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非小细胞肺癌中转录因子Snail及其相关蛋白表达的临床研究
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中转录因子Snail和上皮钙黏素(E-cad)、神经钙黏素(N-cad)的表达及三者之间的关系.方法 选取新疆医科大学附属肿瘤医院2014年1月至2015年12月有完整临床病理资料的59例NSCLC患者及31例肺良性病变患者术后组织标本,采用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁正常组织、肺良性病变组织中Snail与N-cad、E-cad的表达,分析其与临床病理特征间的关系,并进一步分析Snail与N-cad、E-cad在NSCLC组织中表达的相互关系.结果 NSCLC组织中Snail、N-cad的阳性率均高于癌旁正常组织及肺良性病变组织[81.4％(48/59)比37.3％(22/59)比12.9％(4/31),χ2=9.782,P＜0.05;76.3％(45/59)比33.9％(20/59)比12.9％(4/31),χ2=7.445,P＜0.05],而E-cad阳性率低于癌旁正常组织及肺良性病变组织[20.3％(12/59)比55.9％(33/59)比93.5％(29/31),χ2=45.107,P＜0.01].NSCLC中,Snail阳性率在有无淋巴结转移间及TNM分期Ⅰ、Ⅱ、ⅢA期间差异有统计学意义 [97.5％(39/40)比47.4％(9/19),χ2=7.734,P＜0.05;12.5％(1/8)比81.0％(17/21)比100.0％(30/30),χ2=7.723,P＜0.05],E-cad阳性率差异也有统计学意义[95.0％(38/40)比36.8％(7/19),χ2=7.190,P＜0.05;100.0％(8/8)比19.0％(4/21)比0(0/30),χ2=12.311,P＜0.01],N-cad阳性率在有无淋巴结转移间,高、中、低分化间及TNM分期Ⅰ、Ⅱ、ⅢA期间差异有统计学意义[97.5％(39/40)比47.4％(9/19),χ2=11.231,P＜0.01;28.6％(2/7)比63.6％(14/22)比96.7％(29/30),χ2=9.564,P＜0.05;12.5％(1/8)比85.7％(18/21)比86.7％(26/30),χ2=11.664,P＜0.01].NSCLC组织中,Snail和E-cad表达、E-cad和N-cad表达均呈负相关(r=-0.667,P=0.00;r=-0.297,P=0.01),Snail和N-cad表达呈正相关(r=0.373,P＜0.01).结论 Snail、E-cad和N-cad与NSCLC的发生、进展和转移有关,联合检测可预测肿瘤浸润、转移和预后.
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神经钙黏素表达下调对舌鳞状细胞癌细胞生物学能力的影响
目的 研究神经钙黏素(N-cadherin)表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、细胞周期、凋亡以及迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 利用LipofectamineTM2000将神经钙黏素siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,将细胞分为3组:①未处理组;②对照siRNA组;③神经钙黏素siRNA组.分别收集转染后48 h的细胞,采用新型的细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)8试剂分析转染神经钙黏素siRNA后对细胞增殖能力的影响;运用流式细胞术检测下调神经钙黏素表达对Tca8113细胞周期及细胞凋亡的影响;采用Boyden 小室实验分析下调神经钙黏素对舌鳞状细胞癌细胞Tca8113细胞迁移能力的影响;进一步采用蛋白质印迹法检测神经钙黏素表达下调对细胞增殖、细胞周期以及细胞迁移相关基因表达的影响.结果 神经钙黏素siRNA能明显下调舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中神经钙黏素蛋白的表达,并显著抑制Tca8113细胞的增殖(P<0.05).细胞周期结果显示,神经钙黏素siRNA组中在G0/G1的细胞比率[(65.41±0.92)%]明显高于未处理组[(41.59±1.43)%]和对照siRNA组[(43.70±2.08)%],差异有统计学意义(F=216.839,P＝0.000).神经钙黏素siRNA组中细胞凋亡的比率[(25.66±1.36)%]明显高于未处理组[(2.38±0.14)%]和对照siRNA组[(2.81±0.12)%],差异有统计学意义(F=850.364,P=0.000).Boyden 小室体外侵袭实验结果表明,与未处理组和对照siRNA组相比,神经钙黏素siRNA组中Tca8113细胞的迁移能力显著下降,差异有统计学意义(F=140.858,P=0.000).蛋白质印迹法结果表明,与未处理组和对照siRNA组相比,神经钙黏素siRNA组中的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)2和MMP-9明显下调,而p21明显上调,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 神经钙黏素在舌鳞状细胞癌的发生发展中可能具有重要的作用.
