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TUNEL法检测复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏细胞的保护作用
目的 研究复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏细胞的保护作用.方法 40只大鼠随机分为正常组、模型组(生理氯化钠10 ml·kg-1)和复方葛根片低、中、高剂量组[200、400、800mg(生药)·kg-1],每组8只.除正常组外,其他各组大鼠每天9:00腹腔注射D-半乳糖溶液250 mg·(kg·d)-1复制衰老模型,每天15:00灌胃注射相应药物,连续给药8周.计算肝脏指数,采用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测衰老大鼠肝脏组织的细胞凋亡情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠肝脏指数显著增加(P＜0.01);肝脏组织中红色荧光明显增多,凋亡指数显著增加(P＜0.01);与模型组比较,复方葛根片高、中、低剂量组中大鼠肝脏指数显著减小(P＜0.05或P＜0.01);肝脏组织中红色荧光明显减少,亮度降低,凋亡指数显著减小(P＜0.05或P＜0.01).结论 复方葛根片能抑制衰老模型大鼠肝细胞凋亡,减少凋亡细胞的产生,起到保护肝脏细胞的作用.
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复方葛根片对衰老模型大鼠血管氧化应激的保护作用
目的 观察复方葛根片对衰老大鼠血管氧化应激的保护作用.方法 将50只Wistar大鼠按体质量随机分为5组,正常对照组、D-半乳糖(150 mg·kg-1·d-1,腹腔注射)造模组、D-半乳糖+复方葛根片(0.406、0.203、0.102mg·kg1·d1)剂量组,灌胃给药,49 d后黄嘌呤氧化酶法测定各组大鼠血清中超氧化物歧化酶的活性,比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶的活性,TBA法测定丙二醛的含量,取胸主动脉制作病理切片.结果 模型组大鼠血清中的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性降低,丙二醛含量升高(P＜0.05),血管组织结构病变严重.各给药组与模型组相比均有不同程度的改善.结论 复方葛根片对大鼠血管的氧化应激具有一定的保护作用.
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HPLC法测定复方葛根片中延胡索乙素的含量
目的 建立HPLC法测定复方葛根片中延胡索乙素含量的方法.方法 色谱柱:SHIMADZU VP-ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-0.1％磷酸水溶液(三乙胺调pH值至6.0)(30∶ 25∶ 45);检测波长:280 nm;柱温:30℃;流速:1.0 ml·min-1.结果 延胡索乙素在0.0112 ～0.0896 mg ·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9997,n=5),平均回收率为98.87％,RSD为0.52％.结论 本方法简便可靠,重复性好,可用于该制剂的质量控制.
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复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏超微结构与功能的影响
目的 研究复方葛根片对衰老模型大鼠肝脏超微结构与功能的影响.方法 大鼠40只,随机分为正常组、模型组、复方葛根片低、中、高剂量(0.2、0.4、0.8 g ·kg-1)组,每组8只.按相关试剂盒操作分别检测血清肝酶指标:血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆汁酸(TBA)、腺苷脱氨酶(ADA).电镜下观察各组大鼠肝脏细胞超微结构.结果 复方葛根片能使血清中AST、TBA以及ADA水平明显降低,细胞内肿胀线粒体、脂滴减少.结论 复方葛根片对D-半乳糖致衰老模型大鼠肝脏结构与功能具有一定保护作用.
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HPLC法同时测定复方葛根片中2种丹参酮类化合物的含量
目的 建立HPLC法测定复方葛根片中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量方法,以便更好的控制复方葛根片质量.方法 采用HPLC法,色谱柱:SHMADZU VP-ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.05％-磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱:0 ～ 15 min,10％ ～50％A;15～ 25 min,50％ ～80％A;25 ～ 30 min,80％～90％A;检测波长:270 nm;柱温:30℃;流速:1.0 ml ·min-1.结果 隐丹参酮在0.10～0.25 μg范围线性关系良好(r=1),丹参酮ⅡA在0.11 ～0.275μg范围线性关系良好(r=0.999);平均回收率分别是99.83％、98.98％,RSD值分别是1.08％、0.81％.结论 本方法简便可行,重复性好,可用于该制剂的质量检测.
