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柱前在线衍生-HPLC法测定大鼠脑脊液中天冬氨酸和谷氨酸的含量
目的 测定大鼠脑脊液中天冬氨酸和谷氨酸的含量. 方法 采用HPLC法,以邻苯二甲醛为衍生试剂,色谱柱为Hypersil AA-ODS(2.1 mm×200 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05 mol/L乙酸钠溶液(冰乙酸调pH=6.0),梯度洗脱(0→15 min,乙腈0%→60%),流速0.5mL/min,荧光检测(激发波长340 nm、发射波长450 nm),柱温为30℃. 结果 两者在5~200 pmol范围内线性关系良好,天冬氨酸的回收率为99.74%(RSD=2.55%),谷氨酸的回收率为102.1%(RSD =2.63%). 结论 该方法简单、快速、准确,可用于单只大鼠脑脊液中氨基酸的测定.
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反相高效液相色谱结合柱前衍生化法测定人血清中L-门冬酰胺
目的:建立反相高效液相色谱法( RP - HPLC)快速准确测定人血清中L-门冬酰胺(L- ASN).方法:用已耗竭LASN的人血清为空白生物基质建立标准曲线,邻苯二甲醛在线柱前衍生样品,ZORBAX Eclipse AAA柱(4.6mm×150 mm,5μm)分离衍生化产物.采用内标法根据荧光响应值定量分析.结果:L- ASN与内标高丝氨酸的衍生物均在16 min内出峰,在2~100 μmol·L-1的范围内方法线性关系良好(r >0.999),低定量限为2μmol·L-1,日内与日间精密度(RSD)均小于12.9%,回收率在96.9%~108.3%之间,平均提取回收率为58.2%,血清中L-ASN -80℃冻存四周保持稳定.结论:建立了RP - HPLC结合柱前衍生化测定人血清中L- ASN的方法,并应用于临床血清样品中L- ASN的定量测定.