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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对结肠癌肝转移的促进作用及其可能机制
目的:探讨粒细胞-巨噬细胞集落因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)对结肠癌肝转移的促进作用及其可能机制.方法:采用稳定转染方法将GM-CSF基因以及靶向GM-CSF的shRNA分别导入人结肠癌细胞系HCT116和SW480,用ELISA法检测GM-CSF表达水平.脾内注射结肠癌细胞建立结肠癌肝转移模型,部分模型小鼠隔天腹腔注射不同剂量(3、0.6μg)的重组人GM-CSF.模型建立后4周后观察肝大体及肿瘤转移灶,实时荧光定量PCR检测神经钙黏素(Ncadherin)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)的表达,Western blotting检测上皮钙黏素(E-cadherin)的表达.结果:根据GM-CSF表达量建立GM-CSF低、中、高表达细胞系(GMlo、GMint、GMhi HCT 116)和GMKDSW480细胞系.大体和病理结果均显示,接种高表达GM-CSF的HCT116细胞或外源性给予GM-CSF明显增加小鼠结肠癌肝转移灶数量,而敲低GM-CSF的作用则相反.GM-CSF能够显著上调N-cadherin和MMP2的表达,同时下调E-cadherin的表达(P＜0.05).结论:GM-CSF能够促进结肠癌移植瘤的肝转移,该效应可能与E-cadherin表达的下调和N-cadherin以及MMP2表达的上调有关.
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非小细胞肺癌组织中Snail、E-cadherin及N-cadherin的表达及临床意义
目的 探讨指转录因子Snail、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)及神经钙黏素(N-cadherin)在非小细胞肺癌组织中的表达及其之间的相关性.方法 采用免疫组化法检测63例非小细胞肺癌(NSCLC)手术切除标本及30例癌旁组织中Snail 、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达,并分析相互间关系及其临床意义.结果 与癌旁组织比较,NSCLC组织中E-cad-herin表达显著减少,N-cadhern和Snail表达明显增加(P＜0.01).NSCLC组织中,Snail的表达与N-cadhenn呈明显的正相关(P＜0.05,r=0.33),与E-cadherin呈显著负相关(P＜0.05,r=-0.41),N-cadherinl的表达与E-cadheri也呈明显负相关(P＜0.05,r=-0.56).Snail表达阳性率与TNM分期和有无转移相关(P＜0.05);E-cadherin表达阳性率与TNM分期和有无转移相关(P＜0.05);N-cadherin表达阳性率与组织学分型、TNM分期和有无转移相关(P＜0.05).结论 NSCLC癌组织中Snail、E-cadherin和N-cadherin表达水平与肿瘤的浸润转移密切相关,可作为临床诊断和治疗靶点的参考指标.
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16种脑胶质瘤动物模型的N-cadherin肽链差异性研究
目的 探讨不同动物模型与人的神经钙黏素(N-cadherin)肽链之间的差异,从而评估这些动物作为胶质瘤动物模型的可行性.方法采用Clustalx 1.83和MEGA 4.0软件对16种动物的N-cadherin肽链进行大似然分析.结果 得到不同种间N-cadherin成熟肽链的氨基酸变化位点和1棵大似然合意树.结论 作为细胞表面重要的黏附分子,N-cadherin在肿瘤转移与入侵过程中起着关键性作用,因此构建胶质瘤动物模型时,有必要使所采用的动物模型的N-cadherin肽链尽可能与人类的一致.
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非小细胞肺癌组织Twist、N-cadherin表达及临床意义
目的 探讨转录因子Twist及神经钙黏素(N-cadherin)在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展中的作用.方法 收集75例NSCLC患者(NSCLC组)的癌组织及其对应的癌旁正常组织标本,另选12例良性病变患者(对照组)肺组织标本.采用实时荧光定量PCR法和免疫组化 SP 法检测Twist、N-cadherin mRNA 及蛋白表达,分析NSCLC组织Twist、N-cadherin阳性表达与患者临床病理特征的关系.结果 NSCLC 组癌组织Twist、N-cadherin mRNA相对表达量及蛋白阳性表达率均高于癌旁组织和对照组(P均<0.01).NSCLC组有淋巴结转移及临床分期Ⅲ、Ⅳ期者Twist、N-cadherin阳性表达率高于无淋巴结转移及Ⅰ、Ⅱ期者(P均<0.01),Twist、N-cadherin阳性表达与患者性别、年龄及分化程度无明显相关性(P均>0.05).NSCLC组织中Twist阳性表达与N-cadherin阳性表达呈正相关(r=0.583,P<0.01).结论 Twist及N-cadherin可促迸 NSCLC的发生及发展;在此过程中二者有协同作用.
