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重组E.coli LLO/OVA刺激小鼠骨髓树突状细胞细胞因子表达的研究
目的 研究重组大肠杆菌疫苗E.coli LLO/OVA刺激小鼠骨髓树突状细胞的细胞因子表达,探讨该疫苗对BM-Dc的免疫刺激作用.方法 以E.coli OVA为对照,采用基因芯片、RT-PCR和ELISA在基因和蛋白质水平检测E.coli LLO/OVA刺激C57BL/6小鼠骨髓树突状细胞细胞因子表达情况.结果 经E.coli LLO/OVA刺激后4～24 h,BMDC出现一系列细胞因子基因表达上调,尤其在刺激后4～8 h BMDC的细胞因子基因上调表达明显,其中G-CSF和IFN-γ的表达明显高于E.coli OVA刺激后的BMDC;RT-PCR检测也证实E.coli LLO/OVA刺激8 h后BMDC的IFN-γmRNA转录水平明显高于E.coli OVA刺激的BMDC;FLISA结果显示E.coli LLO/OVA刺激BMDC后12～24 h,培养上清液内IFN-γ的含量明显高于E.coli OVA刺激后的BMDC,而IL-10的含量则明显降低.结论 E.coli LLO/OVA刺激小鼠BMDC上调表达一系列细胞因子,并且较E.coli OVA刺激的BMDC更明显上调G-CSF和IFN-γ基因表达.ILO作为重组疫苗E.coli OVA的免疫佐剂在刺激BMDC表达促进机体免疫的细胞因子中发挥重要作用.
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树突状细胞靶向性DNA疫苗的构建及其在CHO细胞的表达
目的构建含OVA-Fc融合基因的真核表达质粒,证明其能在真核细胞CHO细胞表达.方法通过PCR从OVA-pcDNA3.1质粒中扩增出全长的小鼠OVA cDNA,酶切后克隆到含有小鼠IgG2a Fc cDNA的真核载体pMIgV,然后将OVA-Fc酶切后亚克隆入pcDNA3.1,构建真核表达载体OVA-Fc-pcDNA3.1;脂质体转染法将其导入CHO细胞,流式细胞仪、Western blot、ELISA法检测融合蛋白OVA-Fc的表达.结果酶切鉴定和序列测定证明真核表达载体OVA-Fc-pcDNA3.1构建正确;流式细胞术、Western blot、ELISA法均检测到转染的CHO细胞能表达OVA-Fc融合蛋白.结论 OVA-Fc-pcDNA3.1真核表达质粒构建正确并能在真核细胞中表达,该质粒的成功构建与表达为进一步将其作为DNA疫苗治疗肿瘤、哮喘等疾病奠定了基础.
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OVA-Fc融合基因疫苗对哮喘小鼠的疗效观察
目的 探讨OVA-Fc融合基因疫苗治疗哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的效果.方法 分别将制备的OVA-Fc-pcDNA3.1质粒、OVA-pcDNA3.1质粒、pcDNA3.1质粒,皮下免疫Balb/c哮喘小鼠模型,40 d后,观察肺组织的病理变化,并检测肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸粒细胞计数,细胞因子的含量以及血清中OVA特异的IgE抗体的水平.结果 OVA-Fc-pcDNA3.1基因修饰的DNA疫苗免疫小鼠后,能有效抑制哮喘小鼠肺组织的炎细胞浸润,肺泡灌洗液中细胞总数明显下降(P＜0.05),嗜酸性粒细胞的总数明显下降(P＜0.05),肺泡灌洗液中IL-10、INF-Y的分泌增加(P＜0.05),血清中OVA特异的IgE抗体能有效的得以控制(P＜0.05).结论 OVA-Fc-pcDNA3.1基因修饰的DNA疫苗可较OVA变应原基因更强的特异性地抑制哮喘小鼠的气道炎症,有望对哮喘的治疗具有重要的价值.
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应用Balb/c小鼠建立特应性皮炎的方法与评价
目的 探索应用变应原致敏Balb/c小鼠建立特应性皮炎(AD)的方法.方法 不同剂量卵清蛋白(OVA)或2,4-二硝基氟苯(DNFB)经皮致敏Balb/c小鼠,经一定流程后观察皮肤症状并进行评分,H&E染色检测皮肤组织病理学变化,ELISA检测血清总IgE含量,RT-PCR检测核因子T-bet和Gata3的mRNA表达.结果 OVA组(1、10、20、1 00 mg/ml)未见明显的皮肤炎症表现DNFB组2种方案(0.5％+1％与0.5％)中,模型小鼠皮炎评分、抓搔次数、IgE禽量均显著升高(p＜0.05),GATA3基因表达水平高于T-bet,呈Th2型免疫偏移状态,皮肤病理学检测观察到模型小鼠表皮增厚、棘层细胞增生、炎症细胞大量浸润等变化.结论 本研究中,经皮给予DNFB能够成功诱导小鼠发生AD样改变,是进一步开展AD相关研究的基础.
