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布美他尼对心脏骤停复苏后大鼠海马神经细胞水通道蛋白-4表达及凋亡的影响
目的 观察布美他尼对心脏骤停复苏后大鼠海马神经细胞水通道蛋白-4(AQP4)表达及凋亡的影响.方法 将40只成年雄性健康的SD大鼠随机分为3组:空白对照组、心肺复苏组、布美他尼干预组.空白对照组只行气管插管、股动脉置管等操作,机械通气1h后处死取脑.心肺复苏组在行气管插管、股动脉置管等操作后,建立窒息致心脏骤停复苏模型,复苏后至观察时间点处死取脑.布美他尼组在心肺复苏组的基础上在复苏后立即予布美他尼干预,至观察时间点处死大鼠取脑.利用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定各组大鼠海马组织AQP4mRNA和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (caspase-3)mRNA的表达量,并对结果进行统计学分析.结果 心肺复苏组的AQP4mRNA和caspase-3mRNA表达量较空白对照组有显著升高(P＜0.05),同时布美他尼组AQP4mRNA和caspase-3mRNA表达量较相对应观察时间点的心肺复苏组有明显下降(P＜0.05).结论 布美他尼能抑制心脏骤停复苏后引起的脑神经细胞AQP4的表达,并能减少神经细胞的凋亡.
关键词： 布美他尼 心脏骤停 水通道蛋白-4 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 凋亡 -
N-乙酰半胱氨酸对大鼠肺缺血/再灌注损伤诱导细胞凋亡的保护机制
目的 研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对大鼠肺缺血/再灌注损伤(LIRI)中细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的影响,并探讨其可能机制.方法 雄性SD大鼠42只,按随机数字表法均分为假手术组、LIRI组(阻断肺门45 min后再开放)、NAC组(于LIRI前腹腔注射NAC 150 mg/kg)3组,各组分别于3h、6h取肺组织,用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染法通过流式细胞仪检测凋亡细胞并计算凋亡率,测定丙二醛(MDA)浓度(硫代巴比妥法)和超氧化物歧化酶(SOD)活性(黄嘌呤氧化酶法),用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测caspase-3 mRNA表达,电镜下观察肺脏超微结构的改变.结果 与假手术组相比,LIRI组3h、6h肺组织细胞凋亡率明显增加[(25.60±3.22)％比(2.19±0.48)％,(26.01±4.50)％比(2.55±0.36)％],MDA浓度(nmol/mg)升高(3.26±0.32比0.73±0.23,3.53±0.46比1.08±0.42),SOD活性(U/mg)下降(32.80±3.82比60.51±6.81,33.44±3.24比64.19±6.60),肺组织caspase-3 mRNA表达显著增加(0.717±0,037比0.216±0.046,0.744±0.046比0.227±0.037),差异均有统计学意义(均P＜0.01);与LIRI组相比,NAC组3h、6h肺组织细胞凋亡率明显减少[(14.42±1.61)％比(25.60±3.22)％,( 10.02±1.64)％比(26.01±4.50)％],MDA浓度(nmol/mg)明显下降(1.75±0.33比3.26±0.32,2.15±0.25比3.53±0,46),SOD活性(U/mg)明显升高(42.76±2.06比32.80±3.82,44.94±3.11比33.44±3.24),肺组织caspase-3 mRNA表达显著减少(0.441±0.038比0.717±0.037,0.410±0.037比0.744±0.046),差异均有统计学意义(均P＜0.01).NAC组肺组织超微结构损害较LIRI组明显减轻.在LIRI 3 h、6h时,caspase-3与肺组织细胞凋亡率、MDA呈显著正相关,与SOD呈显著负相关(3h:r值分别为0.9036、0.9216、-0.9511,6h:r值分别为0.9655、0.9650、-0.9574,均P＜0.01).结论 在LIRI早期,NAC可下调caspase-3表达从而抑制细胞凋亡的发生,起到保护肺组织的作用.
