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IL-24基因修饰的树突状细胞促进CIK细胞对肺癌细胞的杀伤作用
目的 研究IL-24基因修饰的树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cyto-kine-induced killer,CIK)共培养后对A549肺癌细胞的杀伤作用及其机制.方法 从健康人外周血单个核细胞中常规诱导DC、CIK细胞,同时抽提重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL-24,Pac I酶切线性化后脂质体转染QBl-293A细胞,收获Ad-IL-24重组病毒.将IL-24基因通过重组病毒导入已负载肿瘤抗原的DC,获得细胞称为DC-IL-24.RT-PCR和ELISA法检测DC中IL-24基因的表达,FCM和ELISA法检测DC表型及分泌细胞因子能力的变化,将DC和CIK细胞混合培养,溶血试验检测CIK细胞产生穿孔素的能力,FCM法检测共培养的DC-CIK细胞对A549肺癌细胞细胞毒活性的变化.结果 获得了高滴度的重组病毒Ad-IL-24并成功将IL-24基因导入DC,在倒置荧光显微镜下可观察到荧光,IL-24可上调Dc表而CD80、CD83、HLA-DR、CD40、CXCR4分子的表达,转染后Dc分泌IL-12、TNF-α和IL-24的能力显著增强,DC-IL-24更能促进CIK细胞产生穿孔素,与同源CIK细胞共培养后对A549肺癌细胞的细胞毒活件明显增强.结论 IL-24基因修饰的DC能增强自体CIK细胞产生特异性抗肿瘤免疫,其机制与IL-24能促进DC表型成熟,分泌Th1型细胞因子,维持DC活化状态,进而促进CIK细胞活化密切相关.
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IL-24融合蛋白表达载体的构建及其对人小肠癌细胞的生长抑制作用
目的:构建人白细胞介素-24(IL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达.研究IL-24融合蛋白对人小肠癌细胞(HIC)的生长抑制作用.方法:用PCR从质粒TRAP-hIL-24中扩增人IL-24 cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达.用SDS-PAGE和Westem blot对表达产物进行鉴定.提取并纯化IL-24融合蛋白,以不同浓度与HIC细胞共培养72 h,同时设立相应浓度梯度的GST蛋白组、HIC细胞对照组及空白孔,采用MTT法检测各组人小肠癌细胞的体外增殖.结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致,融合蛋白为Mr53000,GST蛋白为Mr29000.IL-24融合蛋白以浓度依赖性的关系抑制HIC细胞的生长,并且在20和40mg/L时的抑制率明显高于GST蛋白.结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-IL-24,并在EcoliBL21中表达.IL-24融合蛋白对HIC细胞生长有抑制作用.
关键词： IL-24 原核表达 GST-IL-24融合蛋白 小肠癌细胞系HIC -
IL-24对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响
目的 探讨抑癌基因IL-24对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响.方法 将携带有目的 基因IL-24的穿梭质粒pAd track CMV转染入体外培养的宫颈癌Hela细胞,用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率.同时以转染空载体pAd track CMV的Hela细胞和野生型Hela细胞作为空载体对照和阴性对照.结果 经MTT法测定,三组之间OD值总体上有差异(P<0.001),IL-24组OD值明显低于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),而空质粒组和阴性对照组的OD值无明显差异(P=0.661);经流式细胞仪测定,三组之间的细胞早期凋亡率总体上有差异(P<0.05), IL-24组细胞早期凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.05),而空质粒组和阴性对照组的细胞早期凋亡率无明显差异(P>0.05);与空质粒组和阴性对照组相比,IL-24组G0/G1期细胞增多(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),而空质粒组和阴性对照组无明显差异(P>0.05).结论 IL-24对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用.
