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5-脂氧合酶激活蛋白在介导细胞因子诱导血管内皮细胞黏附分子表达中的作用
目的 研究5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)在细胞因子诱导血管内皮细胞表达黏附分子中的介导作用,以及MK886对血管内皮细胞表达黏附分子的抑制作用.方法 分离并原代培养人脐静脉血管内皮细胞,用FLAP微小强有力RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制FLAP的表达,或用MK886抑制FLAP的活性,采用肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)刺激血管内皮细胞,通过Western杂交和酶联免疫吸附检测血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和E选择素的表达.结果 人脐静脉血管内皮细胞能表达低水平的黏附分子,在细胞因子的刺激下黏附分子的表达水平提高.FLAP表达抑制后,细胞因子诱导黏附分子表达的作用降低.细胞因子刺激12 h后,同未处理细胞表达的黏附分子比较,不同黏附分子表达分别增加了6～51倍;用不同浓度MK886处理后,细胞表达的黏附分子水平明显下降,并呈MK886剂量依赖性.结论 FLAP介导了细胞因子诱导血管内皮细胞表达黏附分子的作用,MK886具有抑制血管内皮细胞表达黏附分子的作用.
关键词： 花生四烯酸盐5-脂氧合酶 内皮细胞 细胞黏附分子 脂氧合酶抑制剂 -
NDGA对HepG2细胞5-LOX及其凋亡相关基因表达的影响
目的 探讨脂氧合酶(lipoxygenase)抑制剂NDGA对肝癌细胞HepG2细胞5-LOX及其凋亡相关基因hTERT、bcl-2及bax表达的影响.方法 用RT-PCR方法检测NDGA对HepG2细胞5-LOX及其凋亡相关基因hTERT、bcl-2及bax表达的影响.结果 25、50、100、200 μmol/L的NDGA作用HepG2细胞24、48 h后5-LOX表达逐渐减弱,hTERTmRNA、bcl-2的表达明显下调,而bax的表达逐渐上调.与未加NDGA干预的HepG2对照组比较,P＜0.05.结论 5-LOX在HepG2细胞中存在高表达,提示5-LOX的高表达在肝细胞癌发病过程中可能起着重要作用;而端粒酶hTERTmRNA、bcl-2及bax等凋亡相关基因可能参与了其发病过程.脂氧合酶抑制剂NDGA体外可有效抑制细胞5-LOX的表达,明显下调端粒酶hTERTmRNA、bcl-2及上调bax的表达.LOX可能是肝癌生物化学治疗的新靶点.
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尼美舒利对胆管癌QBC939细胞增殖与凋亡的调节
目的研究选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡的影响.方法应用MTT比色法观察尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939增殖的影响,细胞凋亡采用透射电镜及流式细胞仪检测,应用免疫组化、RT-PCR检测尼美舒利对凋亡相关基因表达的影响.结果尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌细胞增殖,高浓度(200 μmol/L)尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖,而且诱导其凋亡,流式细胞仪研究显示,随药物浓度增加,细胞凋亡率显著增加,透射电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变:细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成等,免疫组化和RT-PCR测定显示尼美舒利显著下调bcl-2、survivin表达,而bax表达上调.结论尼美舒利显著抑制QBC939细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性,bcl-2、bax、survivin等凋亡相关基因可能参与了尼美舒利诱导的QBC939细胞凋亡过程.
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齐留通对CT-26结肠癌细胞及荷瘤鼠肿瘤生长影响的观察
目的:探讨齐留通对小鼠CT-26结肠癌细胞和荷瘤小鼠肿瘤生长的影响.方法:将100和200 μmol/L的齐留通作用于CT-26细胞后,通过倒置相差显微镜观察齐留通应用后细胞形态变化,用MTT法检测各组细胞的生长抑制率；建立小鼠结肠癌移植瘤模型,随机分为3组,对照组给予100 mg/(kg·d)三蒸水,干预组于移植当天给予齐留通100 mg/(kg·d)灌胃,治疗组于移植第14天给予齐留通100m/(kg·d)灌胃,每组各10只,移植28 d后,检测各组移植瘤生长情况和血清CEA的浓度,HE染色观察各组移植瘤组织的病理改变.结果:MTT结果显示,以时间和剂量浓度依赖方式抑制CT-26细胞增殖,100和200μmol/L的齐留通组在24、48和72 h的抑制率分别为23.44％和37.92％、33.64％和63.74％、50.85％和75.14％.干预组和治疗组的体积抑瘤率分别为(42.3±2.9)％和(20.1±3.9)％,瘤重抑瘤率分别为(39.0±2.5)％和(24.9±0.6)％.病理观察见干预组和治疗组移植瘤组织大片状坏死,其中干预组为明显.干预组、治疗组和对照组的癌胚抗原(CEA)含量分别为(72.07±19.90)、(94.20±21.71)和(142.30±18.83) ng/mL,P=0.000.CEA含量与移植瘤的体积和质量呈正相关,r值分别为0.794和0.785,P值均为0.000.结论:齐留通可以抑制结肠癌CT-26细胞增殖,并对荷瘤小鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用,且在结肠癌的早期应用能达到更好的效果.