关键词： 缺血/再灌注损伤 肺 N-乙酰半胱氨酸 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 凋亡 -
丙戊酸对致死性烫伤大鼠心肌的保护作用及机制研究
目的 研究丙戊酸(VPA)对致死性烫伤大鼠心肌的保护作用及机制.方法 78只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假烫组(n=10)、假烫+VPA组(n=10)、烫伤组(n=29)、烫伤+VPA组(n=29)4组.采用80℃水浴浸泡背部15s、双下肢15s、腹部8s造成55％总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤大鼠模型;假烫组用37℃水浴浸泡,部位和时间与烫伤组相同.烫伤(假烫)后即刻皮下注射VPA300 mg/kg或等体积生理盐水(作为对照).各组分别于烫伤后6h取5只大鼠腹主动脉血,测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;然后处死动物取心肌组织,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测心肌细胞中组蛋白乙酰化水平及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活化水平;各组余下大鼠观察12h生存情况.结果 与假烫组相比,烫伤组大鼠伤后6h血浆CK-MB水平明显升高(U/L:5 438.0±413.6比2 881.0±324.8,P＜0.05),心肌组蛋白3第9位乙酰化的赖氨酸(Ac-H3K9)水平明显降低(灰度值:0.55±0.18比1.00±0.20,P＜0.05),心肌caspase-3活化水平明显增高(灰度值:1.75±0.25比1.00±0.18,P＜ 0.05);而给予VPA处理后能明显降低血浆CK-MB水平[(4018.0±388.3) U/L],明显升高心肌Ac-H3K9水平(灰度值:2.20±0.23),明显降低心肌caspase-3活化水平(灰度值:1.33±0.20),与烫伤组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).Kaplan-Meier生存曲线分析发现,VPA能显著延长大鼠烫伤后存活时间,12h时大鼠存活率可由0升高至50％(P＜0.05).结论 VPA能改善致死性烫伤休克大鼠心肌酶学指标并延长其存活时间,其机制可能与其对组蛋白去乙酰化酶及caspase-3的抑制作用有关.
关键词： 烫伤 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 丙戊酸 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 -
山莨菪碱对心搏骤停家猪线粒体途径心肌细胞凋亡的保护作用
目的 探讨山莨菪碱对心搏骤停(CA)家猪心肌线粒体损伤的保护作用及其机制.方法 23只雄性家猪按随机数字表法分为肾上腺素组(n=9)、山莨菪碱组(n=9)、对照组(n=5),用交流电刺激法诱发心室纤颤(室颤)建立CA模型.于CA前基础状态、CA 8 min及自主循环恢复(ROSC)即刻、30 min和24 h留取血标本,ROSC 24 h处死动物留取心肌组织.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆和心肌细胞色素C(Cyt C)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白含量；透射电镜下观察心肌超微结构改变；荧光染色法检测心肌细胞凋亡.结果 山莨菪碱组ROSC率较肾上腺素组提高了22.22％(77.78％比55.56％,P＞0.05),复苏成功的动物均存活24 h.随着ROSC时间的延长,肾上腺素组和山莨菪碱组血浆Cyt C和caspase-3蛋白含量明显增高,且高于对照组；其中山莨菪碱组ROSC 30 min、24h血浆CytC蛋白含量(nmol/L)较肾上腺素组明显减少(48.68±19.50比77.51±29.87,48.98±20.26比82.11±25.09,均P＜0.05)；两复苏组间ROSC后各时间点心肌Cyt C及血浆和心肌caspase-3蛋白含量比较差异均无统计学意义.肾上腺素和山茛菪碱均能明显减轻心肌细胞线粒体损伤,减少心肌细胞凋亡；以山莨菪碱组作用更好,细胞凋亡率明显下降[(0.15±0.04)％ 1(0.37±0.04)％,P＜0.01].结论 山莨菪碱可能通过减少Cyt C蛋白表达量及减轻复苏后心肌线粒体损伤程度来保护心肌细胞、抑制线粒体途径的心肌细胞凋亡.
