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人S100A8和S100A9原核载体的构建、鉴定及蛋白纯化
目的 分别构建人S100A8(hS100A8)和S100A9(hS100A9)的PET-28a原核表达载体,并纯化hS100A8和hS100A9蛋白,为进一步研究hS100A8和hS100A9蛋白的分子生物学功能奠定实验基础.方法 用带酶切位点的引物从hS100A8和hS100A9的真核表达载体扩增hS100A8和hS100A9基因片段,用相同的限制性内切酶双酶切PCR产物和pET-28a质粒.将两者用T4连接酶连接后转化入感受态细胞DH5α,提取质粒进行鉴定.将构建成功的pET28a-hS100A8和pET28a-hS100A9分别转化感受态细胞BL21,诱导蛋白表达,将等量纯化蛋白在一定钙离子浓度下室温孵育30 min,通过SDS-PAGE和Western blot验证异源二聚体是否形成.结果 正确扩增出hS100A8和hS100A9基因,重组质粒pET28a-hS100A8和pET28a-hS100A9构建成功,纯化后在室温孵育后可形成异源二聚体.结论 hS100A8和hS100A9蛋白可以在体外形成异源二聚体,为探讨其生物学作用奠定理论基础.
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人重组S100A8对牙周膜细胞增殖和迁移活性的影响
目的:观察人钙结合蛋白轻亚基S100A8对牙周膜细胞增殖和迁移活性的影响,探讨S100A8在牙周炎发生及发展中的作用.方法:体外培养人牙周膜原代细胞,给予人重组S100A8处理,MTT检测细胞增殖活性的改变,Annexin-V/PI染色后流式细胞检测技术观察细胞的凋亡状况,Transwell小室及划痕实验检测细胞迁移能力的改变.结果:10-7～10-5mol/L人重组S100A8抑制牙周膜细胞增殖,而10-9～10-7mol/L S100A8促进牙周膜细胞迁移,其中10-5 mol/L S100A8作用牙周膜细胞48 h后可以显著抑制其增殖并诱导其凋亡,而10-9 mol/L S100A8却显著促进牙周膜细胞的迁移.结论:高浓度S100A8抑制牙周膜细胞增殖且促进其凋亡,而牙周治疗后低浓度的S100A8可以促进牙周膜细胞迁移,有助于疾病后期组织的修复.
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人重组S100A8蛋白适配体的筛选和结构分析
目的:筛选人重组S100A8蛋白特异性的适配体.方法:采用配体指数级富集系统进化(systematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)技术,以人重组S100A8蛋白为靶蛋白,以微孔板为筛选介质,从体外合成的随机单链DNA文库中筛选其适配体.利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮单链DNA文库与靶蛋白的亲和力直至亲和力的上升趋于饱和,将后一轮筛选产物克隆测序,并进行生物信息学分析.结果:经过11轮筛选,单链DNA文库与人重组S100A8蛋白的亲和力趋向稳定,将第11轮筛选产物克隆测序,对获得的30个适配体进行分析.一级结构分析显示30个适配体并无共同的保守序列,但有3对适配体序列完全一致.二级结构预测分析表明,茎环和口袋结构为主要的结构形式,提示其可能是适配体与人重组S100A8蛋白特异性结合的基础.根据茎环和口袋的相对比例可将30个适配体分为4组,其中第1组中35号适配体与人重组S100A8蛋白亲和力高.结论:获得了与人重组S100A8蛋白特异性结合的适配体群,为后续适配体的应用研究以及S100A8蛋白功能的研究奠定了基础.
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S100A6、Notch1在多发性骨髓瘤患者中的表达及其临床意义
目的 探讨S 100A6、Notch1在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达及其临床意义.方法 以28例MM患者为研究对象,以20例白细胞、血小板略低但骨髓检查未见异常者为对照,采用real time PCR法检测骨髓单个核细胞S100A6、Notch1的表达;采用免疫组化染色法检测S100A6、No.hi蛋白在MM患者骨髓和髓外浸润组织活检病理切片中的表达;采用real time PCR法和Western blot法检测siRNA沉默骨髓瘤U266细胞S100A6基因后对Notch1 mRNA和蛋白水平的影响.并结合临床进行相关分析.结果 ①S 100A6、Notch1 mRNA表达水平:初发MM患者组分别为2.19±1.25、2.98±0.64,均高于对照组(0.71±0.20、0.58±0.39)和稳定期患者组(0.85±0.26、0.72±0.40)(P值均＜0.05);伴髓外转移组(8例)分别为3.36±1.23、5.71±3.96,均高于无髓外转移组(20例)(1.40±0.25、1.16±1.oo).②S100A6与Notch1 mRNA表达呈正相关(r=0.505,P=0.007).③MM患者骨髓和髓外浸润组织活检病理切片均可见浆细胞S 100A6、Notch1阳性表达.④siRNA转染U266细胞48 h后S100A6基因表达沉默,Notch1 mRNA及蛋白水平明显下降.结论 S100A6、Notch1表达与MM疾病发生、进展、髓外转移相关,二者具有显著相关性,可作为MM诊断及预后的指标.
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S100A8、S100A9在卵巢癌中的研究进展
由位于表皮分化簇基因编码的S100蛋白属小分子钙结合蛋白，是正常表皮分化所必需的，表达具有种属特异性，只在脊椎动物中表达。S100A8、S100A9为S100蛋白家族成员，两者在体内可形成二聚体或异二聚体发挥作用，参与多种细胞功能调节。S100A8和S100A9可诱导白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-17、IL-6等多种炎症因子的表达，与炎症的发生、发展密切相关。另外，S100A8和S100A9可通过Wnt信号通路、晚期糖基化终产物受体（RAGE）和Akt1/Smad5-ID3-p21信号通路，影响细胞的增殖、凋亡和侵袭迁移能力，在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用，并通过活化细胞外调节蛋白1/2（ERK1/2）和p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K），在肿瘤耐药中也发挥着不容忽视的作用。对S100A8、S100A9及其在卵巢癌中的研究进展进行综述。
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心肺复苏后脑损伤评价指标的研究进展
心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)成功的患者往往由于缺血缺氧及再灌注性脑损伤,终幸存者仅占极少数.即使幸存,多数患者仍存在语言、知觉、运动等方面不同程度的脑神经功能缺陷,部分甚至成为植物状态或死亡.因此,快速、准确地判断CPR后的脑损伤程度,对评估患者的脑功能状态及推测预后有十分重要的意义.近年来,随着医学生物科学技术的不断发展,辅助检查手段也日趋多样化.现就目前常用的评价脑损伤程度的指标进行综述,旨在为科学研究和临床工作者提供参考.
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S100A8和S100A9在皮肤病的研究进展
S100A8和S100A9是S100蛋白家族中重要的成员,早期研究认为,S100A8和S100A9参与炎症反应,与机体固有免疫相关,并在调节肿瘤细胞的形成、浸润和转化中起着关键性的作用.然而,近年来研究表明,当机体处于某些特殊条件如伤口愈合、紫外线照射时,上皮细胞也分泌S100A8和S100A9,特别是在一些皮肤病中,这两种蛋白表达都有所上调.随着对S100A8和S100A9与皮肤病关系的进一步研究,可找到对这些疾病新的诊断和治疗方法.
