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胸腺基质淋巴生成素受体及其抗体在哮喘小鼠气道炎症反应中的作用
目的 探讨胸腺基质淋巴生成素受体(TSLPR)及其抗体在实验性哮喘小鼠气道炎症反应中的作用以及对气道树突状细胞(DCs)成熟和活化的影响.方法 BALB/c小鼠随机分成A、B、C三组.B和C组小鼠腹腔注射卵清白蛋白(OVA)致敏,A组腹腔注射PBS作为正常对照.B和C组小鼠在OVA激发哮喘发作前分别吸入非特异性IgG和TSLPR IgG.采集各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类计数,采用ELISA定量检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ和IL-10浓度.采集各组小鼠肺组织标本进行病理学检查,采用流式细胞术分别检测各组小鼠淋巴结和肺组织中DCs数量和表型.结果 与A组小鼠比较,8和C组小鼠BALF中各种细胞因子水平均明显升高(P<0.01).C组小鼠BALF中IL-4和IL-5水平低于8组(P<0.05,P<0.01),IFN-γ和IL-10水平高于8组(P<0.05,P<0.01).C组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数也明显低于B组(P<0.01).B组小鼠支气管周围有大量炎性细胞浸润以及杯状细胞增生,黏液分泌增强,C组小鼠仅见微弱的炎性细胞浸润和杯状细胞增生.B组小鼠膈淋巴结中DCs数量以及肺组织中DCs的I-Ad、CD40、CD80和CD86表达水平均高于C组小鼠(P<0.05).结论 TSLP/TSLPR具有促哮喘效应并与其调节气道DCs活性的作用密切相关,TSLPR抗体干预可明显减弱TSLP/TSLPR上述作用,故有作为抗哮喘药物的前景.
关键词： 胸腺基质淋巴生成素 胸腺基质淋巴生成素受体 哮喘 树突状细胞 TH1/TH2应答 -
布地奈德对支气管哮喘小鼠树突细胞胸腺基质淋巴生成素受体表达的影响
目的 探讨布地奈德对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠胸腺基质淋巴生成素(TSLP)-树突细胞(DC)途径和Th2极化的影响及其机制.方法 将18只清洁级雌性6～8周龄BALB/c小鼠按随机数字表法分为哮喘组[卵清白蛋白(OVA)腹腔致敏,OVA吸入激发]、布地奈德(BUD)干预组(OVA腹腔致敏,气道内吸入OVA和布地奈德)和对照组(以生理盐水代替OVA混悬液腹腔注射及雾化吸入),每组6只.观察各组小鼠生物学及肺组织病理学改变,收集BALF,并分离培养小鼠脾脏树突细胞,酶联免疫吸附试验( ELISA)检测BALF中TSLP水平、树突细胞上清液中TSLP受体(TSLPR)水平和DC-T细胞共培养上清液中细胞因子.流式细胞仪检测树突细胞表型.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用t检验.结果 布地奈德干预组支气管及血管周围炎症细胞浸润轻于哮喘组.哮喘组BALF中TSLP水平[(44.0±5.1)ng/L]和树突细胞培养上清液中TSLPR水平[(19.7±2.2) ng/L]均高于对照组[分别为(14.2±3.6) ng/L和(10.4±1.2) ng/L,t值分别为11.74和9.13,均P＜0.01],BALF中TSLP水平与IL-5水平和嗜酸粒细胞呈正相关(r值分别为0.89和0.82,均P＜0.05)；布地奈德干预组BALF中TSLP水平[(19.2±5.8) ng/L]及树突细胞表达TSLPR水平[(12.5 ±2.8) ng/L]均低于哮喘组[分别为(44.0±5.1)ng/L和(19.7±2.2)ng/L],差异有统计学意义(t值分别为-7.86和-4.97,均P＜0.01)；布地奈德干预组BALF及DC-T细胞共培养上清液中IL-5[分别为(41±4)ng/L和(28 ±9) ng/L]低于哮喘组[分别为(81 ±8) ng/L和(51±14) ng/L],差异有统计学意义(t值分别为-11.00和-3.35,均P＜0.01),3组间IFN-γ差异无统计学意义(F值分别为0.97和0.82,均P＞0.05)；布地奈德干预组与哮喘组相比CD40、CD80和CD86等树突细胞表型下降.结论 布地奈德影响树突细胞表型,下调BALF中TSLP水平和树突细胞表达TSLPR水平,可能通过影响TSLP-DC途径而抑制哮喘Th2极化反应.
