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大肠癌早期诊断新技术
早期发现大肠癌及癌前病变有助于降低大肠癌的发病率和死亡率.大便潜血试验是常使用的大肠癌筛检方法,再水化愈创木酯试验可增加灵敏度,但特异性较无再水化者低;免疫化学法灵敏度和特异性均较高.仿真结肠镜灵敏度和特异性类似结肠镜检查,并能消除净化肠道带来的不适,增加患者的依从性.检查粪便大肠癌组织脱落的标准物是目前大肠癌筛检技术研究的热点.直接寻找粪便脱落癌细胞、检测粪便脱落细胞DNA含量等均具有较高的灵敏度和特异性.在大肠癌组织检出的基因突变,同样可以在患者粪便脱落细胞内检出.同时检测大肠脱落细胞内K-ras、APC、p53等多个基因突变和微卫星、凋亡等标准物对于筛检大肠癌及其癌前病变具有很好的灵敏度和特异性.检测大肠肿瘤特异的蛋白标准物更能增加筛检的灵敏度和特异性,粪便癌胚抗原、促衰变因子、STn抗原等均具有较好的效果.
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老年高血压患者肝肾阴虚证的特征
目的 观察老年高血压患者肝肾阴虚证临床特征及外周血标识基因表达,为中医辨证论治老年高血压提供依据.方法 本研究首先分析老年高血压患者高血压分级和病程与肝肾阴虚证的相关性;再根据全基因组芯片在原发性肝癌患者的肝肾阴虚证与非肝肾阴虚证组中筛选的具有差异表达的17个基因mRNA的表达,基于异病同证原理,应用实时荧光定量PCR技术探索性观察老年高血压肝肾阴虚证患者的外周血单个核细胞中是否存在同样的17个差异基因mRNA的表达.并应用受试者特征性操作曲线(ROC曲线)构建肝肾阴虚证的诊断模型.结果 研究共纳入老年高血压患者(＞65岁)60名,其中肝肾阴虚证患者30名,非肝肾阴虚证患者30名,随着高血压病程延长,老年高血压肝肾阴虚证患者更多;与非肝肾阴虚证患者相比,老年高血压肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞中MLH3表达减少,CD55表达增加,差异具有统计学意义,进一步采用ROC分析,AUCMLH3=0.783,AUCCD55 =0.737,MLH3和CD55作为老年高血压肝肾阴虚证诊断模型的灵敏度分别为63.5％、57％,特异度分别为93％,90％.结论 MLH3和CD55可能是老年高血压肝肾阴虚证的标识基因.
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大鼠DAF蛋白真核表达载体的构建及生物活性鉴定
目的 构建大鼠促衰变因子(DAF)的酵母真核表达载体,诱导其表达并对生物学特性进行鉴定.方法 采用RT-PCR技术从大鼠肝脏组织中扩增出DAF基因并克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K质粒中.经酶切鉴定后,将pPIC9K-DAF转化至毕赤酵母菌GS115,通过G418-YPD平板筛选高拷贝转化子.转化子经甲醇诱导表达后,对表达的DAF蛋白进行SDS-PAGE及Western blot鉴定并检测重组蛋白的生物活性.结果 成功克隆大鼠DAF基因,并筛选出pPIC9K载体中的DAF阳性克隆,证实所获得相对分子质量约为70×103大小的重组蛋白具有大鼠DAF蛋白的抗原性和生物学活性.结论 采用分子克隆的方法成功构建大鼠DAF蛋白的毕赤酵母真核表达载体,能为补体及免疫研究提供高效的大鼠DAF蛋白来源.
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CR2-DAF和DAF-CR2靶向补体抑制物的构建、表达与鉴定
目的: 构建针对补体激活物的特异靶向补体抑制物, 并对其进行体外活性鉴定.方法: 将补体受体(CR2)与补体抑制物(促衰变因子, DAF)以融合表达方式(顺反结构)克隆到表达载体PBM中, 然后将重组体转移到CHO细胞中进行蛋白表达, 用SDS-PAGE、 Western blot、流式细胞术(FCM)检测、 SPR检测及补体介导的细胞溶解实验对表达的融合蛋白进行生物学活性鉴定.结果: SDS-PAGE和Western blot结果显示出现预期大小的目标片段.FCM与SPR检测结果显示, 重组蛋白CR2-DAF与DAF-CR2能特异地与C3包被的CHO细胞、 C3dg配基相结合.补体介导的细胞溶解实验结果显示, 靶向补体抑制物比相应的非靶向补体抑制物的抑制效果明显(CR2-DAF的抑制效率高达20倍).结论: 成功构建了CR2-DAF和DAF-CR2靶向补体抑制物, 为下一步进行动物体内补体抑制实验奠定了基础.
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促衰变因子在三阴性乳腺癌中的表达及其对预后的影响
目的：探讨长度促衰变因子(DAF，CD55)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达及与预后的关系。方法：用免疫组化S-P法检测100例TNBC及50例TNBC旁乳腺组织中CD55的表达；结合临床病理和随访资料，建立Cox模型进行预后分析。结果：CD55在TNBC中的表达率为56.0%，在癌旁乳腺中的表达率为8.0%，两者之间差异有统计学意义(x2=32.0，P＜0.05)。CD55的表达与肿瘤大小、临床分期及腋下淋巴结转移均具有显著相关(x2=7.404，x2=8.688，x2=4.802；P＜0.05)，而与年龄和组织学分级无显著相关。多因素分析显示，年龄、临床分期、CD55及腋淋巴结转移情况4项指标是影响患者DFS的独立危险因素；临床分期及腋淋巴结转移情况两项指标是影响患者OS的独立危险因素。结论：CD55的高表达可能参与了TNBC的发生、发展过程，并与预后有相关性，提示CD55的表达可能成为判断TNBC浸润进展及预后的指标之一。
