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蜱IgG结合蛋白的昆虫细胞表达及结合IgG特性分析
蜱吸食宿主大量血液,其中宿主血液中IgG分子能穿过蜱肠道,进入血淋巴,且能保持其活性.为逃避宿主免疫攻击,蜱唾液腺分泌一种免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin G binding protein,IGBP),与蜱体内的宿主IgG结合,抑制宿主IgG对蜱的损害,是蜱唾液腺重要的功能分子,也是抗蜱疫苗候选分子.镰形扇头蜱是我国南方的优势蜱种,其唾液腺免疫球蛋白结合蛋白(RH-IGBP)被鉴定为抗蜱免疫保护性抗原,为进一步了解其生物学功能,本研究应用杆状病毒表达系统,构建出重组杆粒Bacmid-IGBP,并在昆虫细胞中表达出真核重组蛋白RH-IGBP,经免疫荧光实验鉴定和Western blot分析,重组蛋白大小为23kDa,与预期一致.重组蛋白经纯化,利用ELISA方法,研究重组蛋白与不同哺乳动物宿主(兔、猪、牛羊、鼠、犬)和人的IgG结合能力,发现RH-IGBP与不同宿主IgG结合能力不同,与兔、猪的IgG有明显结合能力.对来自兔源IgG不同酶切片段F(ab′)2 和Fc与RH-IGBP结合特性分析表明,蜱IgG结合蛋白主要识别部位是IgG的F(ab′)2片段.这些结果初步揭示了蜱IgG结合蛋白的作用机制和特点.
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姜黄素对癫痫持续状态后海马内质网应激相关分子表达的影响
目的 探讨姜黄素对癫痫持续状态(SE)后海马内质网应激(ERS)标志分子免疫球蛋白结合蛋白(BiP)和ERS相关促凋亡分子如生长停滞、DNA损害可诱导基因153(GADD153)表达的影响.方法 将90只SD大鼠随机分入SE组、姜黄素组和对照组.建立氯化锂-匹罗卡品大鼠SE模型.应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)动态观察SE后海马BiP和GADD153的转录状况.结果 (1) 与对照组相比,SE组SE后2、4、6、24 h BiP mRNA表达升高(P＜0.01),6 h达高峰,24 h开始下降(P＜0.01),72 h恢复至正常水平;姜黄素组BiP mRNA表达的动态变化同SE组类似,但显著低于SE组(P＜0.05或0.01).(2) 与对照组比,SE组SE后2、4、6、24、72 h GADD153 mRNA显著上调(P＜0.01),SE后2 h达高峰, 24 h开始下降(P＜0.01).姜黄素组仅于SE后2、4 h GADD153 mRNA表达明显高于对照组(P＜0.01),且较SE组低(P＜0.01).结论 姜黄素有可能成为在体抑制ERS的有效药物;减轻ERS、抑制GADD153表达可能是姜黄素在SE后发挥神经元保护作用的重要机制.
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细菌免疫球蛋白结合分子特性及应用的研究进展
免疫球蛋白结合蛋白[Immunoglobulin(Ig)-binding protein,IBP]是多种病原体产生的以非抗原形式与免疫球蛋白结合的蛋白,在病原体致病中发挥重要作用.这些蛋白各自具有独特的结构特征及结合特性,赋予其抗体纯化、抗体检测和抗体吸附的应用潜能,已广泛应用于科研、病原体感染抗体特异诊断、抗体药物纯化及临床免疫吸附治疗.应用重组技术所构建的融合IBP较好地保留了母体分子的结合特性,并很好地弥补了各自对不同IgG结合的不足,显著提升了在抗体纯化和免疫沉淀方面的应用优势.应用分子进化技术所获得的由不同IBP单结合结构域组合而成的新型进化免疫球蛋白结合分子(novel evolved immunoglobulin-binding molecule,NEIBM),具有母体IBP所没有的新的Ig结合模式,其中对Ig Fab κ轻链和VH3重链的双位点协同结合大大提高了与IgM的结合能力,并显示出在病原体特异性抗体检测中的应用优势.本文对主要的天然IBP、重组IBP和NEIBM的结构特征、结合特性及其应用作一综述.