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IL-24抑制宫颈癌裸鼠移植瘤生长的初步研究
目的 探讨基因重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌移植瘤生长和浸润转移的抑制作用,以及其与nm23H1表达变化的关系.方法 将18只造模成功的人宫颈癌Hela细胞裸鼠模型随机分为3组,每组6只:BPS缓冲液时照Ⅰ组,空质粒Ⅱ组,IL-24重组质粒Ⅲ组.观察各组裸鼠饮食、体重等一般状况,记录各组裸鼠移植瘤体积、绘制生长曲线.观察裸鼠肿瘤附近淋巴结转移情况,实验结束后根据瘤体重量计算肿瘤抑制率.应用RJ-PCR法检测移植瘤IL-24的表达,并用免疫组化法nm23H1蛋白表达变化.结果 基因重组质pDC316-hIL-24在裸鼠体内转染成功,且有明显的抑瘤效果,抑瘤率为42.9%,与对照组、空粒组差异有统计学意义(P<0.03).IL-24重组质粒组肿瘤淋巴结转移较其他组少,差异有显著(P<0.05).免疫组化结果显示,IL-24组的转移抑制基因nm23H1蛋白表达明显增多,与其余2组比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 重组质粒pDC316-hIL-24能明显抑制宫颈癌裸鼠肿瘤模型的生长,并可能通过上调nm23H1的表达发挥抗肿瘤生长和浸润转移的作用.
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IL-24对人宫颈癌C33A细胞裸鼠移植瘤的治疗研究
目的 利用重组质粒pDC316-11IL-24,探讨IL-24对人宫颈癌c33A细胞裸鼠移植瘤的生长及凋亡作用.方法 15只裸鼠腋窝处皮下接种人宫颈癌C33A细胞,建立宫颈癌荷瘤裸鼠模型.随机分为三组,用脂质体包裹pDC316-hIL24重组质粒、pDC316空质粒和磷酸盐缓冲液(PBS),分别于瘤体内注射,比较各组移植瘤生长情况;处死裸鼠剥瘤称重,计算抑瘤率.通过RT-PCR检测IL-24转染至移植瘤内.常规HE染色观察组织形态学变化,免疫组化法检测移植瘤组织中Bax、Bd-2的表达.结果 (1)成功建立移植瘤模型,IL-24基因在C33A细胞中表达,重组质粒组移植瘤生长受到明显抑制,移植瘤体积和瘤重均明显小于空质粒组和PBS组(P<0.05),平均抑瘤率为36%(P<0.05),差异有统计学意义.后两组移植瘤体积和瘤重则无明显差异(P>0.05).(2)病理学见重组质粒组癌细胞有不同程度的坏死灶,坏死区周围可见凋亡细胞,核碎裂等.(3)免疫组化结果 示重组质粒组Bd-2表达下调,Bax表达上调,于空质粒组和PBS组差异有统计学意义(P<0.05).后两组则无明显差异(P>0.05).结论重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌移植瘤的生长具有显著抑制作用,促进肿瘤细胞凋亡,为宫颈癌基因治疗的提供理论依据和实验基础.
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pIRES-IL-24-PTEN双表达载体的构建及鉴定
目的 构建携带人IL-24 和10 号染色体缺失的磷酸脂酶与PTEN 双基因的真核表达载体,为研究其表达产物的抑癌机制提供基础.方法 通过PCR 方法获得PTEN、IL-24 基因片段,进行T-A 克隆,再酶切亚克隆到pIRES 载体,酶切、测序鉴定正确后命名为pIRES-IL-24-PTEN 载体.脂质体转染A549 细胞,提取细胞的总蛋白,Western blot 检测IL-24和PTEN 蛋白的表达.结果 酶切、测序显示pIRES-IL-24-PTEN 载体序列正确,Western blot 检测到IL-24 和PTEN 蛋白表达.结论 成功构建pIRES-IL-24-PTEN 载体,为后续研究奠定基础.
