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首批肠道病毒71型人免疫球蛋白国家标准品的研制
目的 制备首批肠道病毒71型免疫球蛋白国家标准品,用于肠道病毒71型特异性免疫球蛋白产品效价测定.方法 选择国内经批签发检验合格的静注人免疫球蛋白产品以及高效价肠道病毒71型人免疫球蛋白作为原料进行合并,分装冻干后并按规定对标准品的水分含量、分装精度、无菌检查和稳定性进行考察.在5家实验室按微量细胞病变法进行协作标定,以肠道病毒71型中和抗体滴度的倒数作为中和效价,单位定义为u.结果 5家实验室共进行了63次协作标定,结果均经LOG转换后进行计算,实验室内几何变异系数GCV范围为1.5％～4.1％,实验室间几何变异系数GCV平均值为3.1％,效价几何平均值为327 U.为以后使用和计算方便,该批次标准品赋值为330 U.该标准品160 d加速破坏实验和22 m长期稳定性考察显示效价稳定无下降趋势,12 m测定不同温度点的单体加二聚体(HPLC-SEC法)含量大于98.0％,有效成分稳定.该标准品的水分含量为0.6％,分装精度为0.56％,无菌检查合格.结论 该批肠道病毒71型人免疫球蛋白标准品各项检测指标符合要求,可以作为国家标准品发放用于肠道病毒71型特异性免疫球蛋白的效价测定.
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利用DNA免疫技术制备麻疹病毒抗血清
目的 利用DNA免疫技术制备特异性麻疹病毒抗血清,用于麻疹减毒活疫苗毒种以及含麻疹病毒疫苗的检定.方法 以含麻疹病毒沪-191融合蛋白F和血凝素H基因的重组真核表达载体pGI-F和pGI-H作为免疫原,免疫家兔,制备麻疹病毒抗血清.采用细胞培养法检测抗血清细胞毒性,ELISA法检测抗体滴度,微量细胞病变法检测抗血清的特异性和中和效价.结果 麻疹病毒抗血清细胞毒性小,与风疹病毒、腮腺炎病毒、水痘病毒均无交叉反应.抗血清的ELISA效价大于256 000,中和效价为1∶1 024,4倍稀释后仍能完全中和1×105 CCID50/ml麻疹病毒.结论 DNA免疫方法可制备高效价、低细胞毒性的麻疹病毒抗血清,该血清可用于麻疹疫苗毒种及含麻疹疫苗的质量控制.
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人SARS特异性免疫球蛋白生物学活性的研究
目的研究人SARS特异性免疫球蛋白的生物学活性.方法采用病毒终点法中和试验、酶联免疫及Western blot等方法对人SARS特异性免疫球蛋白体外中和NS-1 SARS病毒株的中和指数、中和效价、抗体滴度以及与NS-1 SARS病毒株灭活疫苗的反应性进行研究.结果8份用于生产人SARS特异性免疫球蛋白的恢复期病人血清的中和指数均在186～112 200之间;8份混合原料浆和SARS特异性免疫球蛋白的中和效价分别为1:200和1:1 000;ELISA效价分别为1:8和1:64;与NS-1 SARS灭活疫苗的Western blot在相对分子质量约210 000、120 000和47 000处有明显的条带.结论人SARS特异性免疫球蛋白能有效中和SARS病毒,且与灭活SARS疫苗具有强反应性.
关键词： 人SARS特免球蛋白 中和效价 反应性 -
治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体质量分析
为了对治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体3批中试产品进行全面的质量分析,我们参照国家药品监督管理局颁布的<人用鼠源性单克隆抗体制造及检定规程>进行检定.结果所有指标均合格,其中单抗纯度＞95%,单抗IgG单体纯度＞95%,残余骨髓瘤细胞(SP2/0)DNA含量＜100pg/剂量,采用微量细胞培养中和试验检测抗体中和效价＞1:12800～1:25600,无菌试验、异常毒性试验、鼠源性病毒检测、支原体检测、热原质试验均合格.在自检合格的基础上,送中国药品生物制品检定所检定合格.表明所制备的抗HFRS病毒单克隆抗体3批中试产品均符合临床观察的质量要求.