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胸腺基质淋巴生成素与支气管哮喘
胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)是一种新近发现的、与白介素7类似的并与过敏性疾病密切相关的细胞因子,它在特应性皮炎、变应性鼻炎、变应性支气管哮喘(简称哮喘)患者明显表达.研究表明,在变应性哮喘患者中,TSLP活化树突状细胞,进而形成有利于Th2增殖极化的微环境,是导致Th1/Th2比例失衡的重要因素.TSLP可能是哮喘发病机制的免疫学机制中的一个关键因子,从而为哮喘的治疗提供一个潜在的靶点.
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胸腺基质淋巴细胞生成素基因多态性与子痫前期的相关性研究
目的 探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)位点rs1898671、rs2289278,rs2289276及rs764916基因多态性与妊娠妇女子痫前期发生的相关性.方法 收集2012年11月至2013年6月中国医科大学附属盛京医院分娩的孕妇384例.其中病例组181例,对照组203例,病例组又分为子痫前期轻度组(97例)和子痫前期重度组(84例).选取TSLP4个位点(rs1898671,rs2289276,rs2289278 and rs764916),利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术分析该基因的4个位点.结果 各临床资料在病例组与对照组比较中差异均有统计学意义(P＜0.05),子痫前期轻度组与对照组比较中除年龄外其他各临床资料比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),子痫前期重度组与对照组以及子痫前期轻度组比较中各临床资料差异均有统计学意义(P＜0.05).位点rs1898671等位基因频率在病例组与对照组中差异有统计学意义(P=0.043,OR=2.682,95％CI 1.020～ 7.054).结论 TSLP位点rs1898671基因多态性与子痫前期的发病可能具有相关性.等位基因T为子痫前期的危险性等位基因.
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醒鼻凝胶剂治疗儿童变应性鼻炎及对胸腺基质淋巴生成素和白细胞介素4、13的影响
目的 观察中药醒鼻凝胶剂治疗儿童变应性鼻炎及对白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)、胸腺基质淋巴生成素(TSLP)水平的影响,探讨其可能的作用机制.方法 选取2015年6月至2016年10月福建中医药大学附属人民医院儿科门诊收治变应性鼻炎患儿60例为研究对象,随机分为中药治疗组和西药对照组各30例.同期选取健康体检儿童志愿者10例为健康对照组.中药治疗组采用中药醒鼻凝胶剂治疗,西药对照组采用布地奈德鼻喷雾剂进行治疗,2周为1个疗程,连续2个疗程后,检测治疗前后血清IL-4、IL-13、TSLP水平,评估症状总分、视觉模拟量表,观察其临床疗效.结果 治疗4周后,中药治疗组和西药对照组临床总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05).治疗4周后,中药治疗组和西药对照组血清IL-4、IL-13、TSLP水平显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);中药治疗组和西药对照组血清IL-4、IL-13、TSLP水平高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中药治疗组血清IL-4、IL-13水平显著低于西药对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中药治疗组和西药对照组血清TSLP水平比较差异无统计学意义(P>0.05).治疗4周后,中药治疗组症状总分、视觉模拟量表评分均低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);中药治疗组视觉模拟量表评分低于西药对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 中药醒鼻凝胶剂对变应性鼻炎患儿血清IL-4、IL-13及TSLP起下调作用,调节机体免疫平衡机制,以此干预变应性鼻炎,从而改善临床症状.