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白介素-24基因在自体移植静脉中表达的实验研究
目的：研究白介素-24基因（interleukin-24，IL-24）在自体移植静脉内膜增生中的动态表达及意义。方法 Wistar大鼠56只，将右颈总静脉端-端吻合于同侧颈总动脉建立自体移植静脉模型。术后随机分别于6h、24h、3d、7d、14d、28d、42d相应时间点切取移植静脉，同时取自身对侧正常颈静脉作为对照组。行HE和Masson特殊染色，观察移植静脉的组织病理学变化，并应用免疫组织化学方法检测其相应蛋白表达情况。同一组内不同时间点比较采用单因素方差分析及q检验，不同组同一时间点的比较采用配对t检验。结果正常静脉中IL-24基因蛋白表达较强，呈强阳性，单位视野内阳性细胞表达率为25.7±2.3%。静脉移植术后随着内膜增生逐渐加重，I L-24基因蛋白表达强度呈逐渐减弱趋势，变化较明显的3个时相（术后1w、2w、4w）单位视野内阳性表达细胞百分率分别为20.1±3.1%，14.3±1.4%，7.5±1.6%，术后2w细胞阳性率较正常对照组有显著降低（P<0.05）；术后4w细胞阳性率较正常对照组有极明显统计学意义（P<0.01）。术后6w细胞阳性率（5.8±1.4%）较4w比较，降低不明显，无统计学意义（P>0.05）。结论移植静脉内膜早期增生与IL-24的失活表达关系密切，IL-24的正常表达可能抑制移植静脉内膜增生的发生发展。
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IL-24与蛋白激酶和 eIF-2α在胶质瘤中的表达
目的：探讨IL-24与蛋白激酶（ PKR）、真核细胞翻译起始因子（ eIF-2α）在胶质瘤中的表达情况。方法收集30例不同级别的胶质瘤标本，利用荧光定量PCR及免疫组化技术检测胶质瘤中IL-24及PKR、eIF-2α的表达。结果胶质瘤中IL-24及PKR、eIF-2α的mRNA及蛋白表达随级别的增加表达降低。结论胶质瘤中IL-24下调可能通过PKR、eIF-2α的表达抑制，降低胶质瘤细胞凋亡。
关键词： 蛋白激酶 真核细胞翻译起始因子 IL-24 -
Ad-ING4-IRES-IL-24双基因共表达载体的构建及表达
目的:构建IRES介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白介素24(IL-24)双基因的重组腺病毒共表达载体(简称为Ad-ING4-IRES-IL-24),研究其表达产物对A549肺癌细胞生长的影响.方法:将PCR扩增的IRES、ING4和IL-24基因片段分别插入pAdTrack-CMV载体中构建pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24双基因共表达重组转移载体.按腺病毒载体常规构建方法获得同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-ING4-IRES-IL-24,并在QBI-293A包装细胞中进行包装和病毒扩增.将扩增后的Ad-ING4-IRES-IL-24腺病毒感染A549肺癌细胞,并用RT-PCR和Western blot法鉴定ING4和IL-24基因在QBI-293A细胞或A549肺癌细胞中的表达,MTT法和流式细胞仪检测其对A549肺癌细胞生长抑制和诱导凋亡的功能和抑癌增效作用.结果:DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING4、IRES和IL-24片段的序列与GenBank报道的完全一致,Ad-ING4-IRES-IL-24能成功介导ING4和IL-24基因在QBI-293A和A549细胞中表达,不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡(72小时生长抑制率为62.82%±0.65%,凋亡率为19.40%±1.29%),而且与Ad-ING4-IRES(72小时生长抑制率为42.31%±0.43%,凋亡率为13.30%±1.85%)和Ad-IRES-IL-24单基因组(72小时生长抑制率为47.44%±0.39%,凋亡率为12.40%±1.05%)相比具有显著性差异(P＜0.05).结论:成功构建了IRES介导的Ad-ING4-IL-24双基因共表达重组腺病毒载体,Ad-ING4-IL-24不仅能明显抑制A549肺癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad-ING4和AdIL-24单基因组相比具有抑癌增效作用.
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Ad-IL-24抑制乳腺癌生长的体外实验研究
目的 研究腺病毒介导的IL-24基因(Ad-IL-24)表达对乳腺癌的生长抑制作用.方法 将扩增的Ad-IL-24腺病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用RT-PCR法、Westernblot法检测IL-24基因在肿瘤细胞中的转录和表达;MTT法和FCM检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制和凋亡率;半定量RT-PCR检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的凋亡相关基因Bax、Bcl-2及Survivin转录的影响;ELISA法检测VEGF、Ang-1的分泌水平.结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞增殖有明显抑制作用,并能引起细胞凋亡,其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值升高、Survivin降低有关;VEGF、Ang-1表达下降.结论 腺病毒介导的IL-24基因在体外可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡,其机制可能与下调Survivin、VEGF、Ang-1,上调Bax的基因表达水平有关,该研究可为乳腺癌的基因治疗提供一定实验依据.
