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卵巢肿瘤组织和血清中RASSF1A基因甲基化检测及临床意义的研究
目的:检测卵巢肿瘤组织和血清中RASSF1A基因启动子区异常甲基化,探讨卵巢肿瘤组织和血清中RASSF1A基因甲基化与卵巢癌的关系.方法:收集新鲜的卵巢肿瘤组织及其对应的血清标本65例,10名健康志愿者血清标本.采用半巢式甲基化特异性PCR技术分别检测肿瘤组织DNA和血清游离DNA中RASSF1A基因启动子异常甲基化情况.结果:卵巢癌患者血清和癌组织中,RASSF1A基因甲基化的检出率分别为20.0%和31.4%.卵巢良性肿瘤组织和血清以及健康志愿者血清中,均未发生RASSF1A基因异常甲基化.肿瘤组织中,RASSF1A基因的甲基化状况与血清中出现RASSF1A基因甲基化关系密切,P<0.01;卵巢癌患者血清和癌组织中,RASSF1A基因的甲基化异常改变与肿瘤的临床分期、细胞分化程度以及组织学类型无明显相关性,P>0.05;与淋巴结转移密切相关,P<0.05.结论:分析血清DNA 的RASSF1A基因异常甲基化有可能成为辅助卵巢癌诊断的有效方法之一.
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恶性畸胎瘤PA-1细胞的染色体特点及p53基因性状
目的:探讨人类恶性畸胎瘤PA-1细胞株染色体特性及p53基因的状态及其意义.方法:采用G带核型分析、DNA碱基序列分析等方法对经20余年407～445继代培养的PA-1细胞株染色体核型及p53基因状态进行了研究.结果:PA-1细胞株80%以上仍然保持近乎2倍体的核型,30代以后的细胞由于第15号染色体与20号染色体间的相互易位形成了M1及M2标识染色体.RT-PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变2个带(p53密码子239突变).结论:人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞株经20年的继代培养后,1个p53等位基因发生错义突变,另1个仍然是野生型的.仅1个p53等位基因发生突变,不足以引起细胞的染色体不稳定性.因此,研究PA-1细胞稳定核型的维持结构,在确定有关染色体的稳定性与不稳定性的基因的方面是非常重要的.
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以包涵体形式表达的6B11卵巢癌抗独特型单链抗体的复性、纯化和活性研究
目的:探讨以细菌胞浆内包涵体形式表达的6B11卵巢癌抗独特型单链抗体(6B11scFv)的复性、纯化及其活性.方法:重组质粒pL-6B11scFv转化大肠杆菌pop2136,温度诱导,以包涵体形式获高效表达.超声破碎细菌细胞得包涵体,用8mol*L-1尿素溶解包涵体后直接稀释复性,探讨复性条件并采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析纯化复性蛋白,SDS-PAGE分析蛋白纯度,Western blot、ELISA及竞争抑制ELISA测活性.结果:复性蛋白质经纯化,纯度达95%以上.当氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度为5mmol*L-1,还原型谷胱甘肽(GSH)浓度为0.5mmol*L-1,10℃复性48h以上时,复性率较高.纯化后的表达蛋白6B11scFv能与HRP-COC166-9卵巢癌单抗反应并与卵巢癌抗原共同竞争结合卵巢癌单抗COC166-9,抑制率达67%,Western blot显示其相对分子质量为2.8×104,证明纯化后的表达蛋白质,能模拟卵巢癌抗原与卵巢癌单抗特异结合.结论:以包涵体表达的6B11scFv,经溶解复性纯化后,纯度高,活性好.
关键词： 卵巢肿瘤/遗传学 抗体 抗独特型/代谢 包涵体/代谢 肿瘤蛋白质类/分离和提纯 -
主要组织相容性复合体在人卵巢上皮癌组织中的表达
目的:通过观察主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)在人卵巢上皮癌组织中的阳性细胞数和表达强度,了解卵巢上皮癌局部微环境的免疫状态,探讨MHC与卵巢上皮癌发生、发展的关系,为临床进行卵巢癌的生物治疗提供实验依据.方法:ABC免疫组织化学技术和图像分析.结果:在卵巢上皮癌中,HLA-I+细胞数量与正常卵巢组织相比较明显减少(P<0.05),并与临床分期和病理分级相关,而表达强度虽亦降低,但差异未见显著性;同时,HLA-DR+细胞数量增多,表达强度增强,且与正常卵巢组织相比较差异具有显著性(P<0.05).结论:人卵巢上皮癌局部微环境中MHC表达的变化在机体自身抗卵巢肿瘤免疫中起重要作用,这为临床开展卵巢癌的生物治疗提供了实验室依据.
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MACC1基因在卵巢癌细胞SKOV3中的表达及意义
[目的]探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)在卵巢癌细胞SKOV3中的表达及意义.[方法]Western blot法检测卵巢癌组织和癌旁正常组织中的MACC1表达,通过脂质体将siRNA-MACC1及阴性对照转染到卵巢癌SKOV3细胞后,MTT法检测细胞活力,transwell法检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测Bax,Bcl-2及上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达量.[结果]卵巢癌组织中的MACC1表达量显著高于癌旁正常组织;转染后siRNA-MACC1组细胞活力下降,细胞迁移和侵袭能力下降(P＜0.01),Bax、E-cadherin表达量上调(P＜0.01),Bcl-2及Vimentin表达量下调(P＜0.01).[结论]干扰MACC1表达能抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为,可能与逆转Bax/Bcl-2,EMT相关蛋白表达有关.