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特异性抗体效价检测技术概述
特异性抗体效价是生物制品活性(浓度)的重要标志,通常采用生物学方法来测定,并以抗体与其相应抗原反应产生的、可观察到的标准免疫反应来表示.抗原抗体间除发生特异性反应外,还会产生交叉反应,从而使特异性抗体效价的检测出现偏差,这在实际应用中亟需避免.特异性抗体效价检测技术是疾病诊断、特异性免疫球蛋白制备和疫苗评价等领域的关键技术,在生物制品质量控制及医学临床实践中意义重大.本文对抗体效价检测的常规技术及其研究进展进行简要综述,并对这些技术的特异性、灵敏性、检测周期及应用情况等方面进行比较分析,以期对特异性抗体效价检测技术有一个系统全面的认知,有利于研究人员在实际应用中选择合适的技术,共同推动抗体检测技术的发展.
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利用噬菌体肽库筛选汉滩病毒受体结合表位的研究
目的 确定汉滩病毒(HTNV)上可与宿主细胞受 体结合的一段配基表位. 方法 型特异性mAb 3G1,与HTNV 糖蛋白G 2及核蛋白(NP) 具有双结合活性,且中和效价很高. 以纯化的mAb 3G1作为配基,淘筛噬菌 体随机12肽库,经ELISA法鉴定后,对阳性克隆进行测序并与天然病毒蛋白G2及NP的序列进 行同源性比较分析. 结果 经3轮筛选,噬菌体显示有良好的富集效 果. 从第3轮筛选产物中,随机挑取21个克隆进行ELISA结合实验. 结果显示, 9个克隆与mAb 3G1有较强的特异结合活性;DNA测序结果表明,具有保守性序列模式PX(1-2)HX (0-2)H. 该基序分别与G296YPWHTAKCHY105及NP 81PTGVEPGDHL KERS94相似. 结论 从噬菌体随机肽库中,筛选到能与 mAb 3G1特异性结合的一段短肽基序PX(1-2)HX(0-2)H, 其与HTNV G2部分氨 基酸的同源性较高, 可能是与宿主细胞受体结合的表位, 为进一步证实和研究HTNV的受体 奠定了基础.
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高效价腮腺炎病毒抗血清的制备及检定
目的：制备高效价腮腺炎病毒抗血清，用于麻腮、麻腮风、麻腮风水痘联合疫苗的病毒滴定及鉴别试验等指标的检定。方法将腮腺炎病毒ME株接种于SPF鸡胚尿囊腔中，优化病毒制备工艺条件，收获高滴度病毒原液，制备免疫抗原；采用皮下多点注射法免疫SPF豚鼠，制备抗血清并对其进行中和效价、中和能力以及特异性干扰试验的检定。结果 ME株腮腺炎病毒以102倍稀释接种鸡胚尿囊腔，培养5 d经－20℃预冷1 h后，收获的尿囊液病毒滴度高；以其免疫豚鼠所制备的抗血清平均中和效价达1∶3276，高于鸡抗腮腺炎病毒血清；当豚鼠抗腮腺炎病毒血清稀释度为1∶320时，可完全中和1000 CCID50／mL的腮腺炎病毒；豚鼠抗腮腺炎病毒血清对Vero细胞、RK-13细胞及2BS细胞的生长，均未见干扰及细胞毒性作用；豚鼠抗腮腺炎病毒血清对异种病毒（麻疹病毒、风疹病毒和水痘病毒）滴度的干扰试验显示，各病毒滴度其试验组与对照组的差值均＜0．50 lgCCID50／mL，表明豚鼠抗腮腺炎病毒血清对麻疹病毒、风疹病毒和水痘病毒的滴度均无干扰；豚鼠抗腮腺炎病毒血清及鸡抗腮腺炎病毒血清对麻腮风水痘联合疫苗各病毒滴度均无干扰，且两种抗血清之间差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论采用优化后的病毒制备工艺条件及免疫方法，可获得较高效价的抗腮腺炎病毒血清，经检定和验证，均符合含腮腺炎成分疫苗检定抗血清使用要求。