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小鼠哮喘模型胸腺中胸腺基质淋巴生成素、Foxp3的表达及调节
目的 通过建立小鼠哮喘模型,探讨胸腺在过敏性疾病发病机制中的作用,以及胸腺肽干预哮喘模型的作用和可能的机制.方法 40只小鼠随机分为哮喘模型组、卵清蛋白(OVA)+胸腺肽组、对照组和胸腺肽组,每组各10只.①采用OVA腹腔注射和超声雾化吸入建立BALB/c小鼠哮喘模型;②通过血清总IgE水平和肺组织病理学检查评价哮喘模型;③用Real-time PCR检测哮喘模型和胸腺肽干预下,小鼠肺组织和胸腺中胸腺基质淋巴生成素(TSLP)以及胸腺Foxp3 mRNA表达变化,并通过血清总IgE水平和肺组织病理学评价胸腺肽干预下哮喘模型的过敏状态.结果 ①哮喘模型组与对照组相比,血清总IgE浓度明显增高,肺组织病理学检查示气道炎症明显,胸腺和肺组织TSLP mRNA表达均显著增高,胸腺Foxp3 mRNA表达显著降低;②OVA+胸腺肽组肺组织病理学检查示气道炎症减轻,胸腺TSLP mRNA表达显著低于哮喘模型组.结论 ①OVA哮喘模型胸腺TSLP mRNA的表达水平上调、Foxp3 mRNA的表达水平下调,提示OVA可影响中枢性免疫器官--胸腺;②OVA哮喘模型引起胸腺Foxp3 mRNA表达降低,提示胸腺功能的改变可能与过敏性疾病的发生有关;③胸腺肽可改善过敏状况,其作用机制至少部分是通过胸腺而发挥.
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盐酸氨溴索联合N-乙酰半胱氨酸对慢性阻塞性肺病患者血清胸腺基质淋巴生成素和嗜酸粒细胞阳离子蛋白的影响
目的 考察盐酸氨溴索联合N-乙酰半胱氨酸治疗慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)前后对血清中胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和嗜酸粒细胞阳离子蛋白(eosinophilic cationic protein,ECP)水平的影响.方法 收集2013年10月至2016年10月在南京大学医学院附属南京胸科医院收治且确诊的COPD急性发作期患者106例,经医院伦理委员会批准,并经患者签署知情同意书后,将全部患者随机分为2个组:对照组(51例)和观察组(55例),另外选择同期50例健康体检者为健康对照组.结果 治疗前,对照组和观察组患者的1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)占预计值比例较低(P<0.05),TSLP和ECP水平较高(P<0.05);治疗后,FEV1占预计值百分增高(P<0.05),TSLP和ECP水平减少(P<0.05).与对照组比,观察组的FEV1占预计值百分比明显增高(P<0.05),TSLP和ECP水平明显减少(P<0.05).2组在治疗过程中未发生明显的不良反应.与对照组比,观察组的总有效例数较多(P<0.05).结论 盐酸氨溴索联用N-乙酰半胱氨酸治疗慢性COPD安全有效,可间接降低血清TSLP和ECP水平.
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尘螨变应原rDer p1诱导HaCaT细胞表达胸腺基质淋巴生成素的研究
目的 探讨尘螨变应原rDer p1在体外对角质形成细胞表达胸腺基质淋巴生成素(TSLP)的影响.方法 体外培养人角质形成细胞株HaCaT细胞,予以0.1、1和10 mg/L尘螨变应原rDer p1与蛋白酶活化受体2(PAR2)特异性激动剂SLGIKV(500 μmol/L)和拮抗剂VKGILS(500μmol/L)共培养,以无血清培养基为空白对照.用ELISA法和荧光定量PCR法检测各实验组和对照组TSLP蛋白及mRNA表达水平;通过激光共聚焦显微镜检测细胞内钙流变化分析rDer p1诱导HaCaT细胞产生TSLP和PAR2受体活化的关系.结果 1 mg/L和10 mg/L rDer p1组培养12 h上清中TSLP水平分别为(155.5±5.9) ng/L和(228.8±28.7) ng/L,显著高于空白对照组(54.3±13.9 ng/L,P＜ 0.01),TSLP表达水平随rDer p1浓度增加而升高.SLGIKV组TSLP表达[(166.2±8.8) ng/L]也显著高于空白对照组(P＜0.01).10mg/LrDer p1组和SLGIKV组TSLP mRNA相对表达量在8h高,分别为(3.28±0.27)倍和(2.15±0.26)倍,与4h和24 h相比差异有统计学意义(P＜0.01).SLGIKV可引起HaCaT细胞钙内流增加;10 mg/L rDer p1也可引起HaCaT细胞钙内流增加,经过PAR2受体特异性阻断剂VKGILS(500 μmol/L)处理后再给予rDer p1刺激,细胞内钙内流峰值明显降低.结论 尘螨变应原rDer p1能够通过部分活化HaCaT细胞表面的PAR2受体诱导产生促炎细胞因子TSLP.
