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人神经胶质瘤耐阿霉素细胞株的建立及其耐药机制的初步研究
神经胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤,其化疗耐药现象的发生严重影响神经胶质瘤的治疗及患者预后生存和牛活质量.因此,探讨神经胶质瘤耐药产生原因及其机制对神经胶质瘤的治疗具有重要意义[1].本实验选用常用的化疗药物阿霉素(ADM)和人恶性胶质母细胞瘤细胞株SHG44为研究对象,用ADM浓度梯度递增结合间歇诱导法建立多药耐药的神经胶质瘤细胞株SHG,44/ADM,并对SHC:44/ADM的耐药特性及机制进行初步研究.
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HCMV IE1和pp65在人神经胶质瘤U251细胞中的时序表达
目的:研究人神经胶质瘤U251细胞对人巨细病毒(human cytomegalovirus, HCMV)的容许性,并探讨病毒蛋白IE1及pp65的时序表达特点.方法:HCMV感染U251细胞,以透射电镜观察U251细胞的形态学改变,以PCR方法检测HCMV核酸,于不同的时间点分别用抗蛋白IE1及蛋白pp65单克隆抗体进行免疫细胞化学染色,检测IE1及pp65的表达水平.结果:受染的U251细胞出现了明显的形态学改变,并用PCR方法检测到了HCMV核酸.免疫细胞化学染色表明,蛋白IE1在感染后30min～2h无表达,4h开始表达,14h达高峰,随后下降;蛋白pp65在感染后1 h为入侵型pp65,4～96h一直呈低水平表达,至120h表达急剧升高.结论:U251细胞是HCMV的容许细胞,HCMV在其中的表达具有时序性,但是其时序表达较在人成纤维细胞中延迟.
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内源性硫化氢水平与脑低分化神经胶质瘤患者生存率的相关性分析
目的 分析硫化氢H2S合成酶基因表达水平与人神经胶质瘤分化与生存率的相关性.方法 从肿瘤基因组图谱(TCGA)的脑低分化神经胶质瘤(BLGG)模块收集神经胶质瘤患者共530例,其中男患者291例,女患者238例,1例性别不详.患者年龄范围14 ～ 87岁,确诊为脑低分化神经胶质瘤Ⅱ级248例,Ⅲ级265例.结果 在神经胶质瘤Ⅱ级患者,脑H2S合成酶胱硫醚β合成酶(CBS)的基因表达水平明显高于Ⅲ级患者(P＜0.05).CBS基因表达水平高于或等于11.63的神经胶质瘤患者的生存率显著高于CBS基因表达水平低于11.63的患者.CBS基因表达水平与神经胶质瘤患者的年龄呈负相关.在神经胶质瘤患者中,另一个H2S合成酶3硫基丙酸硫基转移酶(MPST)的基因表达水平与CBS的基因表达水平呈正相关.MPST基因表达水平大于10.27的神经胶质瘤患者的生存率明显高于低表达(＜9.51)组的患者(P＜0.05).结论 H2S合成酶的基因表达水平与人神经胶质瘤的分化及生存率密切相关.
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p62参与柳氮磺吡啶抑制NF－κB信号途径和诱导人神经胶质瘤U251细胞凋亡机制的研究
目的：以人神经胶质瘤U251细胞为研究对象，从p62参与核转录因子κB（ NF－κB）信号途径活化角度，探讨柳氮磺吡啶（ SAS）抑制NF－κB信号途径和诱导U251细胞发生凋亡的机制。方法：构建p62 siRNA表达载体，MTT法检测细胞生存率，萤光素酶报告基因分析检测NF－κB转录活性，Western blotting法和间接免疫荧光法检测细胞自噬、凋亡。结果：SAS抑制U251细胞NF－κB转录活性，诱导细胞凋亡和自噬；抑制p62的表达可以增加SAS引起的NF－κB信号途径的抑制和凋亡；SAS通过自噬引起p62蛋白表达下降，抑制自噬可以拮抗SAS引起的NF－κB信号途径的抑制和凋亡。结论：p62蛋白水平在SAS诱导的NF－κB信号通路的抑制和凋亡中起重要作用，靶向抑制p62可能成为提高SAS抗肿瘤效果的新策略。
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茜草对人神经胶质瘤U87细胞的生长及丙酮酸代谢的影响
目的 考察茜草对人神经胶质瘤U87细胞生长的影响,并从抗肿瘤作用分子机制及丙酮酸代谢角度探讨作用机理.方法 体外培养U87细胞,以MTT法考察茜草不同提取物对U87细胞的生长抑制作用;人全基因组表达谱芯片初步筛选茜草醇提物抑制U87细胞的可能机制;逆转录PCR验证部分差异表达基因;碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期分布;分光光度法检测细胞内H2O2含量、丙酮酸含量、乳酸含量、Caspase-3活力、丙酮酸激酶(PK)活力、乳酸脱氢酶(LDH)活力、苹果酸脱氢酶(MDH)活力、琥珀酸脱氢酶(SDH)活力;Western Blot检测超氧化物歧化酶1(SOD1)、过氧化氢酶(Catalase)、p-Histone H2A.X(Ser139)、p-乳腺癌易感蛋白1(BRCA1)(Ser1524)、人mutS同源蛋白6(MSH6)、增殖细胞核抗原(PCNA)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)的蛋白表达.结果 以不同剂量的茜草醇提物、水提物(终浓度分别为200,100,50,25,12.5 mg·L-1)作用于U87细胞24,48,72 h后,U87细胞生长受到明显抑制,抑制作用具有剂量依赖和时间依赖性,醇提物优于水提物.茜草醇提物50 mg· L-1作用于U87 24 h后,表达谱芯片结果揭示其作用机制与细胞周期、凋亡、氧化-还原平衡、DNA损伤及修复、单羧酸转运等有关.茜草醇提物100,50 mg· L-1处理U87 24 h进行后续实验,逆转录PCR验证MSH6、Catalase、BAX、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、PCNA mRNA表达与芯片结果一致,而DNA复制解旋酶/核酸酶2(DNA2)mRNA表达仅100 mg· L-1组与芯片结果相符.茜草醇提物可使U87细胞阻滞在S期、提高Caspase-3活力;还增加了细胞内H2O2含量,而Catalase和SOD1蛋白表达减少;细胞内DNA双链断裂的标志p-Histone H2A.X (Ser139)蛋白表达增加,DNA修复相关的p-BRCA1(Ser1524)、MSH6、PCNA蛋白表达减少.茜草醇提物处理后,U87细胞内丙酮酸含量减少、乳酸含量增加;PK、LDH、MDH、SDH活力增加、MCT1蛋白表达减少.结论 茜草能有效抑制人神经胶质瘤U87细胞在体外的生长活力,作用呈现一定剂量依赖和时间依赖,且醇提优于水提.其作用机制涉及多方面,与细胞周期阻滞、Caspase-3活化、影响氧化-还原平衡、DNA损伤及修复、细胞内丙酮酸代谢有关.茜草是一味具有开发潜力的抗肿瘤中药.