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四逆汤对复苏后综合征脑保护作用的实验研究
目的 探讨四逆汤对大鼠心肺复苏(CPR)后综合征的脑保护作用及其机制.方法 将50只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(n=10)、CPR模型组(n=20)和四逆汤治疗组(n=20).采用气管夹闭法复制大鼠心搏骤停模型,心脏停跳5 min后行CPR.四逆汤治疗组以5 g/kg的四逆汤灌胃治疗,每24 h给药1次,假手术组和CPR模型组给予等量生理盐水灌胃.于复苏前和复苏后6、12、24、48、72 h取大鼠静脉血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;于复苏后72 h取各组大鼠脑皮质,用免疫组化法检测脑组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)含量,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定大鼠脑组织caspase-3蛋白表达,用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)测定脑组织细胞凋亡情况.结果 随时间延长,CPR模型组和四逆汤组IL-6、TNF-α水平均呈先升高后降低的趋势,IL-6于复苏后24 h达峰值,TNF-α于复苏后48 h达峰值,复苏后72 h均降低;自复苏后6 h开始,CPR模型组和四逆汤治疗组血清IL-6(ng/L:61.79±1.31、62.49±1.42比21.48±0.79)、TNF-α(ng/L:48.32±1.98、25.32±1.96比18.34±2.45)水平即显著高于假手术组,四逆汤治疗组IL-6于复苏后12 h起(ng/L:70.41±2.21比88.32±1.59)、TNF-α于复苏后6 h起(ng/L:25.32±1.96比48.32±1.98)明显低于CPR模型组(均P<0.05),持续到复苏后72 h,两组IL-6、TNF-α在结束时均未恢复到正常水平(均P<0.05).复苏结束后,CPR模型组脑组织caspase-3含量和蛋白表达以及细胞凋亡率均明显高于假手术组〔caspase-3含量(A值,×103):2.59±0.26比1.57±0.06,caspase-3蛋白(灰度值):0.80±0.08比0.43±0.04,细胞凋亡率:(2.01±0.08)%比(0.26±0.02)%,均P<0.05〕,四逆汤治疗组上述指标均显著低于CPR模型组〔caspase-3含量(A值,×103):1.89±0.08比2.59±0.26,caspase-3蛋白表达(灰度值):0.57±0.02比0.80±0.08,细胞凋亡率:(1.03±0.05)%比(2.01±0.08)%,均P<0.05〕.结论 四逆汤对大鼠复苏后综合征的脑保护作用可能是通过抑制炎症因子及减少细胞凋亡来实现的.
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肺缺血再灌注损伤模型大鼠肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化
背景:肺缺血再灌注损伤过程中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化及其可能的作用机制有待观察.目的:观察大鼠肺缺血再灌注损伤中肺组织细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的动态变化,并分析细胞凋亡在肺缺血再灌注损伤中作用及可能机制.设计:随机对照动物实验.单位:南京医科大学附属南京第一医院急诊中心.材料:实验于2006-04/2006-09在南京医科大学附属南京第一医院动物实验室及南京市放射免疫检测中心完成.选用28只雄性健康清洁级SD大鼠,体质量250～350 g,鼠龄49～76 d,由南京医科大学实验动物中心提供.随机数字表法将大鼠分为实验组及对照组,每组14只.方法:①实验干预:实验组大鼠参照Eppinger等的方法进行建立肺缺血再灌注模型,大鼠给予阻断肺门45 min(观察肺无舒缩为阻断标准),再开放3,6 h(再灌注以肺恢复舒缩为标准)后取材,每次取7只,对照组仪行开胸术,于相同时间点同样方法分离肺组织.②实验评估:采用Annexin-V-PI双染法通过流式细胞仪检测肺组织凋亡细胞,计算凋亡率;采用免疫组织化学法及图像分析法观察肺脏天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达;计算2组大鼠左肺湿干质量比;计算肺泡损伤数比值进行肺组织损伤定量评价;光镜下苏木精-伊红染色观察肺脏的病理形态学变化.主要观察指标:①肺组织细胞凋亡率及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达.②肺湿干质量比及肺组织损伤定量评价结果.③肺组织病理形态学变化.结果:纳入大鼠28只均进入结果分析,无脱落.①实验组肺缺血再灌注3,6 h肺组织细胞凋亡率较对照组有明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01),实验组缺血再灌注6 h凋亡率较3 h有所降低(P＜0.05).②实验组大鼠肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达3 h达到高,6 h稍有下降,较对照组各时间点表达增加(P＜0.01).③实验组肺缺血再灌注3,6 h肺泡损伤数比值及肺脏湿干质量比值较对照组均明显增加(P＜0.01).实验组缺血再灌注6 h两比值较3 h有所增加(P＜0.05).④实验组肺泡结构破坏、塌陷、消失,肺泡间隔有大量的炎性细胞浸润,肺缺血再灌注6 h较3 h更严重.对照组无明显改变.结论:肺缺血再灌注早期可能通过天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达的改变,激活细胞的凋亡途径,诱导肺组织细胞凋亡的发生,从而导致肺损伤的发生.