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儿茶素抑制NF-κB-TSLP通路缓解过敏性哮喘小鼠炎症反应
目的 探讨儿茶素(catechin)对过敏性哮喘小鼠炎症反应的治疗作用及其机制.方法 采用BALB/c♀小鼠建立鸡卵清蛋白(OVA)致敏和激发的过敏性哮喘模型,给药组分别给予儿茶素(75、150、300 mg·kg-1)干预.记录外周血白细胞分类及计数;HE染色观察肺组织病理学改变;ELISA法检测血清OVA特异性IgE水平及肺组织TSLP、IL-5、IL-13的含量;Western blot检测肺组织NF-κB p65、IκB蛋白表达情况;免疫荧光检测NF-κB p65核转录情况.结果 儿茶素可明显减少外周血白细胞总数,降低血清OVA特异性IgE含量,减少肺组织中TSLP以及Th2型炎症因子IL-5、IL-13的含量,抑制NF-κB p65核转录.结论 儿茶素可有效缓解OVA所致的过敏性哮喘小鼠的Th2型炎症反应,其作用可能是通过调控NF-κB通路,抑制TSLP表达而实现的.
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哮喘患者血清TSLP,ECP的表达水平及临床意义
目的 观察支气管哮喘患者血清中胸腺基质淋巴生成素(TSLP)、嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)的表达水平及其临床意义.方法 选择健康对照组25例、哮喘急性发作组30例及哮喘缓解组25例,分别采集各组患者静脉血,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TSLP,ECP浓度,进行统计学处理并分析相关性.结果 哮喘组血清中TSLP,ECP表达水平明显高于对照组,急性发作期明显高于缓解期(P均＜0.05).且哮喘患者血清TSLP,ECP表达成显著相关(r=0.795,P＜0.01).结论 血清TSLP,ECP表达水平与气道炎症有密切关系,可反映哮喘患者疾病的严重程度,有助于哮喘发病炎症机制的研究.
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胸腺基质淋巴生成素在正常和炎性牙龈组织中的表达
目的:观察胸腺基质淋巴生成素(TSLP)在正常和患牙周炎的牙龈组织中的表达.方法:采用免疫组化和Western blot方法检测20例未经治疗的牙周炎牙龈和8例临床健康牙龈组织中TSLP的表达情况.结果:正常牙龈组织中TSLP在上皮全层均有表达,上皮下结缔组织中仅有散在的弱表达.在炎症牙龈中,TSLP在上皮层强表达,在结缔组织的成纤维细胞,炎性细胞和血管内皮细胞中呈强弱不等的表达;与正常牙龈相比,TSLP蛋白水平显著上调(P<0.05).结论:TSLP在正常和炎性牙龈组织中均表达,但在患牙周炎的炎性牙龈中表达显著增强,可能在牙周炎的炎症免疫破坏过程中发挥一定作用.
