水平的影响,为开发RS相关保健食品提供科学依据.方法 选择SD大鼠60只,体重(100±10)g,雌雄各半,随机分为对照组和高脂组,分别用普通饲料和高脂饲料喂养7周.根据体重筛选出DIO大鼠,再随机分成4组,分别用高脂饲料、含5％、10％及15％ RS高脂饲料喂养5周后,检测各组实验动物体重、脂体比及白色脂肪组织中UCP2 mRNA的表达水平.结果 RS添加组DIO大鼠体重和脂体比呈现下降趋势,UCP2 mRNA表达升高,与高脂饲料喂养的肥胖对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),且RS添加量与体重呈负相关(r=-0.862,P=0.000).结论 RS可增强UCP2基因表达,减少能量储存,有一定的减肥效果.
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老年大鼠肝脏解偶联蛋白2表达与衰老关系的研究
目的 探讨解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)在老年大鼠肝脏组织中的表达及其与衰老的关系.方法 健康雄性SD大鼠30只,按年龄分为新生组、成年组和老年组,实验室适应性喂养7 d后断头处死,分别取各组大鼠肝组织测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)的含量;通过免疫组织化学观察肝组织中UCP2蛋白的表达与分布,Western blot方法检测肝细胞线粒体内UCP2蛋白的表达并进行定量分析.结果 老年组大鼠肝组织中MDA含量高于幼年组和成年组(P<0.01);老年组大鼠肝组织GSH含量显著低于幼年组和成年组(P<0.01);老年组的ATP水平比幼年组和成年组水平显著降低(P<0.01);老年组UCP2表达高于幼年组和成年组(P<0.01).结论 老年大鼠肝MDA含量升高、GSH含量下降,提示老年大鼠肝内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平较高,并引起UCP2表达增多,UCP2可能对延缓肝细胞的衰老起重要作用;UCP2的高表达可能是老年大鼠肝组织ATP下降的原因之一;肝组织UCP2表达水平主要受ROS水平的调节,但ATP水平不仅受到UCP2的调节,还受细胞的代谢状态的影响.
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UCP2基因siRNA转染对脓毒症血清诱导心肌细胞炎症反应的影响
目的 研究解偶联蛋白2基因(uncoupling protein 2.UCP2) siRNA干扰大鼠H9C2心肌细胞株后对脓毒症血清诱导炎症反应的影响,探讨UCP2在脓毒症心肌病可能的机制.方法 制备正常大鼠血清和脓毒症大鼠血清.体外培养大鼠心肌细胞株(H9C2),随机分为空白对照组、正常大鼠血清、10％脓毒症大鼠血清刺激12h组(脓毒症血清组)、UCP2-siRNA干扰+10％脓毒症大鼠血清刺激12h组(UCP2-siRNA+脓毒症血清组)、阴性siRNA转染+10％脓毒症大鼠血清刺激12h组(阴性siRNA+脓毒症血清组).RT-PCR检测各组TNF-α mRNA,IL-1βmRNA表达;免疫印迹法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达和核转录因子(NF-κB)的表达.结果 UCP2-siRNA+脓毒症血清组p-p38、NF-κB表达量均较脓毒症血清组明显增高(P＜0.05);UCP2-siRNA+脓毒症血清组TNF-αt mRNA表达量与脓毒症血清组相比明显增加(P＜0.01),IL-1β mRNA表达量与脓毒症血清组比较差异无统计学意义.结论 UCP2参与脓毒症血清诱导的H9C2心肌细胞p38MAPK活性和NF-κB与下游炎症介质的表达调控.
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解偶联蛋白2与脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌线粒体损伤的关系
目的：探讨解偶联蛋白2（uncoupling protein 2, UCP2）与脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌线粒体损伤的关系。方法通过腹腔注射脂多糖（LPS）建立脓毒症模型。将40只Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠随机分为5组，每组8只：对照组（腹腔注射生理盐水）、脓毒症6 h组（LPS-6 h组）、脓毒症12 h组（LPS-12 h组）、脓毒症24 h组（LPS-24 h组）和脓毒症48 h组（LPS-48 h组）。在相应时间点留取大鼠血清和心脏组织，提取心肌线粒体，通过酶标仪检测肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）和活性氧（ROS）水平，流式细胞仪检测线粒体肿胀度和线粒体膜电位（MMP），采用蛋白质免疫印迹试验（Western blot）测定UCP2蛋白表达水平；电镜观察心肌组织线粒体形态学变化。结果与对照组比较，LPS各组血清CK、CK-MB水平、心肌组织ROS水平和线粒体肿胀度均明显升高（P<0.05），峰值在LPS-24 h组；而LPS各组线粒体膜电位明显下降（P<0.05），LPS-24 h组降至低。Western blot检测发现LPS各组心肌组织UCP2的表达水平较对照组明显升高（P<0.05），峰值在LPS-24 h组。电镜观察结果发现LPS大鼠心肌线粒体肿胀，线粒体膜部分破碎，有空泡形成，LPS-24 h组病变严重。LPS大鼠心肌线粒体ROS水平、线粒体肿胀度与UCP2表达量呈正相关（分别r=0.796、0.893，P<0.05）；LPS大鼠心肌MMP与UCP2表达量呈负相关（r=-0.903，P<0.05）。结论在脓毒症大鼠模型中，心肌和心肌线粒体都明显损伤，心肌组织UCP2的表达与线粒体损伤密切相关，推测UCP2可能在脓毒症心肌线粒体损伤中起重要作用。
