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可溶性β-淀粉样蛋白25-35致PC12细胞凋亡的实验研究
目的探讨水溶性β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)致PC12细胞死亡发生的可能机制. 方法采用MTT法分析Aβ25-35对细胞活性的影响;采用电镜、DNA电泳判断Aβ25-35致PC12细胞死亡的类型;应用免疫细胞化学和蛋白杂交检测P53蛋白是否参与细胞的损伤. 结果 MTT法检测显示随着Aβ25-35浓度的增加,细胞活性呈剂量依赖性降低(分别为0.91、0.75、0.65、0.58、0.54、0.41);电镜及DNA电泳显示细胞凋亡相关特征;加入Aβ25-35后免疫细胞化学和蛋白杂交示P53蛋白表达而对照组呈阴性. 结论水溶性Aβ25-35在形成淀粉样纤维沉积前即可导致PC12细胞凋亡,P53蛋白参与了细胞凋亡的发生.
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莱菔硫烷对阿尔茨海默病小鼠脑组织Aβ沉积和氧化应激的影响
目的 探讨莱菔硫烷(SFN)对阿尔茨海默病(AD)的干预作用. 方法 将8周龄C57BL/6J小鼠按体质量随机分为3组(n=10).干预组、模型组小鼠饮用含铝水(0.4 g/100 ml)及隔日1次皮下注射200 mg/kg D-半乳糖,并每日1次分别灌胃25 mg/kg SFN和等量蒸馏水,同时设立溶媒对照组.90 d后检测血铝水平、脑组织Aβ沉积情况及大脑皮质氧化应激相关指标. 结果 模型组和干预组小鼠血铝水平高于对照组,干预组小鼠血铝水平低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,模型组小鼠脑组织Aβ沉积斑块增多,谷胱苷肽过氧化物酶活性降低,羰基含量增加(均P＜0.05);而干预组小鼠脑组织Aβ沉积斑块、谷胱苷肽过氧化物酶活性及羰基含量与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比较,干预组小鼠脑组织Aβ沉积斑块减少(P＜0.05).各组小鼠脑组织SOD活性及总巯基含量差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 SFN可降低AD模型小鼠的血铝水平,减少脑组织Aβ斑块沉积,并对氧化应激具有一定的调节作用.
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生长抑素及其受体与β-淀粉样蛋白降解酶的相关研究进展
阿尔兹海默症(AD)是多因素疾病,具体发病机制仍不明确,β-淀粉样蛋白(Aβ)在脑内的沉积是导致AD发生的主要原因之一[1-2],大量蛋白酶被证实能够在体内外降解Aβ[3].生长抑素(SST)是一种在体内广泛分布的环肽,SST通过其受体(SSTR)发挥生理学功能[4-5].SST及SSTR与AD发病密切相关,且主要通过降解途径影响Aβ在脑内表达[5].本文将就SST主要受体特性,Aβ主要降解酶,SST及SSTR与AD、Aβ降解酶的关系和相关药物治疗手段做一综述.
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阿尔茨海默病疾病调修药物的研究进展
疾病调修(disease modifying)药物作为一类新药,能够在症状尚未出现的疾病起始阶段及时作用于阿尔茨海默病(AD)的病理机制,阻止或延缓AD病程的发生发展,近几年来逐渐受到人们的关注.现就AD疾病调修药物当前的研究进展予以综述.
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MAP激酶家族在淀粉样β蛋白片段25～35引起的大鼠海马炎症反应及细胞凋亡中的作用
目的研究淀粉样β蛋白片段25～35(Aβ25～35)引起的大鼠海马炎症反应、细胞凋亡机制及抗炎药物布洛芬的保护作用.方法大鼠灌胃给予布洛芬7.5 mg·kg-1,连续应用3 周,脑室内单次注射Aβ25～35(10 μL, 1 mmol·L-1),注射后继续应用布洛芬1周后,取脑,进行尼氏染色和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色,研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞激活.Western印迹观察白细胞介素-1β(IL-1β), 胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2),有丝分裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK),蛋白激酶C(PKC) 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达.RT-PCR分析IL-1β mRNA表达水平.结果脑室内注射Aβ25～35可引起海马CA1区星形胶质细胞激活和浸润,IL-1β蛋白表达和IL-1β mRNA表达水平明显增加,这种炎症反应伴有海马CA1区锥体神经元损伤.另外,Aβ25～35也能引起磷酸化的p38 MAPK蛋白表达较对照组明显增加,从对照组0.167±0.091增加到0.497±0.059(P<0.01, n=4).使磷酸化的ERK1/2蛋白表达下调, ERK1的表达从对照组0.146±0.010下降到0(P<0.01, n=4).ERK2表达从对照组的0.412±0.054下降到0.131±0.038(P<0.01, n=4).这些改变伴随有caspase-3蛋白表达的增加.但Aβ25～35对PKC的蛋白表达没有影响.布洛芬(7.5 mg·kg-1,连续应用4 周)能明显抑制Aβ25～35引起的IL-1β, p38 MAPK和caspase-3蛋白表达增加.海马CA1区锥体神经元的损伤和星形胶质细胞激活和浸润也被明显减轻.结论 p38 MAPK的激活和磷酸化的ERK1/2的下调在Aβ25～35引起的海马炎症反应及细胞凋亡中起关键性作用,布洛芬能阻止这种炎症反应和细胞凋亡.