关键词： 肺 再灌注损伤 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 凋亡 -
抑制p38MAPK通路对帕金森病模型小鼠黑质BAD和caspase-3表达的影响
目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路对亚急性帕金森病(PD)模型小鼠中脑黑质Bcl-xl/Bcl-2死亡相关因子(BAD)和半胱氨酸蛋白酶3(easpase-3)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元进行性变性丢失的可能机制.方法 健康雄性C57BL/6N小鼠45只,随机分为3组,(1)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)模型组:腹腔注射MPTP(30 mg/kg,溶于生理盐水),1次/d,连续5 d;(2)抑制剂组:在每次MPTP注射前1h腹腔注射SB203580(10 mg/kg,溶于5mg/ml DMSO)1次/d,连续5 d;(3)对照组:注射与模型组和抑制剂组等量的生理盐水和DMSO.观察模型小鼠行为学变化,中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、BAD、caspase-3和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的表达变化,及给予p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对上述表达变化的影响.结果 模型小鼠出现典型的PD行为学症状,中脑黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约60%和65%(P<001).p-p381APK、BAD和caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加(P<0.01);经p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理后,PD小鼠行为学症状改善,TH阳性神经元和蛋白水平下降程度明显减轻;中脑黑质BAD、caspase-3和p-p38NAPK阳性细胞数显著减少,蛋白水平下降明显(P<0.01).结论 p38MAPK通路在亚急性PD模型小鼠黑质BAD和caspase-3表达中可能有重要调控作用,p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对PD小鼠具有一定的神经保护作用.
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caspase-3在脑室内低温动物模型脑组织中的表达
目的:对家免急性脑出血模型进行脑室内低温保护,通过对动物行为和对出血灶周围脑组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的观察,探讨脑室内低温对家兔急性脑出血模型细胞凋亡的影响.方法:4～6月龄雄性家兔12只,随机分为等温组、低温组各6只.于右侧内囊点注入耳中动脉血0.5 ml制作脑出血模型.用双腔微导管穿刺左侧侧脑室,建立脑室内灌注装置,以等温/低温等渗盐水灌注2 h.术后24 h观察其肢体运动后取材、固定、染色,观察脑组织caspase-3表达情况.结果:经脑室内低温保护的动物肢体偏瘫程度轻,血肿周围脑组织内出现的caspase-3阳性细胞数量较少,与对照组的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:对家兔急性脑出血模型进行脑室内低温脑保护可以减少血肿周围脑组织的细胞凋亡,脑室内低温作为选择行脑部低温的一个新的思路值得关注.
关键词： 继发性神经元损伤 细胞凋亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 脑室内低温 -
大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及caspase-3、AIF的表达
目的 研究大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及caspase-3、凋亡诱导因子(AIF)的表达.方法 将78只成年健康Sprague-Dawley(SD)鼠按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8、T9)急性压迫损伤模型,HE染色观察脊髓组织病理学变化,免疫组化测定各时间点AIF和caapase-3的表达变化,原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平.结果 免疫组化结果显示正常及假手术组大鼠脊髓神经细胞caspase-3,AIF,TUNEL阳性细胞较少,脊髓损伤后1 d,AIF阳性细胞数明显增多(P<0.05),5 d表达减弱.caspase-3阳性细胞数在脊髓损伤后8 h明显增多,3 d迭高峰(P<0.01),7 d表达减弱.TUNEL阳性细胞数也在8 h明显增多,3 d达高峰(P<0.01),7 d表达减弱.结论 脊髓损伤后存在广泛的细胞凋亡现象,caspase-3、AIF均参与了细胞凋亡的调节.
关键词： 脊髓损伤 细胞凋亡 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 凋亡诱导因子 -
川芎嗪和葛根素配伍对脑缺血大鼠神经细胞调亡及Caspase-3影响
目的 探讨川芎嗪联合葛根素对于脑缺大鼠神经细胞调亡以及Caspase-3表达的影响. 方法 将96只SD大鼠模型随机分为假手术组( 12只)与造模组( 84只) ,造模组随机分为模型组、川芎嗪组、葛根素组、川芎嗪+葛根素组低剂量组、川芎嗪+葛根素组中剂量组、川芎嗪+葛根素组高剂量组和依达拉奉组7组,各12 只. 检测8组大鼠的神经功能行为学评分、脑组织病理学变化、细胞凋亡情况及Caspase-3水平变化. 结果 假手术组的神经功能缺失评分、凋亡细胞计数及Caspase-3表达水平均显著低于其余各组(P<0.05),且各治疗组均显著低于模型组(P<0.05);不同剂量川芎嗪+葛根素组的神经功能缺失评分、凋亡细胞计数及Caspase-3表达水平均降低(P<0.05);川芎嗪+葛根素高剂量组显著低于依达拉奉组(P<0.05). 结论 川芎嗪联合葛根素能够有效下调Caspase-3表达水平,减轻脑组织神经功能损伤,促进脑缺血大鼠的临床转归.
