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HPLC-FD法测定羟基喜树碱在大鼠体内组织分布
目的:建立一种简单、灵敏、专属的反相高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FD)方法,测定大鼠体内十二个组织样本中的羟基喜树碱分布.方法:以喜树碱为内标,乙腈-0.1%三乙胺溶液(pH 3.0)(25∶75,v/v)为流动相,采用C18色谱柱(250 mm×4.5 mm,5 μm),柱温35 ℃,流速为1.0 ml/min,荧光检测的激发波长(Ex)为382 nm,发射波长(Em)为528 nm.结果:羟基喜树碱(HCPT)的保留时间约为9.9 min,内标物喜树碱(CPT)的保留时间约为19.8 min.组织匀浆中HCPT的低定量限为0.1 ng/ml(S/N>10).HCPT在各组织中一定浓度范围内线性关系良好,各组织中低、中、高浓度的回收率及日间精密度均符合方法学要求.结论:本文建立的HPLC-FD法可准确测定大鼠各组织样本中的羟基喜树碱分布.
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高效液相色谱荧光法测定加替沙星注射液的含量
目的建立高效液相色谱荧光法测定加替沙星注射液的含量方法.方法 CLC-ODS柱(15mm×6.0mm, 5μm),流动相:0.05mol/L枸橼酸-乙腈(80∶20),三乙胺调pH3.0,流速1 mL*min-1,Ex=360nm, Em=465nm,样品稀释1000倍,进样10μL.结果加替沙星在4～32ng范围内线性关系良好,回收率(99.98±0.06)%,日内、日间RSD＜2%.结论该法简便、快速、准确,可用于测定加替沙星注射液的含量.
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多吡啶钌配合物[（Phen）2 Ru（dppz）]（PF6）2的抗菌活性及机制研究
目的：研究多吡啶钌配合物[(Phen)2Ru(dppz)]( PF6)2的抗菌活性，并进一步探讨其作用机制。方法采用小抑菌浓度( MIC)以及小杀菌浓度( MBC)，测定无机配合物[( Phen)2 Ru( dppz)]( PF6)2的抗菌活性。为了阐明其抗菌机制，首先利用配合物自身荧光特性和核酸染料对DNA的竞争性结合所导致的荧光强度变化，以确定配合物与DNA的结合能力；然后通过DNA凝胶电泳，检测配合物与细菌基因组DNA结合后产生的效果以检测抗菌活性的机制。结果多吡啶钌配合物[(Phen)2Ru(dppz)](PF6)2对大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌活性，小抑菌浓度达0．2~0．4 g·L-1。荧光检测显示，配合物能够与细菌DNA发生结合，以此为基础，配合物能够干扰细菌的转录过程，抑制细菌生长。结论本研究证明了多吡啶钌配合物[( Phen)2 Ru( dppz)]( PF6)2的抗菌活性及作用机制，为其进一步开发奠定了基础。
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柱前衍生HPLC-FLD法测定水产品中3种麻痹性贝类毒素
目的 建立水产品中3种麻痹性贝类毒素成分(GTX2,3、dcSTX和STX)的柱前荧光衍生高效液相色谱(HPLC-FLD)检测方法.方法 样品用1％乙酸提取,C18固相萃取柱净化,2％ H2O2荧光衍生,以Symmetry(R)C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)为色谱柱分离,以乙腈和0.1 mol/L甲酸铵(5∶95)作为流动相,流速1.0 rnL/min,荧光检测器激发波长340 nm,发射波长395 nm.结果 该法在10～500 μg/L范围内线性关系良好,平均加标回收率为72.5％～88.6％,RSD为2.8％～4.7％.方法的检出限分别为dcSTX 3μg/kg、STX 10μg/kg和GTX2,34μg/kg.结论 本方法灵敏度高、结果可靠,为检测水产品贝类麻痹性毒素的含量提供了一种高效便捷的方法.
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柱前在线衍生-HPLC法测定大鼠脑脊液中天冬氨酸和谷氨酸的含量
目的 测定大鼠脑脊液中天冬氨酸和谷氨酸的含量. 方法 采用HPLC法,以邻苯二甲醛为衍生试剂,色谱柱为Hypersil AA-ODS(2.1 mm×200 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05 mol/L乙酸钠溶液(冰乙酸调pH=6.0),梯度洗脱(0→15 min,乙腈0％→60％),流速0.5mL/min,荧光检测(激发波长340 nm、发射波长450 nm),柱温为30℃. 结果 两者在5～200 pmol范围内线性关系良好,天冬氨酸的回收率为99.74％(RSD=2.55％),谷氨酸的回收率为102.1％(RSD =2.63％). 结论 该方法简单、快速、准确,可用于单只大鼠脑脊液中氨基酸的测定.