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上皮-间质转化调控蛋白在前列腺癌侵袭、转移中的作用及其临床预后诊断价值
目的 探讨上皮-间质转化(EMT)调控蛋白在前列腺癌(PCa)侵袭、转移中的作用及其对临床预后的诊断价值.方法 收集48例PCa组织样本(PCa组)和50例良性前列腺增生(BPH)组织样本(BPH组),免疫组化SP法检测样本神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏素(E-cadherin)表达,分析N-cadherin、E-cadherin表达与PCa患者临床资料的关系.对PCa患者进行随访,记录患者总生存期(OS);以OS作为评价指标,采用单变量和多变量Cox比例风险模型评价患者预后的影响因素.以转化生长因子β1(TGF-β1)诱导DU-145细胞发生EMT,细胞增殖实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞E-cadherin、N-cadherin蛋白表达.结果 PCa组N-cadherin表达水平显著高于BPH组,E-cadherin表达水平显著低于BPH组(均P<0.05).肿瘤直径≥2.5 cm者N-cadherin高表达率显著高于肿瘤直径<2.5 cm者,Ⅳ期PCa患者N-cadherin高表达率显著高于Ⅱ期和Ⅲ期PCa患者,淋巴结转移者N-cadherin高表达率显著高于无淋巴结转移者,远处转移者N-cadherin高表达率显著高于无远处转移者(均P<0.05).Gleason分级≥7分者E-cadherin高表达率显著低于Gleason分级≤6分者,有淋巴结转移者E-cadherin高表达率显著低于无淋巴结转移者,有远处转移者E-cadherin高表达率显著低于无远处转移者(均P<0.05).N-cadherin高表达患者OS显著低于N-cadherin低表达患者(P=0.024),E-cadherin高表达患者OS显著高于E-cadherin低表达患者(P=0.017).单因素和多因素分析显示,T4期肿瘤、N-cadherin高表达、E-cadherin低表达是影响患者OS的独立危险因素(均P<0.05).细胞增殖实验显示,第24~96 h,DU-145组吸光度值显著高于NC组(均P<0.05);Transwell实验显示,DU-145组穿膜细胞数量显著多于NC组(P<0.05);Western blot实验显示,DU-145组N-cadherin蛋白表达水平显著高于NC组,E-cadherin蛋白表达水平显著低于NC组(均P<0.05).结论 EMT与PCa的增殖、侵袭和迁移有关,N-cadherin、E-cadherin有可能作为PCa临床预后的诊断指标之一.
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神经钙黏素、可溶性细胞间黏附分子-1与血管内皮生长因子在多发性骨髓瘤患者中的表达及临床意义
目的 探讨神经钙黏素(N-Cadherin)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1),以及血管内皮生长因子(VEGF)在多发性骨髓瘤患者中的表达及临床意义.方法 选取70例多发性骨髓瘤患者(观察组)和同期70名健康志愿者(对照组)作为研究对象,采用流式细胞术检测2组血清N-Cadherin阳性细胞在CD138+/CD38+细胞中的比例以表示N-Cadherin的表达水平,采用ELISA测定2组血清sICAM-1和VEGF的表达水平,比较N-Cadherin、sICAM-1及VEGF在不同临床分期患者中的差异.结果 观察组血清N-Cadherin、sICAM-1和VEGF表达水平均高于对照组(P均<0.05);不同临床分期患者血清N-Cadherin表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);不同临床分期患者血清sICAM-1及VEGF表达水平比较差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论 N-Cadherin在多发性骨髓瘤患者中呈高表达,但与疾病分期无关,而sICAM-1及VEGF水平的检测对于判断多发性骨髓瘤的发生及病程进展可能有重要参考意义.
关键词： 神经钙黏素 可溶性细胞间黏附分子-1 血管内皮生长因子 多发性骨髓瘤 临床意义 -
埃兹蛋白(ezrin)基因沉默抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭
目的 观察埃兹蛋白(ezrin)在前列腺癌组织中的表达,探讨ezrin基因沉默对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭的影响及相关机制.方法 收集前列腺癌和良性前列腺增生患者的标本各20例,采用荧光实时定量PCR检测ezrin mRNA水平、Western blot法检测ezrin蛋白水平.培养PC-3细胞,分别用培养液、Scramble siRNA、ezrin siRNA处理48 h;MTT法检测细胞增殖情况,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,荧光实时定量PCR、Western blot法检测上皮钙黏素、神经钙黏素的mRNA和蛋白水平.结果 与良性前列腺增生患者的组织相比,前列腺癌组织中ezrin mRNA、蛋白表达水平均明显增加.与Scramble siRNA处理的PC-3细胞相比,ezrin表达下调后,PC-3细胞增殖受到明显抑制,平均穿膜细胞数、神经钙黏素水平降低,上皮钙黏素水平增加.Scramble siRNA处理的PC-3细胞与单纯培养液处理的PC-3细胞上述指标无明显差异.结论 Ezrin在前列腺癌组织中高表达,ezrin基因沉默能抑制PC-3细胞的增殖和侵袭,同时上调上皮钙黏素表达及下调神经钙黏素表达.