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活性维生素D3下调屋尘螨诱导的气道上皮细胞胸腺基质淋巴生成素蛋白释放
目的：探讨屋尘螨（HDM)对气道上皮细胞系（16-HBE）胸腺基质淋巴生成素（TSLP）表达的影响，进一步评价活性维生素D3（1,25VD3）的干预作用。方法四唑盐（MTT）比色法检测不同浓度HDM（200、400、800 U/L）及其联合10-8 mol/L 1,25VD3对16-HBE活力的影响。按下述分组刺激16-HBE，对照组，400 U/L HDM组，10-8 mol/L 1,25VD3组，10-8 mol/L 1,25VD3预处理1 h后400 U/L HDM组，10-8 mol/L 1,25VD3联合400 U/L HDM组，6 h后，实时荧光定量PCR检测细胞TSLPmRNA表达情况；刺激24 h后，ELISA检测细胞培养上清中TSLP的浓度。结果200~800 U/L HDM作用气道上皮细胞后，可以上调16-HBE TSLP的基因和蛋白表达（P<0.05）；10-8 mol/L 1,25VD3预处理后400 U/L HDM组的TSLP蛋白水平较400 U/L HDM组显著下降（P<0.05）；但10-8 mol/L 1,25VD3联合400 U/L HDM组的TSLP蛋白水平较400 U/L HDM组无显著差异（P=0.58）。结论HDM和1,25VD3均可增加16-HBE TSLP的表达和释放。1,25VD3预处理气道上皮细胞可减少屋尘螨诱导的TSLP分泌。
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呼吸道合胞病毒感染诱导人支气管上皮细胞表达胸腺基质淋巴生成素的信号转导机制探讨
目的 探讨哮喘发病过程中呼吸道合胞病毒(RSV)感染通过诱导支气管上皮细胞表达胸腺基质淋巴生成素(TSLP)来加重哮喘症状的具体信号转导机制.方法 构建RSV病毒F蛋白真核表达载体pcDNA3-F,转染体外培养的人气管上皮细胞株CRL-9483,同时转染Smad7表达载体pcDNA3/Smad7或者添加p38、ERK1/2、JNK、JAK/STAT通路选择性阻断剂,24 h后利用RT-PCR观察各组细胞中TSLP mRNA量的改变情况,观察哪些抑制剂可以下调TSLP mRNA水平.对TSLP显著下调的实验组扩大细胞培养规模,提取细胞浆蛋白后,利用Western Blotting在TSLP蛋白水平进行观察.结果 体外培养的CRL-9483细胞在转染空载体pcDNA3情况下基本不表达TSLP蛋白(TSLP/GAPDH PCR产物相对灰度0.10±0.03),F蛋白的转染可以明显促进其mRNA水平的增高(0.42±0.20,P=0.024),这种增高可以部分被p38抑制剂(0.14±0.04)和JNK抑制剂(0.23±0.07)所阻断,与F蛋白转染组相比P值分别为0.036和0.048,而Smad7阻断剂(0.60±0.25)、ERK1/2抑制剂(0.45±0.23)以及JAK/STAT1阻断剂(0.44±0.25)无此阻断作用,与单纯F蛋白转染组相比P＞0.05.利用Western Blotting分析发现与单独RSV病毒F蛋白表达组(TSLP/GAPDH蛋白条带相对灰度8.13±2.20)相比,p38抑制剂(3.67±1.18)和JNK抑制剂(1.48±0.77)也可以导致TSLP蛋白水平的下降.结论 RSV感染可以通过其F蛋白来刺激气道上皮细胞表达TSLP,p38和JNK信号通路参与到该过程中,这可能是RSV感染诱导或加重哮喘气道炎症的一个重要原因.
