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食管鳞癌组织hPOT1和hTERT的表达及其相关因素的研究
目的:探讨人端粒保护蛋白(hPOT1)、端粒酶逆转录酶(hTERT)在食管病变中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组化ABC法检测60例食管鳞状细胞癌、30例食管上皮内瘤变和20例食管正常组织中hPOT1和hTERT的表达.分析其间的相关性,并探讨与食管癌,临床病理特征之间的关系.结果:食管鳞癌组织中,hPOT1和hTERT的阳性率分别为93.3%和83.3%,较上皮内瘤变组(23.3%,40%)及正常上皮组(40%,0)显著增加,P=0.00.hPOT1和hTERT的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期呈正相关,且hPOT1和hTERT在食管鳞状细胞癌的表达呈一定的正相关,P=0.003.结论:hPOT1和hTERT在食管癌组织中表达异常增高,提示hPOT1和hTERT与食管癌的发生、发展有密切的关系.
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载体介导的siRNA对SGC-7901胃癌细胞中hPOT1表达的抑制作用
目的构建人端粒保护蛋白(hPOT1)基因的短链干扰核糖核酸(siRNA)表达载体,观察其在胃癌细胞中抑制hPOT1基因表达的作用,为进一步研究hPOT1在胃癌细胞生长增殖中的作用打下基础.方法设计并化学合成64nt编码hPOT1 siRNA基因片段的寡核苷酸,退火成双链后将其连接到pSUPER质粒的H1 RNA启动子下游,构建psiRNA-hPOT1重组质粒.经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染方法,转入SGC-7901胃癌细胞,用半定量RT-PCR检测hPOT1表达水平的变化.结果测序结果表明重组质粒psiRNA-hPOT1 64个碱基成功插入到预定位置,并且序列完全一致.hPOT1 siRNA表达载体psiRNA-hPOT1转入胃癌细胞后,可明显抑制SGC-7901细胞hPOT1的表达.结论构建的hPOT1基因的siRNA表达载体psiRNA-hPOT1重组质粒能显著抑制hPOT1基因在SGC-7901胃癌细胞中的表达.
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辐射诱导放射抗拒鳞癌细胞株的蛋白质组学差异分析
放射抗拒是肿瘤放射治疗失败的重要原因之一,寻找放射增敏靶点和放射敏感性预测因子具有重要意义.本实验室成功建立辐射诱导放射抗拒株的人喉鳞癌细胞株( Hep-2R),以基因芯片初步分析出放射抗拒株基因表达谱的改变[1],并证实了在Hep-2R中高表达的人端粒保护蛋白之一的蛋白质hPOT1对放射敏感性的影响[2].基因芯片技术虽然能够反映基因表达的相关信息,但并不能够完全准确反映蛋白质合成的情况.本研究立足于蛋白质实际表达水平,运用双向电泳和质谱分析寻找与放射敏感性相关的蛋白质,为研究新的放射增敏靶点奠定基础.
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端粒保护蛋白过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响
目的 观察人端粒保护蛋白1(human protection of telomeres 1,hPOT1)基因过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响.方法 利用先前构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞介导hPOT1基因过表达;秋水仙碱阻滞细胞周期于分裂中期,DAPI荧光染色分析染色体端-端融合;Telomerase PCR-ELISA试剂盒检测端粒酶活性.结果 pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞5 d后,染色体端-端融合几率增加,对端粒酶活性无明显影响.结论 提示hPOT1蛋白可导致染色体端-端融合.
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人端粒保护蛋白1研究现状
人端粒保护蛋白1(human protection of telomeres 1,hPOT1)是端粒家族成员之一,存在于各种真核细胞中,因其与端粒末端的单链重复序列结合,故又称为端粒末端结合蛋白.hPOT1的主要功能是保护染色体末端,调控端粒长度,阻止末端融合和染色体不稳定以及染色体异常分离.染色体不稳定与肿瘤的发生密切相关,因此hPOT1基因结构和功能异常可能参与了肿瘤的发生、发展.已有研究显示hPOT1基因的转录活性和表达增强与胃癌的发生、发展有关.本文复习近期文献,对hPOT1的研究现状作一综述.