关键词： 细菌 免疫球蛋白结合蛋白 新型进化免疫球蛋白结合分子 -
免疫球蛋白结合蛋白在氟中毒大鼠骨组织中的表达研究
目的 观察内质网应激标志性分子免疫球蛋白结合蛋白(BiP)在氟中毒大鼠股骨组织的表达，探讨内质网应激在氟骨症发病机制中的可能作用。方法 60只Wistar大鼠，按体质量随机分成4组，每组15只。对照组饲以常规饲料（含钙量为0.79％），低钙组饲以自制低钙饲料（含钙量为0.063％），饮用自来水(氟化钠水平＜1 mg/L);高氟组和低钙高氟组分别饲以常规饲料、自制低钙饲料，饮用自来水中加氟(氟化钠水平为221 mg/L)。实验期间动物自由进食、进水，每周测体质量1次。实验周期为12周。通过免疫组化和RT-PCR技术分析BiP在股骨组织中基因和蛋白水平的表达变化。结果 高氟组、低钙组、低钙高氟组大鼠股骨矿物质水平[(0.131±0019)、(0.097±0.011)、(0.083±0.007) g/cm]均低于对照组[(0.159±0.029)g/cm，P均＜0.05]；低钙组、低钙高氟组的骨密度[(0.243±0.018)、(0.223±0.022)g/cm2]均低于对照组[(0.296±0.046)g/cm2，P 均＜0.05]。免疫组化技术检测到低钙组和低钙高氟两组大鼠股骨内抗BiP阳性染色的成骨细胞较对照组显著增加，而且低钙高氟组明显比低钙组的阳性成骨细胞多。RT-PCR分析显示出低钙加氟组大鼠骨组织的骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平(1.36±0.20、1.31±0.11)高于对照组(0.82±0.16、0.85±0.15，P均＜ 0.05)；与加氟组(0.97±0.29)比较，低钙加氟组(1.36±0.20)大鼠骨组织的OPN表达明显提高(P＜0.05)；低钙组和低钙高氟组BiP基因表达(1.38±0.24、1.35±0.12)高于对照组（1.14±0.06.P均＜0.05）。结论 投氟或联合低钙饮食刺激了大鼠股骨BiP基因和蛋白的表达，说明高氟或低钙高氟条件下大鼠骨组织出现不同程度的内质网应激。
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枯草芽孢杆菌芽孢佐剂免疫途径及效果的动物实验观察
目的 探讨以表面展示免疫球蛋白结合蛋白功能域(FDIBP)的枯草芽孢杆菌芽孢制备的黏膜佐剂不同途径免疫的应用效果.方法 分别将表面展示FDIBP的重组枯草芽孢杆菌芽孢及大肠杆菌不耐热毒素(LT)与人IgG(hIgG)作为佐剂共孵育制备疫苗,通过灌胃、滴鼻途径免疫BALB/c小鼠,5周后收集外周血、肺泡、小肠及阴道冲洗液.采用ELISA方法检测血清中IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ抗hIgG特异性IgG抗体,同时检测血清及肺泡、小肠、阴道冲洗液中抗hIgG特异性IgA抗体水平.结果 与无佐剂免疫者比较,枯草芽孢杆菌芽孢佐剂滴鼻能有效提高小鼠体液免疫产生的抗原特异性抗体IgA及IgG水平(P＜0.01),但未能有效刺激细胞免疫上调血清IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ水平;通过灌胃途径免疫者上述特异性抗体及细胞因子水平均无显著变化(P均＞0.05).结论 展示FDIBP的枯草芽孢杆菌芽孢可用作滴鼻途径黏膜疫苗佐剂,能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应.
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通用黏膜免疫佐剂的制备
目的 采用同源重组技术制备通用黏膜佐剂.方法 将枯草芽胞杆菌CotB基因与融合基因AB连接后插入整合质粒pDG1662得到重组质粒pDG1662-CotB-AB,电转化法将线性化重组质粒转化枯草芽胞杆菌1A771,抗生素抗性筛选,PCR、免疫荧光法鉴定免疫球蛋白结合蛋白基因重组及蛋白表达情况.结果 AB基因成功重组入枯草芽胞杆菌基因组中,免疫球蛋白结合蛋白在芽胞表面得到了有效表达,并具有结合免疫球蛋白的生物活性.结论 本研究成功制备了黏膜免疫佐剂.