关键词： IL-24 腺病毒载体 MDA-MB-231细胞 -
mda-7/IL-24及其抗肿瘤机理研究进展
IL-24是研究黑色素瘤分化相关基因-7(mda-7)产物命名的一类新型细胞因子；IL-24在多种细胞中表达,诱导分泌IL-6、TNF-α、IFN-γ等细胞因子.IL-24通过“旁观者效应”、“自噬作用”等生物学效应诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤血管生成,抑制肿瘤细胞转移从而实现抗肿瘤的目的.IL-24还具有增强肿瘤细胞放疗敏感性和协同化疗药抗肿瘤的特性,因而对其进行深入地研究具有临床的应用价值.
关键词： 黑色素瘤分化相关基因-7 IL-24 肿瘤 -
IL-24对CIK细胞体内杀伤肿瘤细胞活性的影响
目的 研究IL-24对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体内杀伤肿瘤细胞活性的影响.方法 (1)从健康人外周血中提取单个核细胞,第一天加入IFN-γ(1 000 IU/mL),第二天加入IL-1(100 IU/mL)、CD3mAb(50 ng/mL)、IL-2(300 IU/mL)诱导CIK细胞,另一组与IL-1、CD3mAb、IL-2同时加入IL-24(1 000 IU/mL);(2)建立HepG2肿瘤细胞株荷瘤小鼠皮下移植瘤模型,分为五组,每三天分别测量肿瘤大小.结果 IL-24诱导CIK细胞治疗组荷瘤小鼠实体瘤体积小于其它组(P＜0.05).结论 在CIK细胞诱导过程中加入IL-24能明显增强其体内的抗肿瘤活性,对临床上把CIK细胞用于生物治疗有一定的指导意义.
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞 IL-24 体内杀伤活性 -
IL-24增强细胞因子诱导的杀伤细胞对HepG2的细胞毒活性
目的 寻求增强CIK细胞毒活性的有效方法,以满足临床过继免疫治疗的需要.方法 从健康人外周血中提取出单个核细胞,第1天加入IFN-γ,第2天加入IL-1、CD3mAb、IL-2诱导CIK细胞;另一组与IL-1、CD3mAb、IL-2同时加入IL-24.细胞计数法测定细胞的增殖,MTT法测定细胞杀伤活性,比较两者有无差别.透射电镜下观察CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤和肿瘤细胞的改变.结果 未加IL-24培养组增殖率高于加IL-24培养组,两者比较有明显差异(P＜0.05).加IL-24培养组细胞各个效靶比杀伤活性均达到90%以上,明显高于其它各组.透射电镜下可见加IL-24培养组凋亡和坏死的肿瘤细胞比未加IL-24培养组明显增多.结论 CIK细胞诱导过程中加入IL-24能明显增强它的杀伤活性.
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞 IL-24 细胞毒活性 增殖活性 -
IL-24、P27、VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达及意义
目的:探讨IL-24、P27、VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达情况及临床意义.方法:采用免疫组化S-P法分别检测50例非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织中的IL-24、P27、VEGF的表达水平.结果:IL-24、P27、VEGF总阳性表达率分别为46.00％、38.00％、68.00％,各种检测指标的阳性率在肺癌组织与对照组间均存在着差异性(P＜0.05).IL-24、P27的表达均与肿瘤的分化程度有关(P＜0.05),而与组织学类型、临床分期无关(P＞0.05),VEGF的表达与肺癌的细胞分化程度和TNM分期相关(P＜0.05),与病理类型无关(P＞0.05).IL-24、P27、VEGF三者之间存在密切相关性.结论:IL-24、P27、VEGF与肺癌发生、发展有密切关系,联合检测三者表达水平对于肺癌临床诊断及评估恶性程度和判断预后有重要意义.