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布洛芬对Aβ25-35所致大鼠海马损伤及iNOS表达的影响
目的研究非甾体类抗炎药布洛芬(Ibuprofen,Ibu)对大鼠脑室内注射Aβ25-35所致海马损伤及iNOS mRNA表达的影响.方法大鼠灌胃给予Ibu(7.5,15mg·kg-1)连续应用3w,脑室内注射Aβ25-35 (5μL, 2M),注射后1w,取脑组织,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)免疫组织化学染色,观察海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞的活化浸润情况.RT-PCR 分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达水平.结果大鼠脑室内注射Aβ25-35可引起海马CA1区星形胶质细胞的激活和浸润及锥体神经元的损伤,同时伴有iNOS mRNA表达增加.Ibu(7.5,15mg·kg-1,连续应用4w)能减轻海马CA1区锥体神经元的损伤及星形胶质细胞的激活和浸润,抑制Aβ25-35引起的iNOS mRNA表达增加.结论 Ibu能够通过抑制Aβ25-35引起的iNOS mRNA表达,减轻大鼠海马锥体神经元的损伤.
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氧化应激与阿尔茨海默病
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)已经成为医学科学研究的重点和热点研究领域之一.迄今为止,人们还不能完全解释AD的发病机制.但是AD患者脑中出现的大量高密度的淀粉样β-蛋白(amyloid β-protein,Aβ)以及Aβ具有的神经毒性作用是导致AD的重要原因,这已经成为不争的事实.然而,Aβ发挥神经毒作用的机制十分复杂,涉及钙超载、炎症反应、离子通道功能异常和氧化应激等诸多方面.其中,关于Aβ通过氧化应激参与AD发病机制以及抗氧化药物在AD治疗中的实验研究进展,近年来已有不少的报道.本文主要就此方面的研究状况进行综述,以期为AD的抗氧化治疗提供线索和依据.
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阿魏酸钠对抗Aβ25-35致大鼠学习记忆障碍与IL-1β和p38MAPK表达的相关性探讨
目的研究阿魏酸钠(sodium ferulate)对抗Aβ25-35致大鼠学习记忆障碍与白介素-1β(IL-1β)和丝裂原激活的蛋白激酶p38(Mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)表达的相关性.方法大鼠脑室内一次性注射Aβ25-35制备AD动物模型,通过大鼠行为学和海马CA1区的病理学改变观察阿魏酸钠的作用.Western blot和ELISA方法检测磷酸化p38MAPK和IL-1β蛋白表达量的变化.RT-PCR分析FasL mRNA 表达水平.结果脑室内注射Aβ25-35可使大鼠出现明显的学习记忆障碍,即逃避潜伏期明显延长,原平台象限游泳时间占总游泳时间百分比明显降低.这些行为学的改变伴随有海马CA1区星形胶质细胞激活和浸润,IL-1β蛋白表达和FasL mRNA 表达水平明显增加,海马CA1区锥体神经元损伤.另外,Aβ25-35也能引起磷酸化的p38MAPK蛋白表达明显增加.阿魏酸钠(50,100,250 mg·kg-1,连续应用4 wk)与阳性对照药布洛芬(15 mg·kg-1)均能明显对抗Aβ25-35所致大鼠学习记忆障碍,抑制Aβ25-35引起的IL-1β、磷酸化p38MAPK和FasL mRNA表达增加,海马CA1区锥体神经元的损伤和星形胶质细胞激活和浸润也被明显减轻.结论阿魏酸钠通过抑制Aβ25-35引起的海马炎症反应和p38MAPK活性,减轻大鼠海马锥体神经元的损伤,改善大鼠的学习记忆功能.
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用理论方法建立memapsin2蛋白酶的三维结构模型
目的：通过理论方法建立M2蛋白酶的三维结构模型.方法：基于模板进行多重序列联配和结构联配建立M2蛋白酶的初始结构模型，对初始模型进行分子力学和分子动力学优化，用多种评价方法对所得结构进行合理评价.结果：得到了M2蛋白酶的三维结构模型，合理性评价结果表明该结构模型正确，M2蛋白酶的催化活性位点与天冬氨酸蛋白酶相似，区别在于与活性位点相邻的结构域的构象不同.结构保守区α碳原子叠合结果说明M2蛋白酶与其他天冬氨酸蛋白酶具有相同的生物进化来源.结论：M2蛋白酶的结构模型可以为进一步的分子生物学实验提供有益的参考，也可以此模型为基础进行数据库筛选和药物分子设计.