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复方葛根片对衰老模型大鼠骨质的保护作用
目的 研究复方葛根片对衰老模型大鼠骨的保护作用,进而分析其作用机制.方法 将大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性组(苯甲酸雌二醇)和复方葛根片低、中、高剂量组,除正常对照组外其余各组于上午9:00注射大剂量D-半乳糖溶液,制备亚急性衰老模型,阳性组和复方葛根片低、中、高剂量组于下午15:00灌胃给药,连续8周后,禁食24 h,腹腔取血,摘取卵巢或附睾,制备其病理切片,备用.结果 复方葛根片能增加血液中的血清钙、血清磷、碱性磷酸酶含量(P＜0.05),显著降低骨钙素水平(P＜0.05,P＜0.01)、增加雌激素的水平(P＜0.05,P＜0.01),改善卵巢、附睾的组织细胞结构,维持其正常的生理功能.结论 复方葛根片通过改善性腺组织细胞的结构,增强其生理功能,调节性激素的分泌,从而改善骨代谢,起到保护衰老模型大鼠骨骼的作用.
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复方葛根片的质量标准研究
目的 建立复方葛根片的质量标准.方法 对葛根、丹参2味中药,采用薄层色谱法定性鉴别;用高效液相色谱法对葛根中的葛根素进行定量分析,建立其质量标准.结果 在薄层色谱中检出葛根素、丹参酮ⅡA特征斑点;葛根素在0.076～1.52μg范围内有良好的线性关系,回归方程为Y=280 120X+15 605,r=0.999 8(n=6);该试验方法具有良好的重复性,RSD为1.40%;平均回收率为96.02%.结论 所建立的方法可准确快速地进行定性、定量检测,且方法简便、准确,专属性强,重复性好,可作为该制剂的质量控制方法.
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TUNEL法检测自拟复方葛根片对老龄大鼠子宫的保护作用
目的 研究自拟复方葛根片对老龄大鼠子宫的保护作用.方法 40只Wistar大鼠随机分成5组(正常组、模型组、复方葛根片低、中、高剂量组),每组8只.按相关试剂盒操作分别测定血清中雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)浓度;采用TUNEL法检测衰老大鼠子宫的细胞凋亡情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠E2浓度降低,FSH、LH、PRL浓度升高(P＜0.01),造模成功;与模型组比较,复方葛根片各用药组中E2浓度升高,FSH、LH、PRL浓度降低(P＜0.05或P＜0.01).与正常组比较,模型组大鼠子宫切片中红色荧光明显增多,凋亡指数显著增加(P＜0.01);与模型组比较,复方葛根片各用药组中红色荧光明显减少,凋亡指数显著减小(P＜0.05或P＜0.01).结论 复方葛根片能调节雌激素水平,同时抑制老龄大鼠子宫细胞凋亡,减少凋亡细胞的产生,起到保护子宫,延缓衰老作用.
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HPLC法测定复方葛根片中绿原酸的含量
复方葛根片是济南军区总医院制剂室生产的一种活血化瘀类中成药,制剂标准符合《中国人民解放军医疗机构制剂规范》(2002年增补版). 该中成药由葛根、丹参、茵陈和延胡索组成,具有活血化瘀,和气止痛,生津养心的作用,临床主要用于心脑血管等疾病的治疗[1].
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复方葛根片中4种有效成分的薄层色谱法鉴定
复方葛根片为笔者所在医院传统制剂，在医院临床应用已30余年，2002年被《中国人民解放军医疗机构制剂规范（2002年版）》增补本收编。由葛根、丹参、茵陈、延胡索四味药材组合而成，具有活血化瘀、行气止痛、生津养心的功效，临床用于治疗冠心病、心绞痛和心肌梗死［1］。为了更好地控制该药的质量，笔者在原质量标准基础上，用薄层色谱方法对方中四味药材葛根、丹参、茵陈、延胡索均进行了鉴定。
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复方葛根片对老龄大鼠肝细胞再生与凋亡的影响
目的:研究复方葛根片对老龄大鼠肝细胞再生与凋亡的影响.方法:40只大鼠随机分为正常组、模型组(生理盐水,10ml/kg)和复方葛根片低、中、高剂量组[200、400、800 mg(生药)/kg],每组8只.除正常组外,其他各组大鼠每天上午9:00 ipD-半乳糖溶液[250 mg/(kg·d)]复制衰老模型,每天下午15:00 ig相应药物,连续给药8周.按相关试剂盒操作分别测定血清、肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及肝脏中脂褐素(LPF)含量,并观察各组大鼠肝脏组织病理变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清和肝组织中SOD活性显著降低,MDA、LPF含量显著升高(P＜0.01);肝脏淋巴细胞显著增加,散在凋亡细胞增多,淋巴细胞在汇管区灶性浸润、肝血窦散在浸润.与模型组比较,复方葛根片低、高剂量组大鼠血清中SOD活性显著升高(P＜0.05或P＜0.01);中、高剂量组大鼠血清中MDA含量显著降低(P＜0.01),肝组织中SOD活性显著升高(P＜0.05或P＜0.01);低、中、高剂量组大鼠肝组织中MDA、LPF含量显著降低(P＜0.05或P＜0.01);肝脏淋巴细胞减少,凋亡细胞少见,双核细胞显著增多.结论:复方葛根片能增加老龄大鼠肝细胞再生,减少其凋亡.