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MDA-7/IL-24基因与化疗药物联合应用对食管癌细胞产生协同抑制作用
目的:探讨人黑素瘤分化相关基因7(melanoma differentiation-associated gene-7,MDA-7)/白介素-24(IL-24)基因对食管癌细胞的抑制作用及其与化疗药物的协同抗瘤作用.方法:RT-PCR法检测人食管癌细胞株TE-11和YES-5中MDA-7/IL-24受体IL-20R1、IL-20R2和IL-22R1的表达水平.用携带MDA-7/IL-24基因的重组人复制缺陷腺病毒Ad-MDA-7感染TE-11和YES-5细胞,Ad-LacZ为对照腺病毒,人成纤维细胞株OUMS-24为对照细胞.MTT法检测感染细胞抑制率,Western blotting法检测感染前后细胞中的MDA-7水平.化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(CDDP)、丝裂霉素(MMC)和足叶乙甙(VP-16)分别与Ad-MDA-7联合作用于食管癌细胞株,MTT法检测单独或联合应用对食管癌细胞的抑制作用,流式细胞术检测Ad-MDA-7与化疗药单独或联合应用后食管癌细胞周期的变化,Western blotting检测Ad-MDA-7与化疗药联合作用后细胞凋亡和增殖的相关分子的变化.结果:TE-11和YES-5细胞均表达3种IL-24受体.Ad-MDA-7感染后,两种食管癌细胞中均有MDA-7蛋白表达,同时细胞均被剂量依赖性地抑制生长,Ad-MDA-7达3×104VP/细胞时TE-11细胞抑制率超过80％、YES-5细胞超过50％;同剂量Ad-LaeZ对细胞无抑制作用,成纤维细胞OUMS-24被Ad-MDA-7感染后没有发生明显细胞抑制.Ad-MDA-7分别与5-FU、CDDP、MMC和VP-16联合应用后,与单独应用相比产生了更强的抗肿瘤协同效应.Ad-MDA-7与5-FU联合应用诱导细胞更多停滞在S和G2/M期,subG1期细胞比例明显增加.与单用5-FU相比,联合应用时Ad-MDA-7诱导了更多的细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-8、-9、-3的表达,增加了Akt的磷酸化,但降低了IκB-α的表达水平.结论:MDA-7/IL-24与化疗药联合应用于食管癌细胞,产生了更强的抗肿瘤协同效应,为临床化疗和基因治疗的联合应用提供新选择.
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mda-7/IL-24对裸鼠肝癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用
目的: 探讨mda-7/IL-24对裸鼠肝癌细胞移植瘤的生长抑制和促凋亡作用及其相关机制.方法:构建携带mda-7基因的重组腺病毒载体Ad.mda-7.以HepG2细胞皮下接种建立裸鼠肝癌移植瘤模型,采用瘤内单点注射的方法分别给予Ad.GFP、Ad.mda-7和ALLN(毒胡萝卜素,N-Ac-L-L-norleucinal)+Ad.mda-7,观察瘤质量和瘤体积的变化,通过免疫组化和TUNEL法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白caspase-3活化、细胞增殖相关抗原ki-67和微血管密度、细胞凋亡率,并通过Western blotting检测caspase-12、caspase-3和Bax的表达.结果:Ad.mda-7治疗组和Ad.GFP对照组肿瘤体积分别为(312.6±30.2)mm3和(520.6±30.0)mm3(P<0.01),两组的肿瘤质量分别为(0.321±0.031)g和(0.534±0.030)g(P<0.01);Ad.mda-7治疗后瘤细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.01);Ad.mda-7可抑制肝癌组织ki-67表达、微血管密度和促进caspase-3的表达. 经 ALLN 处理的裸鼠,明显抑制Ad.mda-7对肝癌细胞的致凋亡作用(P<0.05),并且下调Ad.mda-7诱导的caspase-12、caspase-3和Bax的表达.结论:Ad.mda-7可显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长和新生血管的形成,并通过内质网应激通路显著诱导肿瘤细胞的凋亡.
