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应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法快速鉴定分枝杆菌菌种方法的建立及初步评价
目的：应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法建立一种快速、简便、高效的分枝杆菌菌种鉴定新方法，为临床医师正确诊断提供理论依据。方法以DNA直接测序法为对照，通过荧光定量PCR技术-探针熔解曲线法（包括反应A、B、C）分析22种分枝杆菌标准株、11种非分枝杆菌标准株和32株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法分析22种分枝杆菌标准株和11种非分枝杆菌标准株，结果与标准株DNA测序一致，成功地建立鉴定方法。32株分枝杆菌临床分离株中，经DNA测序和荧光定量PCR-探针熔解曲线法分析显示，4株为结核分枝杆菌复合群（mycobacterium tuberculosis complex， MTC），7株为胞内分枝杆菌，6株为龟分枝杆菌脓肿亚种，4株为瘰疬分枝杆菌，4株为偶然分枝杆菌，3株为堪萨斯和胃分枝杆菌，2株为戈登分枝杆菌；另有2株分离株反应A的熔解曲线显示为分枝杆菌属的熔解温度（melting temperature，Tm）值，反应B和C的熔解曲线Tm值与22株分枝杆菌标准株的Tm值均不同，经DNA测序证实与戈登分枝杆菌标准株序列不同，与报道的戈登分枝杆菌分离株一致。结论用荧光定量PCR-探针熔解曲线法可简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种，提高分枝杆菌病的正确诊断率，指导临床合理用药。
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两种基因诊断技术对结核分枝杆菌耐药性检测效果比较
目的：评价探针熔解曲线技术和基因芯片技术在结核病防治工作中对结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的检测效果。方法：利用基因芯片技术和探针熔解曲线技术同时对46例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测，以传统罗氏药敏试验为金标准，对基因芯片技术和探针熔解曲线技术的检测效果进行评价。结果：在46例菌株中，分别用探针熔解曲线和基因芯片法进行异烟肼耐药基因检测，与罗氏药敏试验的符合率为91．3％和80．43％；对38例进行利福平耐药基因检测，符合率为84％和89．4％。探针熔解曲线技术和基因芯片检测结果比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：探针熔解曲线和基因芯片检测异烟肼和利福平的耐药性与罗氏药敏试验具有很好的一致性，且两种方法具有简便快速、灵敏度高、特异性好等优点，对临床及时准确进行抗结核治疗具有重要意义。
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不同原理的PCR方法用于地中海贫血产前诊断的验证应用
目的:评估两种不同技术原理的PCR方法用于地中海贫血(下称"地贫")产前诊断的必要性和可行性.方法:采用双盲法,对509份产前诊断标本分别采用单管多重PCR法(single-tube multiplex PCR,STMP)+反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)、探针熔解曲线法(probe melting curve assay,PMCA)检测常见α-地贫和β-地贫基因突变.两种方法所得结果不一致或少见类型地贫突变时,采用DNA测序分析法确诊.所有产前诊断结果均进行验证或随访.结果:经STMP+RDB、PMCA检测突变谱不同,α-地贫和β-地贫各有1例结果不同.另STMP+RDB检测灵敏度高于PMCA,其差异性在标本受母血污染时有提示作用.结论:两种不同技术原理的PCR方法进行地贫产前诊断,是必要和可行的,两者具有互补性,可确保结果的可靠性和减少单一技术的缺陷.