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复方葛根片对糖尿病肾病模型大鼠肾组织的保护作用
目的：探讨复方葛根片对糖尿病肾病模型大鼠肾组织的影响。方法：采用高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病肾病大鼠模型；设立正常组。将模型大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组（厄贝沙坦片）和复方葛根片低、中、高剂量[0.102、0.203、0.406 g/（kg·d）]组（n为8～10）。各组灌胃给予相应药物后在第1、14、28、42、56天分别检测空腹血糖（FBG）、24 h尿蛋白；末次给药后检测血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）及肾脏指数（KI），观察肾脏组织病理学情况。结果：与正常组比较，造模后各组大鼠不同时间点FBG水平均升高，第28天后24 h尿蛋白水平均升高（P＜0.05或P＜0.01）。与模型对照组比较，第42天起复方葛根片中、高剂量组FBG水平降低（P＜0.05或P＜0.01），第28天起复方葛根片各剂量组24 h尿蛋白水平均降低（P＜0.05或P＜0.01）；复方葛根片中、高剂量组BUN、TC、TG、KI均明显降低，3个剂量组SCr均升高（P＜0.05或P＜0.01）；各给药组大鼠肾脏细胞形态结构明显改善。结论：复方葛根片能纠正脂质代谢紊乱，减少尿蛋白，改善肾功能，对糖尿病肾病大鼠的肾组织有一定的保护作用。
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复方葛根片对维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠的治疗作用
目的：研究复方葛根片对维甲酸致大鼠骨质疏松的影响。方法：采用ig维甲酸溶液15 d的方法建立骨质疏松模型；设立正常组。将造模成功后的大鼠随机分为模型对照组、仙灵骨葆胶囊[0.32 g/（kg·d）]阳性对照组及复方葛根片低、高剂量[0.24、0.4 g/（kg·d）]组（n＝8），ig 6周。取血清样本测定血清钙（s-Ca）、血清磷（s-P）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）的水平，采用骨密度仪测定骨密度（BMD）、骨矿物质含量（BMC）、骨影面积（BIA）和肌肉含量（MC），并观察骨密质扫描结果。结果：与正常组比较，模型对照组大鼠s-Ca、BMD、BMC、MC水平降低，BGP水平升高（P＜0.05或P＜0.01）；与模型对照组比较，复方葛根片组各相关指标及骨密质扫描结果均有改善，其中高剂量组s-Ca、s-P、ALP、BMD、MC水平升高，BGP水平降低，低剂量组BMD、MC水平明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论：复方葛根片可以改善维甲酸致大鼠骨质疏松。
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复方葛根片对D-半乳糖致衰老模型大鼠心肌的保护作用
目的：研究复方葛根片对衰老模型大鼠的心肌保护作用。方法：将大鼠分为正常组、模型对照组、阳性对照组（维生素E）和复方葛根片高、中、低剂量（800、400、200 mg/kg）组，后5组大鼠连续ip D-半乳糖溶液30 d建立大鼠衰老模型，从第31天起再每7天1次同时给予相应药物连续56 d。末次给药后检测各组大鼠的血清与心肌中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及心肌中脂褐素（LPF）水平，计算凋亡心肌细胞数，观察心肌组织病理形态。结果：与正常组比较，模型对照组大鼠血清、心肌组织中SOD活性均明显降低，MDA、LPF水平显著增加，凋亡心肌细胞数明显增加（P＜0.01），心肌细胞明显损伤；与模型对照组比较，复方葛根片各剂量组大鼠血清、心肌组织中SOD活性明显升高，MDA、LPF水平明显降低，凋亡心肌细胞数明显降低（P＜0.05或P＜0.01），且心肌细胞明显改善。结论：复方葛根片对D-半乳糖导致的大鼠衰老心肌细胞具有明显的保护作用，其机制可能与增加SOD活性与降低MDA、LPF含量有关。
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高效液相色谱法测定复方葛根片中丹参酮ⅡA含量
目的 建立复方葛根片中丹参酮ⅡA的含量测定方法.方法 采用Alltima C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(85:15),检测波长为270 nm,流速为1 mL/min,柱温为30℃.结果 丹参酮ⅡA进样量在0.24～1.2μg(r=0.999 6)范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为98.7%,RSD=1.2%(n=6).结论 高效液相色谱法简便、可控、灵敏.