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糖尿病大鼠骨骼肌病变发病机制初步探讨
目的 初步探讨糖尿病大鼠骨骼肌病变可能的发病机制.方法 使用链脲菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,16只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为糖尿病组(随机血糖≥16.65 mmol/L)和正常对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定静脉血蛋白激酶(PKC)值,取后肢腓肠肌肌肉行苏木精-伊红(H-E)染色进行组织学观察,并采用免疫组织化学方法 测定肌肉组织碱性成纤维生长因子(b-FGF)、bax、B细胞淋巴瘤/白血病(bcl)-2和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)值,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测冷冻标本b-FGF、Caspase-3、bcl-2、bax的相对mRNA表达.结果 ①糖尿病组的骨骼肌表现为普遍性萎缩,纤维变性、水肿,部分区域坏死.②糖尿病组的静脉血PKC值显著高于正常对照组(P＜0.01).③糖尿病组的b-FGF值显著低于正常对照组(P＜0.05).④与正常对照组比较,糖尿病组的Caspase-3、bax均显著升高(P值均＜0.01),bcl-2、bcl-2/bax值显著降低(P值分别＜0.05、0.01).⑤与正常对照组比较,糖尿病组的b-FGF靶基因Ct值及bcl-2靶基因Ct值显著升高(P值分别＜0.05、0.01),而Caspase-3和bax的△Ct值显著降低(P值均＜0,01).结论 糖尿病组骨骼肌组织学变化主要表现为普遍性萎缩.PKC途径被激活、b-FGF减少及细胞凋亡共同参与糖尿病骨骼肌病变的发生和发展.
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Caspase-3和Caspase-6在胃癌组织中的表达及意义
目的 检测Caspase-3、Caspase-6 基因在胃癌组织、癌旁正常组织中的表达,探讨两者与临床、病理因素的关系及两者之间的关系.方法 采用RT-PCR方法检测42例胃癌患者的癌组织、癌旁正常组织中Caspase-3、Caspase-6 基因的表达情况,并分析这2个基因与临床、病理因素之间的关系.结果 Caspase-3、Caspase-6基因在胃癌组织中表达率分别为38.09%(16/42)、31.05%(13/42),在癌旁正常组织中的表达率分别为78.57%(33/42)、69.05%(29/42),两者在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.01).Caspase-3、Caspase-6 基因的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小差异无统计学意义(P＞0.05),与胃癌肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度差异有统计学意义(P＜0.05).Caspase-3 基因的表达与淋巴结转移差异有统计学意义(P＜0.05),Caspase-6 基因的表达与淋巴结转移差异无统计学意义(P＞0.05).在胃癌组织中,两者之间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Caspase-3、Caspase-6 基因的表达可能与胃癌的发生、发展相关,对胃癌发生、发展的过程起到下调的作用.联合检测Caspase-3、Caspase-6 基因的表达更能反映胃癌的生物学行为,优于单项检测.
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环扎法致大鼠脊髓损伤早期减压后caspase-3的表达及其与神经细胞凋亡相关性研究
[目的]探讨大鼠急性脊髓损伤后早期不同减压时间对神经细胞凋亡及caspase -3表达的影响.[方法]采用环扎法大鼠急性脊髓损伤压迫模型.84只SD大鼠,随机分成4组,对照组即A组:行椎板减压；实验组分为B组:环扎术后8h行减压术；C组:环扎术后72 h行减压术；D组:环扎术后不行减压术.分别于手术后1、3、7、21 d行HE染色、免疫组化染色测定caspase -3的表达、原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)标记法(TUNEL法)检测神经细胞的凋亡水平、行为学(BBB评分,斜板评分)观察大鼠神经功能恢复情况.[结果]各组不同时间点BBB评分、斜板评分之间比较具有显著性差异(P＜0.05)；实验组caspase -3、Tunel阳性细胞均在术后1d增多、3d达高峰、7d表达减弱、21 d仍有表达；不同时间点caspase -3、Tunel阳性细胞数比较均具有统计学差异,二者成正相关(r =0.69 ～0.98,P＜0.05).[结论]环扎法致大鼠脊髓损伤动物模型是一种理想的脊髓损伤造模方法.大鼠脊髓损伤早期减压可能阻止或减轻脊髓神经细胞凋亡.