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卵白蛋白诱导哮喘小鼠脾细胞增殖中STAT5的变化
目的:研究卵白蛋白(OVA)在哮喘小鼠脾细胞增殖中信号转导蛋白和转录激活因子5(STAT5)的变化,探讨STAT5在OVA诱导哮喘小鼠脾细胞增殖中的作用.方法:经腹腔注射与雾化吸入OVA诱发小鼠哮喘发作.激发后分离小鼠脾细胞,采用MTr比色法测定经OVA诱导的脾细胞增殖;用双染免疫组化法检查脾细胞中STAT5磷酸化与STAT5抗原的定位.用电泳迁移率变动分析(EMSA)测定STAT5与DNA探针的结合力.结果:OVA在体外能明显诱导哮喘小鼠脾细胞增殖(平均A值为0.543±0.112),呈剂量依赖性,与对照组相(平均A值为0.203±0.032)比较差异明显(P《0.01).OVA诱导1、3 h,能诱导哮喘小鼠脾细胞中的STAT5磷酸化,脾细胞中出现STAT5-DNA结合带.结论:OVA能诱导哮喘小鼠脾细胞增殖和脾细胞中的STAT5磷酸化,增加STAT5与DNA探针的结合力,说明STAT5信号途径在OVA诱导的哮喘小鼠脾细胞增殖中起重要作用.
关键词： 哮喘 淋巴细胞增殖 信号转导蛋白和转录激活因子5 卵白蛋白 -
乙肝病毒样颗粒在初始树突细胞进入I类和II类MHC抗原提呈通路
病毒样颗粒( VLP s )代表了有效地引发机体免疫的病毒蛋白的高密度展示方式,由乙肝病毒外膜蛋白组成的病毒样颗粒可以诱导机体的细胞免疫和体液免疫应答。然而,研究表明乙肝病毒外膜蛋白VLP s可以破坏树突细胞的功能。作者研究了乙肝病毒外膜蛋白VLP s和树突细胞亚类的相互作用及抗原在树突细胞中通过主要组织相容性I类和II类抗原呈递途径的提呈状况。在体外试验针对 CpG的应答中,乙肝病毒外膜蛋白VLP s降低了浆细胞样树突细胞的α-干扰素的产生,但是在体内给予CpG情况下,不会损坏普通树突细胞或浆细胞样树突细胞的表型。为了评估细胞免疫应答,制造了含有卵白蛋白( OVA )模式表位的乙肝病毒外膜VLPs,OVA 抗原表位(257~264)和 OVA (323~339)分别是通过MHC I类和II类抗原呈递途径提呈的。乙肝病毒外膜蛋白VLP-OVA (157~264)在体内能被CD8+树突细胞交叉提呈,但不会被CD8-树突细胞提呈。因此,乙肝病毒外膜蛋白VLP s可在原发树突细胞和启动的细胞毒细胞以及协助性T细胞中通过MHC I和MHC II类抗原呈递途径进行提呈。
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利用工程树突细胞定向的纳米颗粒增强免疫应答的简单策略
在这项研究中，作者证实了一种简单的能够增强免疫应答的策略，这种策略是使用两组分树突细胞定向抗原投递系统。一种组分是由用于树突细胞导向的双功能性融合蛋白所构成，另一组分是由生物素化的PLGA纳米颗粒（ NPs）制备而成，用来包裹抗原。由截短的与抗-DEC-205单链抗体（ scFv ）相融合的核心链霉抗生物素蛋白构成的融合蛋白与荷载卵白蛋白的生物素化的NP s相混合（这种生物素化的NPs是使用生物素-PEG （2000）-PLGA配制而成）。融合蛋白功能化NP s被用于树突细胞定向性抗原投递。在体外树突细胞摄取研究中结果表明，当与非定向的NP s进行比较时，显示出高2倍的受体介导性融合蛋白功能化 NPs 的摄取结果。用融合蛋白功能化NPs 免疫并受树突细胞成熟刺激（抗CD40单抗）的小鼠增强了卵白蛋白特异性IgG和IgG亚类应答。这些小鼠的脾细胞当在体内用卵白蛋白再行刺激时则产生了更高水平的Th1型（γ干扰素和IL-2）细胞因子应答。融合蛋白功能化树突细胞定向系统的这种令人振奋的结果支持了可以将其作为一种通用的疫苗投递系统加以应用，以期用来设计单价或多价疫苗。
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环孢素A气雾给药对豚鼠气道高反应性和炎症的作用
目的:评价环孢素A气雾给药对豚鼠哮喘模型的药效.方法:用乙酰胆碱(ACh)或组胺诱导抗原攻击后的致敏豚鼠气道阻力PC200、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织切片中的嗜酸性粒细胞(EOS)变化观察环孢素A气雾给药后的抗气道高反应性和炎症作用.结果:环孢素A 10 g@L-1、20g@L-1气雾给药和地塞米松(0.5 mg@kg-1,ip)增加PC200值,能预防ACh或组胺引起的气道高反应性,环孢素A 5 g@L-1对组胺引起的气道高反应性也有作用,对ACh不显著.环孢素A 10 g@L-1、20g@L-1气雾给药能明显减少BALF中的EOS浸润.与溶媒组比较,地塞米松0.5 mg@kg-1增加了BALF中的中性粒细胞数目,与三组环孢素A比较有显著差异.在肺组织学研究中,环孢素A20g@L-1和地塞米松0.5 mg@kg-1可抑制支气管和细支气管上皮和上皮表面结缔组织的EOS浸润.结论:环孢素A气雾吸入给药能明显对抗致敏豚鼠气道高反应性和炎症反应,为其治疗哮喘提供了一个可选择的给药途径.