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高迁移率族蛋白 B1活化 p38 MAPK 对人支气管上皮细胞胸腺基质淋巴生成素表达的影响
目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对人支气管上皮细胞（HBE）胸腺基质淋巴生成素（TSLP）表达的影响及机制。方法应用实时荧光定量PCR和ELISA分别检测HMGB1刺激HBE后TSLP基因表达及蛋白释放水平；用Western blot和ELISA分别检测p38 MAPK抑制剂SB202190干预HBE后磷酸化ATF－2蛋白（ p－ATF－2）表达及TSLP释放水平。结果（1）HMGB1以浓度依赖形式增加HBE TSLP的表达；（2）相对于HMGB12000 ng／mL的干预，SB202190抑制剂可明显减少活化的HBE p－ATF－2蛋白的表达（ P＜0.01）及其TSLP的释放（ P＜0.01）。结论 HMGB1可活化p38 MAPK通路增加HBE TSLP的表达，可能以此参与哮喘的发病过程。
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胸腺基质淋巴生成素及Foxp3＋Tregs在甲状腺乳头状癌中的表达
目的：检测胸腺基质淋巴生成素（TSLP）和Foxp3＋Tregs在甲状腺乳头状癌、正常甲状腺良性病变组织的表达，为进一步探讨TSLP在甲状腺癌诱导Tregs分化中的作用机制奠定基础，以期为临床甲状腺癌的防治措施提供新的思路。方法：选取甲状腺疾病患者的组织标本，包括甲状腺乳头状癌41例，结节性甲状腺肿24例，免疫组化染色法检测各组标本中TSLP及Foxp3＋Tregs的表达，同时分析PTC中TSLP表达与肿瘤局部Tregs表达之间的关系。结果：TSLP及Foxp3＋蛋白在甲状腺癌组织中的表达显著高于甲状腺的良性病变；TSLP表达阳性的患者其肿瘤局部的Foxp3＋蛋白表达明显高于TSLP阴性组。结论：甲状腺良性疾病结节性甲状腺肿组织存有Foxp3＋Tregs的表达，但在甲状腺癌发生时表达明显增强；TSLP蛋白在甲状腺癌组织中表达增加，可能与肿瘤局部Tregs细胞增多有关；TSLP的病理性上调表达可能通过诱导Foxp3＋Tregs的生成而促使甲状腺癌的发生、发展。
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胸腺基质淋巴生成素对树突状细胞的活化作用及其在Th2型炎症中的意义
树突状细胞(dendritic cells, DCs)是体内重要的抗原提呈细胞,其对外源性抗原的高效的加工、处理和提呈是启动T细胞应答的关键步骤;同时DCs又是免疫应答的重要调节者,不同微环境中的DCs受不同因子的作用而发生不同的成熟活化过程,从而诱导机体产生针对该环境所需要的不同的免疫应答.胸腺基质淋巴生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)是一类优先表达于肺、肠、皮肤等上皮细胞的细胞因子,尤其在超敏反应性炎症部位表达极高.TSLP对DCs具有重要调控作用,可促进DCs的活化、成熟,增强其对CD4+T细胞的活化能力,并促使Th0细胞向Th2分化,在特应性皮炎、哮喘等炎症发生中具有重要意义.
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乳腺癌原发灶胸腺基质淋巴细胞生成素表达与预后相关
目的 分析胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达对早期乳腺癌术后患者的预后预测价值,以及与辅助化疗远期疗效的关系.方法 回顾性收集2000-01-01/2002-12-31期间在解放军总医院接受手术的130例Ⅰ-Ⅲ期乳腺癌患者的临床资料及石蜡切片,用免疫组织化学法检测乳腺癌原发灶TSLP的表达.用类流式组织细胞定量分析仪(FACS-like tissue cytometeranalysis system)对免疫组织化学染色切片行计算机全切片扫描,并用HistoQuest软件对肿瘤区域阳性信号进行半定量分析.分析TSLP在乳腺癌原发灶的表达情况与乳腺癌预后的关联性以及与临床病理特征的相关性,还分析了TSLP表达与辅助化疗远期疗效的相关性.结果 在COX多因素生存分析中,间质TSLP阳性细胞百分比是无病生存(DFS)的独立保护性预后因素.在接受过辅助化疗患者的COX多因素分析中,间质TSLP阳性细胞百分比是DFS、总生存(OS)的独立保护性预后因素.在TSLP间质阳性细胞百分比较高(≥39.14％)患者的LOG-RANK单因素生存分析中,接受辅助化疗的患者的OS较无辅助化疗组患者OS显著延长.结论 乳腺癌原发灶间质细胞TSLP表达强度与预后及辅助化疗疗效相关.