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MCP-1基因多态性与卵巢上皮癌易感性的关系研究
目的 通过对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因A-2518G单核苷酸多态性的检测,探讨中国湖南地区汉族人群中MCP-1基因多态性与卵巢上皮癌易感性的关系.方法 采用病例-对照研究方法,选择临床确诊的130例标本,其中包括卵巢上皮癌组织92例,为病例组;正常卵巢组织38例,为对照组.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测卵巢上皮组织中的MCP-1基因A-2518G单核苷酸多态性.结果 在病例组和对照组中MCP-1基因A-2518G单核苷酸多态性均存在AA、AG和GG三种基因型.与对照组相比,病例组中AA(17.40％ vs 15.79％)、AG(44.56％ vs 52.63％)和GG(38.04％ vs 31.58％)基因型频率分布差异均无统计学意义(P＞0.05).对多个相关因素进行Logistic回归分析显示,尚不能认为MCP-1基因A-2518G单核苷酸多态性与卵巢上皮癌的发病有相关性(P＞0.05).结论 在中国湖南地区汉族人群中,尚不能认为MCP-1基因A-2518G单核苷酸多态性与卵巢上皮癌的发病有关.
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人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁肿瘤相关基因表达及意义
目的 通过对人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁肿瘤相关基因表达的检测,探讨筛选癌旁正常卵巢组织的可行性.方法 人卵巢上皮癌OVCAR3细胞皮下种植获取瘤源并卵巢原位移植后,取癌组织、癌旁近端组织、癌旁中段组织、癌旁远端组织及正常裸鼠卵巢组织,采用免疫组化法检测以上组织的CK-7、CA125、P53、survivin、MMP-2、TIMP-2的表达量.结果 40例人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中获取35份活检正常的癌旁残余卵巢组织,获取率87.5％ (35/40).癌组织中CK-7、CA125、P53、survivin、MMP-2及TIMP-2的表达率分别为95.0％(38/40)、95.0％(38/40)、75.0％ (30/40)、85.0％ (34/40)、77.5％ (31/40)及77.5％ (31/40)；癌旁近端组织的表达率分别为71.4％ (25/35)、68.6％(24/35)、57.1％(20/35)、62.9％(22/35)、60.0％(21/35)及57.1％ (20/35)；癌旁中段组织的表达率分别为34.3％(12/35)、31.4％ (11/35)、31.4％ (11/35)、31.4％ (11/35)、34.3％ (12/35)及31.4％(11/35)；癌旁远端组织的表达率分别为25.7％ (9/35)、22.9％(8/35)、25.7％ (9/35)、25.7％ (9/35)、28.6％(10/35)及31.4％ (11/35)；23份癌旁正常卵巢组织CK-7、CA125、P53、survivin、MMP-2及TIMP-2的表达均为阴性.免疫组化检测结果为癌旁近端组织中CK-7、CA125、P53、survivin、MMP-2及TIMP-2的表达低于癌组织(P＜0.05),高于癌旁中段组织及癌旁远端组织(P＜0.01)；癌旁中段组织及癌旁远端组织表达差异无统计学意义(P＞0.05)；CK-7、CA125、survivin的强阳性表达率明显高于P53、MMP-2、TIMP-2(P＜0.01)；不同病变程度获取的癌旁正常卵巢组织中的表达量差异无统计学意义(P＞0.05).20例正常裸鼠卵巢组织CK-7、CA125、P53、survivin、MMP-2、TIMP-2的表达均为阴性.结论 CK-7、CA125、P53、survivin、MMP-2及TIMP-2等分子指标的表达向无癌方向呈递减趋势,其肿瘤相关基因表达阴性可作为筛选癌旁残余正常卵巢组织的标准,卵巢上皮癌旁可以获取相对安全的正常卵巢组织.
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卵巢上皮性癌nm23H1基因遗传不稳定性与临床病理特性的关系
背景与目的:基因的遗传不稳定性,包括微卫星不稳定(microsatellite instablility,MSI)和杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH),是导致抑癌基因功能失调,引起肿瘤发生的重要因素.本实验研究中国人17号染色体D17S396位点MSI和LOH对卵巢上皮性癌nm23H1蛋白表达的影响,阐明nm23H1基因遗传不稳定性与卵巢上皮性癌临床病理特性的关系,为揭示nm23H1基因作用机制和肿瘤转移机制提供实验依据.方法:采用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)和常规银染检测25例卵巢上皮性癌及相应的非癌组织D17S396位点的MSI和LOH,采用EnVision免疫组织化学和Leica-Qwin计算机图像分析检测nm23H1蛋白表达.结果:25例卵巢上皮性癌中,D17S396位点MSI、LOH检出率和nm23H1蛋白阳性率分别为16.00%、24.00%和56.00%.LOH发生率在淋巴转移组(66.67%)高于无淋巴转移组(10.53%,P＜0.01),在FIGOⅢ+Ⅳ期(50.00%)高于Ⅰ+Ⅱ期(11.76%,P＜0.05).nm23H1蛋白阳性率在淋巴转移组(16.67%)低于无淋巴转移组(68.42%,P＜0.05);FIGOⅢ+Ⅳ期(25.00%)低于Ⅰ+Ⅱ期(70.59%,P＜0.05).计算机图像定量分析显示,在各临床病理参数影响下,nm23H1蛋白的表达强度没有差异.此外,LOH阳性组中nm23H1蛋白阳性率为0.00%,显著低于LOH阴性组的73.68%(P＜0.01).结论:LOH的发生可作为卵巢组织恶变的判断指标.nm23H1基因的MSI和LOH,通过相互独立的途径调控卵巢上皮癌的发生和转移,后者可抑制卵巢上皮性癌局部nm23H1的表达,并与卵巢上皮癌高淋巴结转移、预后差有关.