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荧光-反相高效液相色谱法同时测定小鼠脑组织中3种单胺类神经递质
目的 建立同时测定脑组织中3种单胺类神经递质含量的方法.方法 反相高效液相色谱-荧光检测法.结果 在色谱图上去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)完全分离.NE、DA和5-HT在0.05μg·mL-1～0.5μg·mL-1浓度范围内都呈现良好的线性关系(r>0.999);NE、DA、5-HT低检测限分别约为0.02μg·mL-1、0.02μg·mL-1、0.01μg·mL-1(S/N≥3);3种单胺类神经递质高、中、低浓度的平均相对回收率在90.10%～106.41%之间;日内变异(RSD)均小于8%.结论 本法简便、快速、准确.可用于脑组织中NE、DA、5-HT的含量测定.
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高效液相-荧光检测法测定兔血浆中羟基喜树碱的含量
目的 建立高效液相-荧光检测法测定兔血浆中羟基喜树碱含量的方法学.方法 色谱柱为Discovery C18(15cm×4.6mm,5μm),流动相为柠檬酸缓冲液-乙腈-75nmol·L-1-磷酸二氢钾(70∶23∶7),75nmol·L-1磷酸二氢钾中含1%三乙胺.流速为1.0ml·min-1,柱温为40℃,荧光检测波长为λex363nm和λem 530nm.结果 该方法的线性范围为13.7656～1957.4468ng·mL-1(r=0.9993).提取回收率和方法回收率分别为 80.90%～103.59%,102.72%～108.16%.日内RSD7.49 %,日间RSD9.40 %.低检测限为5.2ng·mL-1.结论 该方法专属性强,重现性好,操作简便,适用于羟基喜树碱的药代动力学研究和血药浓度监测.
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阿霉素磁性毫微球的制备及其含量测定
本文以阿霉素为模型药物,Fe3O4为磁核材料,单体乙烯吡略烷酮为载体材料,通过反相乳液聚合方法制备了阿霉素磁性毫微粒,研完了制备过程中投药量以及NVP用量对药物包封率的影响,并对其俸外释放性进行研究.结果 发现阿霉素磁性毫微粒裁药量随着阿霉素投入量的增加先是增加而后变化不大,而包封率则逐渐下降;阿霉素磁性毫微粒栽药量随着载体材料用量的增加逐渐下降而包封率则不断增加.在体外释放研究中,毫微粒栽药量越大,突释部分越大,累积释放速率也越大.
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UF-100分析仪检测结果偏低原因与故障排除
UF-100是日本SYSMEX公司生产的全自动流式尿液有形成分分析仪,运用流式细胞技术,通过对前向散射光和荧光检测,可以自动定量计数尿液的红细胞、白细胞、上皮细胞、管型及细菌并对红细胞形态做出判断,能对有形成分正常和异常的尿液标本进行筛选,并提示样本所含的异常成分.UF-100采用全封闭的自动进样,具有手工无法比拟的重复精度、极低的互染率[1]、快速、较高的精度[2]等优点,但是在日常工作过程中先进的自动化仪器有时也会出现故障,导致检测结果偏低,因此我们结合10年来使用UF-100过程中仪器出现群体检测结果偏低的原因,总结如下,以供参考.
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9个STR位点荧光法检测与血型血清学方法鉴定亲子关系的对比研究
目的对血型血清学与PCR-STR荧光检测这两种鉴定亲子关系的实验方法进行对比研究.方法常规亲子鉴定中.采用血型血清学方法检查ABO、Rh、MN、P、HLA-A、B等血型,PCR～STR荧光法分析D8S179等9个STR位点长度多态性.结果①在166例亲子鉴定中,认定亲生关系的为132例,排除亲生关系的34例;②132例认定亲生关系案例中,血清学方法RCP值介于83.40%～99.9%,平均96.27%;而PCR-STR方法RCPP值介于99.82%%～99.99998%,平均99.986%.③34例排除亲生关系的案例中,血清学方法排除33例,排除的血型系统和HLA位点为1～4个,平均1.8个:而PCR-STR方法排除34例,排除的STR位点为3～9个,平均5.8个;血清学不排除而STR位点排除亲生关系的案例有1例.④观察264次减数分裂,发现FGA、A7S820位点各突变1次.结论本文的9个STR位点的非父排除概率高于血清学方法.当9个STR位点均符合遗传规律时,RCP值通常可达99.99%;但STR位点存在基因突变,需增加其它的遗传标记进行检测,以保证结果的准确.
