首页 > 文献资料
-
人S100A8和S100A9原核载体的构建、鉴定及蛋白纯化
目的 分别构建人S100A8(hS100A8)和S100A9(hS100A9)的PET-28a原核表达载体,并纯化hS100A8和hS100A9蛋白,为进一步研究hS100A8和hS100A9蛋白的分子生物学功能奠定实验基础.方法 用带酶切位点的引物从hS100A8和hS100A9的真核表达载体扩增hS100A8和hS100A9基因片段,用相同的限制性内切酶双酶切PCR产物和pET-28a质粒.将两者用T4连接酶连接后转化入感受态细胞DH5α,提取质粒进行鉴定.将构建成功的pET28a-hS100A8和pET28a-hS100A9分别转化感受态细胞BL21,诱导蛋白表达,将等量纯化蛋白在一定钙离子浓度下室温孵育30 min,通过SDS-PAGE和Western blot验证异源二聚体是否形成.结果 正确扩增出hS100A8和hS100A9基因,重组质粒pET28a-hS100A8和pET28a-hS100A9构建成功,纯化后在室温孵育后可形成异源二聚体.结论 hS100A8和hS100A9蛋白可以在体外形成异源二聚体,为探讨其生物学作用奠定理论基础.
-
S100A8、S100A9在卵巢癌中的研究进展
由位于表皮分化簇基因编码的S100蛋白属小分子钙结合蛋白，是正常表皮分化所必需的，表达具有种属特异性，只在脊椎动物中表达。S100A8、S100A9为S100蛋白家族成员，两者在体内可形成二聚体或异二聚体发挥作用，参与多种细胞功能调节。S100A8和S100A9可诱导白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-17、IL-6等多种炎症因子的表达，与炎症的发生、发展密切相关。另外，S100A8和S100A9可通过Wnt信号通路、晚期糖基化终产物受体（RAGE）和Akt1/Smad5-ID3-p21信号通路，影响细胞的增殖、凋亡和侵袭迁移能力，在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用，并通过活化细胞外调节蛋白1/2（ERK1/2）和p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K），在肿瘤耐药中也发挥着不容忽视的作用。对S100A8、S100A9及其在卵巢癌中的研究进展进行综述。
-
EGFRvⅢ与S100A9在人脑胶质瘤中的表达、相关性及其与预后的关系
目的:探讨表皮生长因子受体变异体Ⅲ (epidermal growth factor receptor variant Ⅲ,EGFRv Ⅲ)和S100钙结合蛋白A9 (S100 calcium binding protein A9,S100A9)在人脑胶质瘤组织中的表达水平及其相关性,以及2种蛋白表达与胶质瘤预后的关系.方法:收集重庆医科大学第二附属医院2008年1月-2015年4月收治的110例经病理确诊的新发胶质瘤标本及其临床资料.同时,收集10例非肿瘤脑组织作为对照.采用免疫组织化学法检测胶质瘤标本和对照脑组织中EGFRv Ⅲ和S100A9蛋白的表达水平,运用Spearman等级相关分析法分析蛋白表达与胶质瘤患者临床病理因素的相关性.随访其中75例胶质瘤患者,实访67例,采用Kaplan-Meier法对随访资料进行生存分析.结果:低级别胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级)中EGFRv Ⅲ的中高表达率为20.00％,而高级别胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ级)中EGFRv Ⅲ的中高表达率为38.00％,两者差异有统计学意义(P＜0.001);低级别胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级)中S100A9的高表达率也明显低于高级别胶质瘤(Ⅲ～Ⅳ级)中S100A9的高表达率(11.67％ vs 66.00％,P＜0.001).EGFRvⅢ和S100A9蛋白表达水平之间呈明显的正相关性(rs=0.785,P＜0.001).Kaplan-Meier生存分析表明,EGFRvⅢ和S100A9蛋白均表达阳性的胶质瘤患者的预后较差(P=0.002).结论:EGFRv Ⅲ和S100A9蛋白均随着胶质瘤恶性等级升高而表达增强.联合检测EGFRvⅢ和S100A9蛋白水平可以有效判断胶质瘤患者的恶性程度及预后,有助于为胶质瘤患者制定个体化的治疗方案.
-
S100A8和S100A9在皮肤病的研究进展
S100A8和S100A9是S100蛋白家族中重要的成员,早期研究认为,S100A8和S100A9参与炎症反应,与机体固有免疫相关,并在调节肿瘤细胞的形成、浸润和转化中起着关键性的作用.然而,近年来研究表明,当机体处于某些特殊条件如伤口愈合、紫外线照射时,上皮细胞也分泌S100A8和S100A9,特别是在一些皮肤病中,这两种蛋白表达都有所上调.随着对S100A8和S100A9与皮肤病关系的进一步研究,可找到对这些疾病新的诊断和治疗方法.
-
人S100A9重组腺病毒载体的构建和鉴定
目的 制备人S100A9(hS100A9)重组腺病毒载体,为进一步研究人S100A9蛋白的分子生物学作用奠定基础.方法 从pHAHA-hS100A9中PCR扩增hS100A9片段,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-TOX,获得重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9.酶切、聚合酶链反应(PCR)及测序鉴定正确后经PmeⅠ酶切电转入AdEasier感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdhS100A9,该质粒经PacⅠ酶切后由脂质体转染至HEK293细胞中包装扩增重组腺病毒并进行滴度测定,后通过PCR及蛋白印迹法(Western blot)鉴定重组腺病毒.结果 正确扩增出hS100A9基因;重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9均及重组腺病毒质粒pAdhS100A9构建成功,并在HEK293细胞中成功包装且扩增后滴度为1 010 IU/mL;重组腺病毒AdhS100A9在HEK293细胞中成功转录和表达.结论 用pAdEasy系统成功构建hS100A9重组腺病毒载体,为探讨其生物学作用奠定了基础.
