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褪黑素对老化卵母细胞体外发育能力的改善效果评价
目的 探讨体外培养阶段(IVC)添加褪黑素(MT)对卵母细胞老化引起发育受损的改善效果. 方法 采用不同浓度的过氧化氢(H2O2)处理小鼠MII期卵母细胞诱导老化,浓度分别为0(对照组)、10、50、100、150 μmol/L,体外受精(IVF)后统计各组二细胞率、囊胚形成率,检测老化卵母细胞的线粒体活性及丰度(Mitotracker Red、JC-1)、活性氧(ROS)水平、线粒体拷贝数等指标;在100 μmol/L H2O2处理条件下,老化卵母细胞在IVF后的培养阶段分别添加不同浓度褪黑素(10-5、10-7、10-9 mol/L),统计二细胞率、囊胚率,并且分别检测各组获得囊胚的细胞数及凋亡率. 结果 不同浓度H2O2诱导卵母细胞老化后,囊胚发育率随H2O2浓度的升高而降低,50 μmol/L和100 μmol/L H2O2组囊胚形成率分别为(26.27±0.06)%和(28.46±3.45)%,相比对照组的(34.90±1.77)%显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);在H2O2诱导老化卵母细胞中,100 μmol/L、150 μmol/L H2O2浓度时,ROS水平相比对照组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而活性线粒体的丰度及拷贝数呈现下降趋势,膜电位呈上升趋势,但相比对照组无显著性差异(P>0.05);100 μmol/L H2O2处理诱导卵母细胞老化后,在培养液中添加10-9 mol/L褪黑素组与老化对照组相比,囊胚率[(29.42±2.39)% vs. (20.87±4.12)%]、囊胚细胞数(39.36±9.78 vs. 37.91±4.25)均显著升高,凋亡率显著下降(2.57% vs. 3.18%),差异均有统计学意义(P<0.05);并且这些指标均达到与未经老化处理组的相似发育水平. 结论 老化卵母细胞体外受精后发育率和发育质量偏低的现象,可以通过在受精后体外培养阶段添加褪黑素得到改善.