关键词： 短串联重复位点(STR) 复合扩增 荧光检测 血清学 亲子鉴定 -
高效液相色谱法测定空气中九种多环芳烃
目的 建立一种高效液相色谱-紫外检测器串联荧光检测器(HPLC-UVD-FLD)同时测定空气中9种常见多环芳烃(PAHs)的检测方法.方法 将吸附有空气样品的滤膜经乙腈密封超声水浴提取处理后,以乙腈和水为流动相,进行高效液相色谱梯度淋洗分离,荧光检测器和紫外检测器检测.实验中分别对流速、流动相梯度、柱温等方面进行优化,获得优的色谱分离条件.结果 9种多环芳烃化合物在65min内得到了很好的分离,在0.5μg/L～ 100 g/L范围内线性关系良好,测定的相对标准偏差为0.90％ ～2.8％,加标回收率为86％～130％,符合方法学要求.结论 该方法简便、灵敏、重现性好,可用于测定空气中9种多环芳烃类化合物的同时测定.
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高效液相色谱-荧光检测法测定植物油中15种多环芳烃
目的 建立超声提取-SPE净化-高效液相色谱-荧光检测器检测植物油中多环芳烃(PAHs)的方法.方法 乙腈+丙酮(1+1)提取,Oasis HLB和Sep-Pak Florsil小柱净化,采用PAHs专用分析柱,乙腈、甲醇和水为流动相梯度洗脱,荧光检测器检测植物油中PAHs的浓度,外标法定量.结果 15种PAHs在20 ng/ml～ 400 ng/ml范围内线性关系良好,检出限0.012 μg/kg～ 0.92 μg/kg,加标回收率75.0％ ～ 108％,相对标准偏差RSD 0.63％～ 1.54％.结论 该方法检出限低、灵敏度高、重复性好,适用于植物油中15种多环芳烃的检测.
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固相萃取-高效液相色谱荧光法同时测定辣椒面中罗丹明B和罗丹明123
目的:建立固相萃取-高效液相色谱荧光法同时测定辣椒面中罗丹明B和罗丹明123的分析方法.方法:样品经甲醇/水溶液(1∶1,V/V)提取,过Strata-X-CW固相萃取小柱净化,用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6mm×5 μm)以含0.1％甲酸(V/V)的乙腈/水为流动相进行梯度洗脱分离,荧光检测器测定,罗丹明B采用λex556 nm,λem581 nm,罗丹明123采用λex518 nm,λem542 nm检测,外标法定量.结果:罗丹明B在2.0 μg/L ～ 100.0 μg/L和罗丹明123在1.0 μg/L～50.0 μg/L范围均具有良好的线性(R2＞0.9994),2种待测物的回收率在94.5％ ～ 104.6％范围,RSD均小于5.0％,低定量检出限在1.0 μg/kg ～2.0 μg/kg范围.结论:该方法具有前处理简单,梯度洗脱分离效果和重现性好等优点,能满足实际工作的需要.
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高效液相色谱荧光检测法同时测定婴幼儿食用鱼粉中环丙沙星和恩诺沙星残留量
目的:建立用高效液相色谱荧光检测器同时测定婴幼儿食用鱼粉中环丙沙星和恩诺沙星残留的方法.方法:试样经水复原后,由5%乙酸乙腈提取,正己烷脱脂,以0.05 mol/L磷酸三乙胺缓冲液-乙腈(体积比为85:15)为流动相洗脱,荧光检测器定性定量.结果:该方法对测定的两种药物的检出限均为5μg/kg,定量限均为10μg/kg.两种约物在5μg/L～80μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99.在添加水平分别为10μg/kg、20μg/kg和80μg/kg时,两种药物的加标同收率为80.3%～92.6%.相对标准偏差(RSD)为1.2%～3.8%.结论:方法操作简单、重现性好、灵敏度高、分析时间短,适用于鱼粉中环丙沙星和恩诺沙星残留的确证检测.