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脂氧合酶与前列腺癌关系的研究进展
脂氧合酶(Lox)是多不饱和脂肪酸代谢途径的一个关键酶,按照组织分布被分为5-,8-、12-、15-LOX 4个家族.花生四烯酸通过LOX途径代谢产生多种生物活性脂类,这些脂类在肿瘤的发生、发展、侵袭和转移中起着重要的作用.研究发现,人前列腺癌组织和细胞株中存在LOX的异常表达,LOX抑制剂能有效地抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,因此,LOX途径可能成为肿瘤防治的新靶点.
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脂氧合酶代谢途径和胰腺癌
研究胰腺癌中脂氧合酶(LOX)异常表达,及了解LOX代谢途径与胰腺癌之间的关系,为LOX代谢途径作为胰腺癌治疗和化学预防的新靶点,提供理论依据和治疗途径.
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脂氧合酶对胰腺癌细胞增殖和凋亡的调节作用
目的观察5-脂氧合酶(LOX)及12-LOX在人胰腺癌中的表达,并初步探讨LOX的作用底物--多不饱和脂肪酸(PUFA)及LOX抑制剂对胰腺癌细胞增殖及凋亡的调节作用.方法用免疫组织(细胞)化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究5-LOX及12-LOX在胰腺癌组织和细胞株SW1990中的表达,用四甲基偶氮唑蓝(MTY)还原法及溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记法研究不饱和脂肪酸包括花生四烯酸(AA)、二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)以及5-LOX抑制剂MK-886和12-LOX抑制剂Baicalein对SW1990细胞增殖的影响;并用末端脱氧核苷酰转移酶介导的d-UTP-生物素缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞术方法研究上述物质对SW1990细胞凋亡的影响.结果5-LOX及12-LOX在胰腺癌组织和SW1990人胰腺癌细胞呈高表达,显著高于人正常胰腺组织对照.AA促进胰腺癌细胞株SW1990的增殖,且呈剂量依赖性;而DHA及EPA抑制SW1990细胞增殖,均呈剂量依赖性,DHA及EPA尚可促进SW1990细胞凋亡.MK-886及Baicalein均能抑制胰腺癌细胞株SW1990的体外增殖,并呈剂量依赖性,两者均可促进SW1990细胞凋亡,作用24h后凋亡细胞比例增高.结论5-LOX及12-LOX在胰腺癌中表达上调,PUFA对胰腺癌细胞增殖与凋亡存在调节作用,并且不同脂肪酸作用存在差异.AA促进胰腺癌细胞增殖,而DHA及EPA抑制其增殖,促进其凋亡.LOX抑制剂体外可抑制胰腺癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡.LOX可能是胰腺癌生物化学治疗的新靶点.
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黄芩素对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及miR-34a在其机制中的作用
目的:观察12-脂氧合酶抑制剂黄芩素(Baicalein)对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响,并初步研究miR-34a在黄芩素影响HepG2细胞机制中的作用.方法:黄芩素(浓度分别为25、50和100 μmol/L)作用HepG2细胞24 h和48 h后,分别用Hoechst33342染色后荧光显微镜观察HepG2细胞形态变化,CCK8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡的情况.采用qRT-PCR检测HepG2细胞中miR-34a的表达.结果:黄芩素(浓度分别为25、50、100 μmol/L)作用24、48 h后,HepG2细胞数量明显减少,细胞核固缩或裂解;CCK8法显示细胞增殖受到抑制;流式细胞术检测显示DNA染色荧光强度下降,黄芩素作用24 h后细胞出现DNA亚二倍体峰的比率分别为16.10%、33.18%和68.34%,48 h后为19.55%、36.59%和74.08%,活细胞比率下降,细胞死亡率增加.黄芩素处理后的HepG2细胞中miR-34a的表达量较未处理组明显增高.结论:黄芩素能抑制HepG2细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与miR-34a上调有关.