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解偶联蛋白2基因及过氧化物酶增殖物激活受体γ2基因复合变异与2型糖尿病的关系
目的：探讨过氧化物酶增殖物激活受体（ peroxisome proliferator activated receptor ， PPAR）γ2基因Pro12Ala及解偶联蛋白（uncoupling protein 2， UCP2）基因3′非翻译区（3′-untranslated region，3′-UTR）处45bp的插入/缺失（insertion/deletion， I/D）复合变异对中国汉族人群2型糖尿病发生的影响。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（ PCR-RFLP）方法及聚合酶链反应-片段长度多态性（PCR-FLP）方法，分别对PPARγ2基因Pro12Ala及UCP2基因3′-UTR处45bp的I/D变异进行检测。490例2型糖尿病患者，正常对照组585例。结果⑴Pro12Ala（ P12A）基因型分布在病例组与对照组间差异无统计学意义（ P ＞0.809）；病例组中携带A12等位基因者腰围（94.6±11.8cm）明显大于P12P基因型腰围（91.5±11.8cm），（ t ＝2.199， P ＝0.028）；携带A12等位基因者口服葡萄糖耐量试验（ oral glucose tolerance test ， OGTT）0.5h、1 h、2 h胰岛素均明显低于P12 P基因型（ Z ＝2.222， P ＜0.05；Z ＝2.051， P ＜0.05；Z ＝2.079， P ＜0.05）。⑵UCP2基因3′UTRI/D多态性3种基因型在病例组及对照组间的频率分布差异无统计学意义（ P ＞0.05）；对照组中携带I等位基因者OGTT半小时胰岛素明显高于DD基因型（ Z ＝1.997， P ＜0.05）。⑶携带Pro/Ala＋Del/Del基因型组合与2型糖尿病的关系密切（ OR＝1.22，95％CI 1.078～1.386）。结论虽然单一的PPARγ2基因Pro12Ala及UCP2基因3′-UTR处45bp的I/D变异与2型糖尿病的发生无关，但这两种微效基因加起来则形成了明显的2型糖尿病发生的表型效应。
关键词： 解偶联蛋白2 过氧化物酶增殖物激活受体γ2 2型糖尿病 基因突变 -
解偶联蛋白2与酒精性肝病
解偶联蛋白2(UCP2)是线粒体内膜上可以调节质子跨膜转运的载体蛋白,可以驱散质子电化学梯度,使氧化呼吸与ATP合成解偶联.UCP2与能量消耗和脂质代谢密切相关,可能参与酒精性肝病(ALD)发病过程中的氧化应激和脂质过氧化.进一步探讨UCP2在ALD中的作用对于ALD的防治具有重要意义.
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心力衰竭大鼠解偶联蛋白2表达及其对线粒体功能的影响
目的 观察心力衰竭大鼠心肌线粒体解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)表达及其对线粒体功能的影响.方法 45只雄性SD大鼠随机分为腹主动脉缩窄组(实验组)、假手术组和正常对照组,实验组行腹主动脉缩窄术.术后20周心脏超声检测心功能,测定血清游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)浓度,免疫印迹法分析心肌线粒体UCP2蛋白表达,密度梯度法提取大鼠心肌线粒体,氧电极法测定线粒体的呼吸活性,罗丹明123法测定线粒体膜电位.结果 实验组术后20周左心室射血分数比假手术组和正常对照组降低[(41.0+6.7)% vs. (84.0±2.5)%,P<0.01; (41.0±6.7)% vs. (84.0±2.3)%,P<0.01]、舒张末期内径比假手术组和正常对照组增加[(6.80+0.58)mm vs. (5.20±0.78)mm,P<0.01; (6.80±0.58)mm vs.(5.00+0.67)mm,P<0.01],大鼠心力衰竭建模成功.与正常对照组和假手术组比较,实验组血清FFA浓度明显增高[(372±14) μml/L vs. (218±16)μml I/L,P<0.01; (372±14)μmol/L vs. (223±16)μmol/L,P<0.01].免疫印迹结果 表明,实验组心肌线粒体UCP2表达量比假手术组和正常对照组增高(0.76±0.10 vs.0.47±0.09,P<0.01;0.76±0.10 vs.0.46±0.13,P<0.01),同时Ⅲ态呼吸线粒体氧化呼吸活性及线粒体膜电位降低.相关性分析显示UCP2表达量与血清FFA浓度呈显著正相关(r=0.89,P<0.01).结论 心力衰竭大鼠血清FFA浓度增高是影响UCP2表达改变的重要因素;UCP2表达增高导致线粒体氧化呼吸功能减弱,可能是衰竭心肌线粒体功能障碍的分子机制.