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固相萃取-HPLC-荧光检测法测定血浆中的儿茶酚胺及其代谢产物
目的:建立吸毒人员血浆中儿茶酚胺及其代谢产物的高效液相色谱测定方法.方法:采用固相萃取方法对血浆样品进行预处理.利用高效液相色谱分离待测物,后使用荧光检测器检测儿茶酚胺及其代谢产物.结果:以弱酸性乙酸盐缓冲体系/庚烷磺酸钠离子对试剂/甲醇作为流动相,采用梯度洗脱的方式,7种儿茶酚胺及其代谢产物能完全分离.利用SUPELCO RIDA C18小柱处理加标血浆样品,在优化的佳洗脱条件下,加标回收率在85.6%～106.3%范围内.方法的相对标准差(RSD)为2.3%～6.7%.各被测物质线性关系良好,相关系数均大于0.997,检出限为5.0μg/L～50.0μg/L.结论:该方法简便快速、灵敏度高,适用于血浆中儿茶酚胺及其代谢产物的测定.
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固相萃取-高效液相色谱法测定全血中克林沙星
目的:建立一种灵敏、可靠的全血中克林沙星的固相萃取高效液相色谱荧光检测方法.方法:样品经磷酸盐缓冲液提取后用Oasis(R) MAX小柱净化,采用乙腈-0.2%甲酸(30:70,v/v)为流动相,在Cloversil-C18柱(150 mm×3.0 mm,5 μm)上进行分离,荧光法检测,以环丙沙星为内标进行定量,荧光检测波长为λeχ290 nm和λex 490 am.结果:全血中克林沙星含量在5.0～1000.0 μg/L范围内呈良好线性,方法回收率在87.0%～95.2%之间,RSD<6.0%,其定量检出限为5.0 μg/L.结论:本方法简便、灵敏、干扰少、特异性好,能满足全血中克林沙星的临床药物残留的检测要求.
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紫外/荧光检测快速测定水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物
目的:建立水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的紫外、荧光检测器串联检测方法.方法:样品经Mcllvaines缓冲液(pH3.0)+乙腈混合溶液(1+2)提取,MCX柱净化,synergy C18色谱柱(250×4.6 inm,5 μm)洗脱分离.紫外、荧光检测器串联检测.外标法定量.结果:0-100 μg/L范围内线性关系良好,相关系数r>0.999.检测限0.052～1.2 μg/kg,平均回收率均大于70%,相对标准偏差均小于10%.结论:方法便捷、实用,适合水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的同时榆测.
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离子色谱-荧光检测同时测定3种喹诺酮类药物
目的:建立一种离子色谱-荧光检测方法,用于同时测定3种喹诺酮类药物-诺氟沙星(Norfloxacin NOR)、环丙沙星(Ciprofloxacin CIP)和恩诺沙星(Enoxaein ENO).方法:选用Dionex OmniPae PAX 500色谱柱,淋洗液为15 mmol/L H2SO4内含有35%(V/V)甲醇,流速1.0 ml/min,荧光检测激发波长和发射波长分别是347和420 am.结果:在1～100μg/ml浓度范围内,各待测物线性关系良好(r＞0.9995,n=8),NOB、CIP和ENO的检测限(信噪比S/N=3)分别是50、105、80 ng/ml,NOR和CIP片粉中加样回收率分别是103.5%和100.1%.结论:该方法准确、灵敏、快速,可用于药物制剂和食品中药物残留分析.
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高效液相柱后衍生法测定婴幼儿食品中的叶酸
目的:检测婴儿食品中叶酸的含量.方法:采用反相高效液相法,选用含12%乙腈+88%0.05 mmol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3.5)作为流动相,流速1 ml/min,经ODS C-18反相色谱柱分离,柱温设为40 ℃,以0.5%过二硫酸钾溶液为衍生剂,流速为0.3 ml/min,反应温度为60 ℃,使用荧光检测器检测定量,激发波长为365 nm,发射波长为450 nm,外标法测定叶酸含量.结果:本法测定线性范围能达到40～500 μg/L,相关系数为0.9992,低定量检测限为28.72 μg/L,平均回收率能达到86.6%～96.0%,相对标准偏差为1.5%.结论:本方法简单、快捷、灵敏,满足日常分析要求.
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荧光检测法测定人体尿液中3-甲基组氨酸
目的研究建立人体尿液中3-甲基组氨酸(3-MH)分离检测方法.方法邻苯二甲醛衍生剂与3-MH形成荧光衍生物,用高效液相色谱与荧光检测器系统分析测定尿液3-MH的含量.结果 3-MH与尿液中其它杂质得到完全分离,并有良好的线性关系和回收率.结论该方法特异性高,为临床手术后病人的康复治疗提供了有价值诊断方法.