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5-LOX抑制剂NDGA对人肝癌HepG-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制的探讨
目的 观察5-lox抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对裸鼠人肝癌HepG-2细胞移植瘤的作用,并探讨其抗肿瘤的可能机制.方法 以人肝癌细胞HepG-2制备裸鼠人肝癌移植瘤模型共18只,将18只荷瘤裸鼠随机分为三组:1、正常对照组(接种正常肝癌HepG2细胞).2、药物组(接种正常肝癌HepG2细胞同时皮下注入5-log抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA),剂量:10μmnl/L NDGA 0.1ml/10g一天一次,连续5天).3、溶媒组(接种正常HepG-2细胞后皮下注射溶质二甲亚酚).密切观察移植瘤生长及裸鼠生存情况21天,记录各组移植瘤肿瘤体积V(V=长径×短径2×0.5),计算衰退率:肿瘤衰退率=1-干预组平均肿瘤体积比/空白对照组平均肿瘤体积比(V/Vo).通过RT-PCR及Western-blot法检测裸鼠移植瘤组织中bcl-2、caspase3凋亡调节因子以及通路信号蛋白MEK1/2、ERK1/2等的表达.结果 实验期间各组荷瘤鼠活动较好,成瘤率100％,且实验过程中无不良繁衍及裸鼠死亡;试验后分别测得各组荷瘤鼠皮下移植瘤体积及肿瘤衰退率,利用单因素方差分析及t检验可以发现:药物组荷瘤鼠较对照组及溶媒组移植瘤体积明显缩小,肿瘤衰退率明显较高,且存在统计学差异(P＜0.01);利用RT-PCR及Western-blot法检测发现药物组caspase3表达量较对照组及溶媒组明显增强,差异存在统计学意义(P＜0.01),bcl-2、ERK1/2、MEK1/2等表达量较对照组及溶媒组明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 NDGA对于裸鼠人肝癌移植瘤具有明显的抑制效果.NDGA可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤生长,其作用机制与抑制MEK/ERK信号通路有关.
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脂氧合酶抑制剂对肝癌细胞株HepG2增殖及MEK/ERK信号通路的影响
目的:探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对肝癌细胞株HepG2增殖及MEK/ERK信号通路的影响.方法:在不同浓度的NDGA干预下对HepG2细胞进行体外培养；应用MTT比色法观察NDGA对HepG2增殖的影响；逆转录PCR( RT-PCR)测定不同浓度NDGA干预下丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)1、MEK2、细胞外信号调节激酶(ERK)1、ERK2 mRNA表达强度.结果:NDGA可抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性；NDGA干预后HepG2细胞中MEK1、MEK2、ERK1、ERK2mRNA的表达强度随着浓度的增加呈递减趋势；不同浓度NDGA干预均显著降低MEK1 mRNA的表达强度(P＜0.05),在NDGA干预浓度为100 μmol/L及200 μmol/L时可显著降低MEK2、ERK1、ERK2 mRNA表达强度(P＜0.05).结论:NDGA可抑制HepG2细胞增殖,其作用机制与抑制MEK/ERK信号通路有关.
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黄芩素诱导胃癌细胞凋亡
目的探讨黄芩素对胃癌细胞凋亡的影响.方法 MTT法测定黄芩素对胃癌SGC-7901细胞生长抑制率.TUNEL染色、AO/EB荧光染色测定细胞凋亡率.结果胃癌细胞呈典型的凋亡形态学改变,凋亡比例呈剂量时间依赖性.TUNEL染色法显示,细胞凋亡指数2.6%～16.1%.结论黄芩素具有诱导胃癌细胞凋亡的作用.
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脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF-7细胞VEGF和CD44V6表达影响的研究
目的:探讨NDGA对乳腺癌MCF-7细胞VEGF和CD44V6表达的影响.方法:将乳腺癌MCF-7细胞系培养至对数生长期,分别以0、1、10、100μmol/L的NDGA处理48h后,RT-PCR法检测细胞VEGFmRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞CD44V6的表达情况.结果:在1、10、100μmol/L的NDGA作用下,3组VEGFmRNA和CD44V6的表达显著低于对照组(F=2996.13,P＜0.001;F=3435.08,P＜0.001).结论:NDGA明显下调MCF-7细胞VEGFmRNA和CD44V6的表达,抑制肿瘤细胞的侵袭转移能力.
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脂氧合酶抑制剂NDGA对HT-29结肠癌细胞诱导凋亡机制研究
目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA体外诱导HT-29结肠癌细胞凋亡机制.方法:RT-PCR检测NDGA处理后HT-29结肠癌细胞5-脂氧合酶信使核糖核酸(5-LOXmRNA)和端粒酶催化活性亚单位(hTERTmRNA)表达水平变化,激光共焦显微镜观察细胞内游离钙变化.结果:结肠癌HT-29细胞5-LOXmRNA和hTERTmRNA呈阳性表达,随着NDGA药物浓度的增大,细胞凋亡率的上升,5-LOXmRNA和hTERTmRNA表达水平逐步下降.细胞内钙浓度同步上升.结论:NDGA诱导凋亡是多方面因素共同作用的结果,5-LOX、端粒酶、游离钙都可能参与其诱导凋亡的过程.