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诱导型一氧化氮合酶和解偶联蛋白-2对心肌缺血预适应的作用
目的 探讨诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和解偶联蛋白-2(uncoupling protein-2,UCP2)对大鼠心肌缺血预适应的保护机制.方法 结扎左冠状动脉复制大鼠心肌缺血再灌注模型.预适应组行3次缺血5 min,再灌注10 min的预处理,分别于预处理0,6,12,24和48 h(分别为O,6,12,24和48 h亚组)后行30 min缺血及120 min再灌注;对照组开胸后不结扎左冠状动脉,电镜观察心肌超微结构,据Rainio评分标准进行心肌超微结构损伤程度的半定量分析,采用Western Blot及比色法检测心肌UCP2活性及iNOS活性.结果 预适应各亚组UCP2活性均增高(P＜0.05),0 h亚组UCP2表达水平高(P＜0.01),24小时亚组和48小时亚组心肌iNOS活性显著升高(P＜0.05).结论 UCP2和iNOS共同参与了大鼠心肌缺血预适应心肌保护作用.
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氯沙坦对血管紧张素Ⅱ损伤RIN-m细胞胰岛素分泌功能的保护及机制探讨
目的 观察氯沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)损伤β细胞(RIN-m)功能的保护,并对其机制进行探讨.方法 常规培养RIN-m细胞,分为空白对照组、100nmol/LAngⅡ组和氯沙坦预处理组,各组干预24h后使用放射免疫法检测基础(3.3 mmol/L)和葡萄糖(16.7mmol/L)刺激下RIN-m细胞胰岛素分泌量;DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;RT-PCR和Western blotting分别检测RIN-m细胞解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白的表达.结果 ①各组基础胰岛分泌没有显著差异(P>0.05),在高糖刺激下,100nmol/LAngⅡ/组胰岛素分泌量明显低于空白对照组(P<0.001),氯沙坦预处理组胰岛素分泌量与空白对照组无显著差异(P>0.05),但较AngⅡ组明显增加(P<0.001);②100 nmol/LAngⅡ组细胞内ROS水平、UCP2mRNA和蛋白表达均较空白对照组明显增加(P<0.001),氯沙坦预处理组与空白对照组无显著差异(P>0.05),但较100nmol/L AngⅡ组显著降低(P<0.001).结论 AngⅡ损伤β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功能,氯沙坦预处理可以拮抗AngⅡ的作用,减少β细胞内ROS水平,下调UCP2表达,终对β细胞起到保护作用.
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高糖和棕榈酸诱导胰岛INS-1细胞线粒体解偶联改变
目的 通过观察体外高糖和棕榈酸(PA)慢性作用对胰岛INS-1细胞活性氧簇(ROS)水平、解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白表达的影响,初步探讨高糖和PA损害胰岛功能的机制.方法 实验分为正常对照组(含5.5 mmol/L葡萄糖的BSA)、高糖组(含16.7 mmol/L葡萄糖的BSA)、棕榈酸组(含0.4 mmol/L棕榈酸)、高糖+棕榈酸组(含16.7 mmol/L葡萄糖及0.4 mmol/L棕榈酸).将INS-1细胞分别接种于上述不同浓度的葡萄糖和PA作用48h后,分别分析ROS水平、UCP2mRNA和蛋白表达、基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌量(GSIS). 结果 与对照组相比,高糖组、棕榈酸组和高糖+棕榈酸组ROS水平明显增加(P均<0.05);高糖+棕榈酸组解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白表达较其余三组明显增加(P均<0.05);并且它明显增加2.8 mmol/L葡萄糖时的基础胰岛素分泌量,减少16.7 mmol/L葡萄糖时的GSIS(P均<0.05). 结论 在胰岛INS-1细胞,高糖和棕榈酸对胰岛功能的损害与线粒体解偶联功能改变有关.高糖和棕榈酸通过诱导ROS产生增多导致UCP2表达与作用增加,增强了线粒体呼吸链与ADP磷酸化解偶联,使线粒体膜电位下降,引起胰岛素分泌减少,损害胰岛功能.
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体外受精-胚胎移植周期颗粒细胞解偶联蛋白2的表达与胚胎发育的关系
目的 探讨体外受精周期颗粒细胞解偶联蛋白2(UCP2)的表达与细胞内活性氧水平关系以及对胚胎发育的影响.方法 运用UCP2抗体和DCFH-DA,采用流式细胞仪技术,分别检测了53例体外受精周期颗粒细胞UCP2表达和细胞内活性氧水平.其中≤35岁组35例,＞36岁组18例.结果 颗粒细胞UCP2的表达与细胞内活性氧水平负相关(r=-0.578,P＜0.01),并且,年长妇女颗粒细胞UCP2表达下降,UCP2表达低者,良好胚胎形成率降低,取卵数大于等于15个的患者颗粒细胞UCP2表达升高,卵母细胞成熟比例低.结论 颗粒细胞通过增加UCP2表达反馈性抑制细胞内活性氧水平过高,进而控制卵泡液活性氧水平,保护卵母细胞免受氧化应激损伤.