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人端粒保护蛋白反义核酸抑制SGC7901胃癌细胞增殖
目的研究人端粒保护蛋白(human protection of telomeres,hPOT1)对胃癌细胞生长增殖的作用.方法利用本课题组先前所构建的hPOT1正、反义核酸真核表达载体,转染SGC7901胃癌细胞,G418筛选阳性克隆,用Western印迹法、MTT法、流式细胞仪、透射电镜等技术观察基因转染后SGC7901细胞hPOT1蛋白的表达、细胞生长曲线、细胞周期、细胞凋亡及细胞形态学的变化.结果转染了hPOT1反义核酸真核表达载体(pcDNA-as-hPOT1)的SGC7901胃癌细胞hPOT1表达降低,生长减慢,阻滞于G2/M期,细胞凋亡增加.结论hPOT1反义核酸真核表达载体能显著抑制hPOT1蛋白的表达,hPOT1蛋白可能参与胃癌细胞的周期调控,并与细胞的生长增殖有关.
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hPOT1 RNA干扰对人胃癌BGC823细胞突变型p53表达的影响
目的 通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中人端粒保护蛋白(human protection of telomeres 1, hPOT1)的表达,观察hPOT1 RNA干扰对胃癌BGC823细胞突变型p53基因转录水平的影响.方法 从hPOT1编码区外显子8的区域选取一段19个碱基的序列gtactagaagcctatctca为RNA干扰靶向序列,构建hPOT1的RNA干扰真核表达载体,转入体外培养的低分化人胃癌细胞BGC823,提取细胞总RNA,半定量RT-PCR检测hPOT1和突变型p53基因mRNA表达水平的改变,验证hPOT1 RNA干扰载体的基因沉默效率,了解抑制hPOT1表达后突变型p53基因mRNA水平的改变.结果 经DNA测序鉴定,hPOT1 RNA干扰载体包含干扰序列的插入片段,插入位置正确.经半定量RT-PCR鉴定,RNA干扰组细胞的hPOT1 mRNA表达水平明显下调,基因沉默效率在70左右;突变型p53表达下调.结论 通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中hPOT1表达后,突变型p53表达下调,提示hPOT1与突变型p53之间有一定的相关性.
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人端粒保护蛋白在胃癌中的异常表达及其临床意义
目的探讨人端粒保护蛋白(human protection of telomeres,hPOT1)在胃癌中的异常表达及其临床意义.方法用SP免疫组化方法检测hPOT1在57例胃癌标本中的表达,同时以10例正常胃黏膜标本做对照.结果57例胃癌标本的表达全阳性,阳性率100%,显著高于正常胃黏膜hPOT1的表达(40%).浸润至或超过浆膜层的胃癌hPOT1表达强度显著高于未达浆膜层者,Ⅲ/Ⅳ期胃癌明显高于Ⅰ/Ⅱ期胃癌,低分化胃癌高于高分化胃癌(P＜0.05).结论hPOT1在胃癌组织中表达异常增高,提示hPOT1与胃癌的发生、发展有密切的关系,检测hPOT1的表达可能会有助于胃癌的早期诊断和预后.
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人端粒保护蛋白的研究进展
人端粒保护蛋白(human protection of telomeres,hPOT1)是一种端粒单链DNA结合蛋白,它结合于端粒末端的单链重复序列,在端粒长度的调控以及染色体的稳定方面起重要的作用.其表达水平下降所引起的端粒功能异常以及染色体畸变,与人类细胞的老化和恶性肿瘤的发生发展有密切的关系.对hPOT1结构、功能及作用机制的研究,不但可以进一步阐明细胞衰老和恶性肿瘤发生的分子机制,而且也将为肿瘤的诊断、治疗开辟新的思路和方法.
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人端粒保护蛋白(hPOT1)的研究进展
2001年,Baumann等发现并鉴定出人端粒保护蛋白(human protection of telomeres, hPOT1),它是至今发现的唯一能与人类端粒单链DNA结合的蛋白质.hPOT1重要的功能是对端粒有直接而重要的保护作用.
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人端粒保护蛋白(hPOT1)的研究进展
2001年,Baumann等发现并鉴定出人端粒保护蛋白(human protection of telomeres, hPOT1),它是至今发现的唯一能与人类端粒单链DNA结合的蛋白质.hPOT1重要的功能是对端粒有直接而重要的保护作用.