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人mda-7/IL-24对淋巴瘤细胞Namalwa的抑制作用
目的: 研究黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7,又称IL-24)对淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的抑制作用.方法:用半定量RT-PCR方法检测 10个造血系统恶性肿瘤细胞系(Namalwa、Raji、K562、NB4、U937、Ramous、CEM、KG1a、HL60、J6-1)中mda-7/ IL-24的表达情况.用RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆mda-7/IL-24编码区,构建真核表达载体pTarget-IL-24.经测序鉴定后,用脂质体法转染Namalwa细胞,筛选稳定表达细胞株.转染细胞经RT-PCR和Western blotting证实mda-7/IL-24的表达.通过MTT法、集落形成试验、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验来评价mda-7/IL-24对肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成、凋亡情况、体内致瘤能力的作用.结果:10个造血系统恶性肿瘤细胞系中未检测到mda-7/IL-24的表达;转染重组质粒pTarget-IL-24的Namalwa细胞在mRNA与蛋白水平都有mda-7/IL-24的表达;稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞增殖活力以及集落形成能力与转染空载体的对照组相比明显下降(P《0.05);但是两者的凋亡率比较无统计学意义.裸鼠体内移植瘤实验结果显示稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞株的致瘤性明显低于转染空载体的对照组(P《0.05).结论: mda-7/IL-24对来源于Burkitt淋巴瘤的Namalwa细胞系具有明显的增殖抑制作用, 为Burkitt淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路.
关键词： 黑素瘤分化相关基因-7 IL-24 淋巴瘤 基因治疗 -
病毒介导lL-24基因对口腔鳞癌耐药细胞株凋亡的影响
目的：研究杂合病毒介导的IL-24基因对口腔鳞状细胞癌耐药细胞的凋亡诱导作用，探讨其治疗耐药口腔癌的可能性。方法：通过MTT细胞活力测定鉴定口腔鳞状细胞癌细胞株KB和其耐药细胞株KBV。利用杂合病毒AdLTR2EF1α搭载EGFP和IL-24转染KB细胞，确定佳转染浓度，荧光倒置显微镜及RT-PCR鉴定EGFP或IL-24基因表达。以人永生化上皮细胞HaCaT细胞作为对照，使用AdLTR2EF1α-IL-24转染KB、KBV及HaCaT细胞后， MMT法检测细胞活力， AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡，透射电镜观察细胞凋亡形态。结果：KBV细胞对长春新碱的耐受性明显高于KB细胞。 AdLTR2EF1α-IL-24搭载的IL-24基因可以在KB及KBV细胞内过表达。 IL-24基因在KB和KBV细胞中的过表达，有明显抑制细胞生长和促凋亡作用，而在HaCaT细胞中没有类似的作用。结论：杂合病毒介导的IL-24对口腔鳞状细胞癌耐药细胞有较强的细胞毒性和诱导凋亡作用，并且对正常组织细胞没有影响。具有治疗耐药口腔癌的潜在价值。
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携带IL-24基因的溶瘤腺病毒诱导黑素瘤细胞凋亡
目的 探讨携带IL-24基因的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)诱导人黑素瘤A375细胞凋亡的作用.方法 用PCR方法 鉴定ZD55-IL-24,并大量扩增、纯化和病毒滴度测定.将ZD55-IL-24感染人黑素瘤A375细胞.结晶紫染色观察细胞毒性,MTT法测定细胞存活率,Western印迹检测溶瘤腺病毒E1A、IL-24基因蛋白表达.结果 PCR鉴定表明ZD55-IL-24包含IL-24基因且没有野生型腺病毒污染;结晶紫染色结果表明ZD55-IL-24对A375细胞有明显的细胞毒性效应.MTT法结果显示,ZD55-IL-24对A375细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性效应.Western印迹结果表明ZD55-IL-24能在A375细胞内高效表达E1A、IL-24基因.结论 溶瘤腺病毒ZD55-IL-24能携带IL-24基因在黑素瘤A375细胞中高效表达,抑制细胞增殖并诱导其凋亡.
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人白介素24(IL-24)的表达与纯化及其初步活性评价
原核表达IL-24蛋白并获取高纯度目的蛋白.选择大肠杆菌作为宿主菌,将已构建的重组表达质粒pET21a(+)/IL-24转化人大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得重组表达IL-24的工程菌.通过对工程菌进行5L发酵罐高密度发酵培养,获取目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定.目的蛋白通过阴、阳离子交换层析联用进行纯化.高密度发酵后单位体积目的蛋白的表达量高达l 800 mg/L.经阴、阳离子交换层析联用纯化后的回收率达20％,纯度达到95％.获得高纯度IL-24,为进一步研究其生物学活性及临床价值奠定了基础.
