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双抗夹心化学发光免疫分析定量检测Ⅳ型胶原方法的建立
目的 建立基于双抗夹心微孔板化学发光酶免疫分析的人血清Ⅳ型胶原定量检测方法.方法 应用Ⅳ型胶原多抗进行包被,辣根过氧化物酶标记Ⅳ型胶原单抗,以鲁米诺化学发光体系检测,调整优化各种反应液的工作浓度和各类反应条件后建立双抗体夹心的检测方法;评价所建立方法的线性范围、特异性、灵敏度、稳定性等性能指标;应用肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验.结果 所建立方法的灵敏度为15.5 ng/ml,线性范围25 ～ 850 ng/ml,批内、批间变异均小于8％.检测Ⅳ型胶原的临床高、中、低值血清回收率分别为98.5％、94.3％和102.6％;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察,线性相关系数均＞0.99,标准偏差＜7％;比对实验分析显示与进口试剂相关性具有统计学意义.结论 成功建立了定量Ⅳ型胶原化学发光酶免疫分析方法,该方法有较好的准确性、灵敏度、重复性,与进口试剂检测结果等效.
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基质效应对荧光偏振免疫测定技术和酶放大免疫测定方法检测环孢素A结果的影响
目的 通过荧光偏振免疫测定(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)和酶放大免疫测定技术(enzyme-multiplied immunoassay technique,EMIT)测定环孢素A(cyciosporine,CsA),了解基质效应对检测结果的影响,解释在CsA室问质评结果中两方法的检测结果的差别,并找到纠正方法.方法 选择不同浓度的临床全血标本100份,用FPIA和EMIT技术进行检测,对比检测结果;通过添加Cu2+,zn2+评估离子残留对免疫反应的影响;用添加等体积血红蛋白富集液后再次抽提的方法,评价非全血基质对质控品和CsA标准品抽提率的影响.结果 检测临床全血标本FPIA(X)和EMIT(Y)检测结果具有良好的相关性(Y=0.926 8X-8.115,R2=0.996 9);金属离子残留对FPIA法和EMIT法均不产生下扰(P>0.05);非全血基质样本会降低两方法的抽提率;样本中血红蛋白含量≥30 g/L就可纠正非全血基质对抽提率的影响.结论 下发质控品的非全血基质是导致CsA室间质评结果中两系统的检测结果不一致的主要原因,可通过添加血红蛋白富集液进行纠正;遇器官移植受者有极低血红蛋白(<30 g/L)时,要允分考虑低血红蛋白对CsA检测结果的影响.
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异柠檬酸脱氢酶检测方法学研究
异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,ICD或ICDH)是一类小分子蛋白,是人体内具有重要脱羧作用的氧化还原酶,它主要分布于肝脏、心肌、骨骼肌和肾脏等组织,在肝细胞内存在于线粒体和胞浆中,因此肝病时有较明显升高.目前,测定ICD检测方法有手工比色法、固定时间比色法、连续监测比色法、分光比色法等.本研究利用酶学理论,结合全自动生化仪特点,采用终点法对ICD进行测定,结果报告如下.
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流感病毒的病原学快速诊断
流感病毒可引起世界性的大流行,严重威胁着人类的健康.因此,建立一套早期、快速的检测方法就能进行有效的治疗.目前流感病毒的快速诊断主要包括病毒抗原检测、特异性基因片段检测及神经氨酸酶检测.本文从上述三个方面进行综述.