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脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶和bcl-2的影响
目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶和bcl-2表达的影响.方法:将乳腺癌MCF-7细胞系培养呈对数生长期,分别以0、1、10、100μmol/L的NDGA处理48h后,RT-PCR法检测细胞端粒酶hTERTmRNA的表达水平,流式细胞仪检测细胞bcl-2的表达情况.结果:在1、10、100μmol/L的NDGA作用下,3组hTERTmRNA和bcl-2的表达均显著低于对照组(P＜0.001).结论:NDGA能够下调MCF-7细胞端粒酶hTERTmRNA及bcl-2的表达,进而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素对软骨细胞凋亡的抑制作用研究
目的 探讨12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素(Baicalein)对硝普钠(SNP)诱导的软骨细胞凋亡的抑制作用及可能机制.方法 取8周雄性SD大鼠膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化法提取软骨细胞并体外培养.设置对照组、SNP凋亡组和Baicalein给药组,以0.5 mM SNP作用24小时诱导软骨细胞凋亡,以5μM,25 μM,50 μM,100μM不同浓度的Baicalein作用细胞,确定适浓度,对照组仅加入同体积溶剂(蒸馏水).CCK8法检测药物对细胞毒性;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫荧光观测凋亡诱导因子(AIF)在软骨细胞中的定位.结果 Baicalein在各浓度下对软骨细胞无明显毒性,与对照组相比,凋亡组软骨细胞活性明显下降(P＜0.01),与凋亡组相比,给药组细胞活性浓度依赖性地升高(P＜0.01);流式检测显示对照组软骨细胞早期凋亡率3.16％,凋亡组27.8％,100 μM Baicalein给药组14.1％;免疫荧光检测显示,凋亡组AIF出现核内移位,100 μM Baicalein给药组AIF核移位受到抑制.结论 Baicalein通过抑制12/15-脂氧合酶活性,进而抑制AIF从线粒体中的释放及核转位,发挥抗软骨细胞凋亡作用.
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脂氧合酶抑制剂NDGA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生物学特性的影响
目的 探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长的影响.方法 采用MTT比色法、群体倍增时间、HE染色、TUNEL染色法等观察和检测NDGA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖与凋亡的影响.结果 NDGA(5-100μmol/L)可显著抑制SK-N-SH细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性.结论 脂氧合酶抑制剂NDGA可于体外抑制入神经母细胞瘤细胞的增殖,并诱导其凋亡.
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5-脂氧合酶的活性调节及抑制剂研究进展
5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LO)是催化花生四烯酸(AA)生成具有生物活性的白三烯(leukotrienes,LTs)的关键酶[1].近年来研究发现,5-LO的调节在哮喘、炎症、过敏性鼻炎、组织缺血再灌注损伤、心血管疾病及部分恶性肿瘤等疾病的发生、发展过程中均有非常重要的意义[2].因此,关于5-LO酶活性的调节和抑制剂的研发已成为一个热门课题,本文就其活性调节和抑制剂的研究进展综述如下.
关键词： 花生四烯酸盐5-脂氧合酶 脂氧合酶抑制剂 活化 调节 综述 -
尼美舒利对胆管癌细胞增殖及PCNA、Survivin蛋白表达的影响
目的:观察选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939生长的抑制作用及Survivin基因表达的变化.方法:应用MTT比色法、细胞群体倍增时间观察尼美舒利对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学法观察尼美舒利对QBC939细胞PCNA,Survivin蛋白表达的影响.结果:尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌增殖,高浓度(200μmol/L)尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖,而且诱导其凋亡.流式细胞仪研究显示,随药物浓度增加,细胞凋亡率显著增加.免疫组化结果显示尼美舒利处理后的QBC939细胞PCNA,Survivin蛋白的表达明显减弱.结论:尼美舒利能抑制QBC939细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与PCNA,Survivin蛋白的表达下调有关.
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菲尼酮对大鼠脑损伤后脑微循环的影响
目的探讨5-脂氧合酶抑制剂菲尼酮对大鼠脑损伤后脑循环的影响. 方法实验分为对照组和给药组.制备流体冲击致大鼠脑损伤模型,用氢清除法和二胺基联苯胺染色及图像观察分析大鼠海马血流量(hippocampal blood flow ,HBF)和血管密度变化以及菲尼酮对其的影响. 结果大鼠脑损伤后1 h HBF开始下降,4 h达低,8 h以后逐渐恢复;与此同时海马血管密度在伤后4 h升高达峰值,8 h后逐渐下降至伤前水平.给药组在伤后8 h海马血流量已恢复到伤前水平,海马血管密度在伤后4 h有增加的趋势,但与伤前比较,差异无显著性意义. 结论流体冲击致大鼠脑损伤后,菲尼酮可不同程度地逆转HBF降低与血管密度破坏性的增加,这可能与其抑制了炎性介质如白三烯的产生等有关,从而有利于创伤后脑循环功能的恢复.