关键词： 脊髓损伤 疾病模型 早期减压 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 细胞凋亡 -
弥漫性大B细胞淋巴瘤组织Livin和Caspase-3表达变化及意义
目的 探讨组织凋亡抑制蛋白Livin和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)发生、发展中的作用.方法 选择DLBCL患者69例(DLBCL组)、反应性增生性淋巴结炎(RHL)患者30例(RHL组),分别取两组病变淋巴组织标本,采用免疫组化法检测Livin、Caspase-3表达.分析DL-BCL组织Livin、Caspase-3阳性表达与患者临床病理参数和预后的关系.结果 DLBCL组病变淋巴组织Livin阳性表达率高于RHL组,Caspase-3阳性表达率低于RHL组,两组比较P均<0.05.GCB型DLBCL患者病变淋巴组织Livin阳性表达率低于非GCB型DLBCL患者,Caspase-3阳性表达率高于非GCB型DLBCL患者(P均<0.01);Ann Arbor分期为Ⅰ、Ⅱ期者病变淋巴组织Livin阳性表达率低于Ⅲ、Ⅳ期者,Caspase-3阳性表达率高于Ⅲ、Ⅳ期者(P<0.05).DLBCL病变淋巴组织Livin阳性表达与Caspase-3阳性表达呈负相关关系(r=-0.308,P<0.01).DLBCL患者Livin阴性表达者生存率高于Livin阳性表达者,生存时间长于Livin阳性表达者(P均<0.01);DLBCL患者Caspase-3阳性表达者生存率高于Caspase-3阴性表达者,生存时间长于Caspase-3阴性表达者(P均<0.01).结论 DLBCL病变淋巴组织Livin表达上调、Caspase-3表达下调,二者表达变化共同参与DLBCL的发生、发展,并与患者不良预后密切相关.
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工频电磁场对作业人员淋巴细胞凋亡相关基因mRNA水平影响研究
目的 探讨工频电磁场对作业人员周围血淋巴细胞凋亡相关基因P53、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)及其相关X蛋白基因(Bax)的mRNA水平及血浆天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白水平的影响.方法 随机选择某500 kV变电站工龄5年以上的45名工频电磁场巡检作业工人作为接触组,并按照1:1配对选取该变电站45名行政管理及后勤人员作为对照组.2组研究对象均采集周围静脉血,提取淋巴细胞,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定其淋巴细胞中P53、Bcl-2和Bax的mRNA水平,采用酶联免疫吸附实验法测定血浆Caspase-3蛋白表达水平.数据采用中位数与四分位数间距[M(P25,P75)]描述.结果 接触组和对照组人群P53mRNA相对表达量(RQ)分别为4.00(3.60,4.37)和4.21(3.70,4.64),Bcl-2 mRNA RQ为4.07(3.47,4.50)和4.04(3.48,4.35),Bax mRNA RQ为4.37(4.02,4.89)和4.53(4.11,4.85),Bcl-2与Bax的mRNA RQ比值为0.89(0.81,1.01)和0.87(0.80,0.95),Caspase-3蛋白表达水平分别为7.56(4.05,15.32)和9.70(6.40,21.13) pmol/L.2组上述5个指标比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 长期接触工频电磁场对机体淋巴细胞凋亡相关基因P53、Bcl-2、Bax的mRNA水平及血浆Caspase-3蛋白水平影响不明显.
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靶向shRNA抑制survivin基因对子宫内膜异位症裸鼠模型异位内膜caspase-3表达的影响
目的:利用慢病毒介导特异性短发夹状RNA(LV-shRNA) 靶向沉默生存素基因,观察其对子宫内膜异位症裸鼠模型异位病灶中caspase-3表达的影响.方法:建立人子宫内膜裸鼠皮下种植模型,将LV-shRNA、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至裸鼠皮下异位病灶,观察病灶生长情况.分别采用RT-PCR及免疫组化检测异位病灶中生存素、caspase-3 mRNA及蛋白的表达.结果:LV-shRNA处理组病灶体积、重量明显低于两对照组.与两对照组相比,LV-shRNA处理组生存素 mRNA及蛋白的表达量明显降低,caspase-3的表达量明显升高,而生存素及caspase-3的表达在两对照组之间相比,差异均无统计学意义.结论:LV-shRNA可明显抑制裸鼠异位子宫内膜病灶的生长,其机制可能与其通过下调生存素蛋白、激活下游的caspase-3诱导细胞凋亡有关.
关键词： 子宫内膜异位症 生存素 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 短发夹状RNA 裸鼠