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致敏离体豚鼠气管横向或螺旋条对腺苷的收缩
AIM: To determine the role of the epithelium in the responses to adenosine of isolated trachea from ovalbuminsensitized guinea pigs. METHODS: Spirally cut tracheal preparations were superfused or immersed in organ baths and transversely cut strips were immersed. Epithelium was removed mechanically from some strips and confirmed by histological examination of a random sample. Tissues were from unsensitized or ovalbuminsensitized guinea pigs. Isometric tension was measured and responses to adenosine recorded. RESULTS: In sensitized tissues, contractile responses to adenosine were evident as contractions of superfused spirals or as rightwards shift of the concentration-response curve compared with non-sensitized immersed spirals. Epithelium removal potentiated relaxation responses in both nonsensitized and sensitized strips indicating release of contractile mediators in both tissues. Dipyridamole potentiated relaxation responses in sensitized tissues with and without epithelium. CONCLUSION: Sensitization reveals a contractile response to adenosine. The epithelium is not involved in this contractile response nor is it the major site of uptake of adenosine in both sensitized and non-sensitized tissues.
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卵白蛋白诱发变应性鼻炎豚鼠模型的特点及鉴定
目的:建立卵白蛋白(ovalbumin,OVA)诱发的变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)豚鼠模型,观察其临床症状、病理学和免疫炎症反应有关指标的变化特点.方法:实验豚鼠分为正常组和模型组.模型组动物经腹腔注射0.8 ml的OvA混悬液进行全身致敏,并经双侧鼻腔按每侧20μl的OVA生理盐水溶液(60 mg/ml)滴鼻进行局部致敏,致敏期限为21 d；间隔1周后,以OVA生理盐水溶液(60 mg/m1)滴鼻激发,每天1次,连续7d,而后改为两天1次,连续14d,剂量均为50μl/kg.正常组动物以生理盐水代替OVA悬液或OVA生理盐水溶液,用法用量与模型组相同.激发阶段,动态观察各组豚鼠喷嚏、抓鼻、眼泪、鼻涕及呼吸困难症状变化；激发期结束,动物取血制备血清用于IgE含量检测,剥取鼻黏膜用于组织病理学观察及组胺含量测定.结果:与正常组比较,模型组豚鼠出现典型的变应性鼻炎症状,喷嚏数增加并伴有严重抓鼻现象,血清IgE及鼻黏膜组胺含量均明显升高(P＜0.01)；鼻黏膜组织出现嗜酸粒细胞浸润、血管扩张及上皮脱落等典型的炎性病理变化.结论:OVA诱发的变应性鼻炎豚鼠模型,可较好模拟人类变应性鼻炎的临床特征,该模型是研究变应性鼻炎机制及治疗药物的良好模型.
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宝宝吃蛋蛋的9条“金科玉律”
蛋蛋营养大揭秘蛋白质鸡蛋中含有丰富的优质蛋白.据研究,在鸡蛋中,卵白蛋白和卵球蛋白的含量几乎占到了15％左右.鸡蛋中这些蛋白质的结构,与人体中蛋白质的结构极为相似.因此,相比于其他肉类、奶类食品,鸡蛋在人体内的吸收率高达98％,在营养学上常被称为“完全蛋白”.微营养素除了凸显优势的“完全蛋白”外,鸡蛋中的微营养素也不容小觑.
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卵白蛋白口服液对小鼠免疫功能的影响
目的:观察卵白蛋白口服液对小鼠免疫功能的影响.方法:BALB/c小鼠连续灌胃30天后检测碳廓清能力、迟发型变态反应、抗体生成细孢数、血清溶血素水平、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、NK细胞活性及ConA诱导的脾淋巴细胞转化能力等免疫指标.结果:卵白蛋白口服液对小鼠的脏/体比值、碳廓清能力及NK细胞活性无明显影响；对迟发型变态反应、抗体生成细胞敏、HC50、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力及ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化有显著作用.结论:卵白蛋白口服液能增强小鼠免疫功能.