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Bip反义寡核苷酸对热应激脾脏巨噬细胞功能的影响
目的 探讨Bip反义寡核苷酸(Bip AS-ODN)对体外轻度热应激脾脏巨噬细胞功能的影响.方法 设计特异性Bip AS-ODN,经脂质体包裹后转染至小鼠脾脏巨噬细胞,观察Bip AS-ODN对轻度热应激后脾脏巨噬细胞功能的影响.结果 轻度热应激60 min后,脾脏巨噬细胞吞噬功能及趋化、杀伤活性增强, Bip mRNA表达明显上调;Bip AS-ODN转染脾脏巨噬细胞后,与未转染细胞比较,热应激后Bip mRNA 表达明显减少,巨噬细胞吞噬功能及趋化、杀伤活性明显回落(P＜0.01).结论 Bip对热应激脾脏巨噬细胞功能起调节作用.
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X盒结合蛋白1、免疫球蛋白结合蛋白在肝癌组织中的表达及意义
目的 检测X盒结合蛋白1( XBP1)、免疫球蛋白结合蛋白(Bip)在肝癌组织中的表达,探讨其在肝癌生长中的作用机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测术中所取的42例肝癌标本、15例同个体癌旁1.0 cm肝组织和15例正常肝组织中XBP1、Bip的mRNA表达.应用Western blot法验证57例肝癌组织和正常肝组织标本中XBP1、Bip在蛋白水平的表达.结果 肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中XBP1 mRNA相对表达量分别为0.4396±0.0241、0.4152±0.0252、0.4095±0.0149,XBP1 mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05)；肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中Bip mRNA相对表达量分别为0.4772±0.0401、0.4332±0.0488、0.4301±0.0398,Bip mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05).实验对肝癌组织和正常肝组织中XBP1和Bip的蛋白表达进行了定性验证:在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达,但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织.结论 在肝癌的生长过程中存在未折叠蛋白反应(UPR)的激活.在肝癌组织中XBP1、Bip mRNA和蛋白的表达一致,均呈高表达.这些基因和蛋白表达的改变可能与肝癌的发生、生长及转移密切相关.
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免疫球蛋白结合蛋白在肝癌中的表达及其意义
目的 检测免疫球蛋白结合蛋白(Bip)在肝癌组织中的表达,探讨肝癌发生发展过程中存在未折叠蛋白反应(UPR)的激活.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测新鲜的42例肝癌标本、15例同个体癌旁1.0 cm肝组织和15例正常肝组织中Bip的mRNA表达,应用Westernblot方法验证57例肝癌组织和正常肝组织标本中Bip在蛋白水平的表达.结果 肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中Bip mRNA相对表达量分别为0.4772±0.0401、0.4332±0.0488、0.4301±0.0398,Bip mRNA在3组之间的表达呈下降趋势(P＜0.05);在肝癌组织和正常肝组织中均有Bip蛋白的表达,但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织.结论 在肝癌的生长过程中存在未折叠蛋白反应的激活.肝癌组织中Bip mRNA和蛋白的表达一致,均高表达.在肝癌的发生过程中,未折叠蛋白反应具有重要作用.
关键词： 肝癌 肝组织 免疫球蛋白结合蛋白 RT-PCR Western blot -
BiP、CHOP和p-JNK在多囊卵巢综合征患者血白细胞中的表达
目的:探讨内质网应激(ERS)标志性蛋白中免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及磷酸化-氨基末端激酶(p-JNK)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者血白细胞中的表达.方法:选择PCOS不孕就诊的患者44例(PCOS组)和因男方因素或输卵管因素不孕就诊的患者50例(对照组)为研究对象.PCOS组根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为胰岛素抵抗组(22例)与非胰岛素抵抗组(22例).应用RT-PCR和Western Blotting方法检测患者血白细胞中BiP、CHOP、JNK、磷酸化-氨基末端激酶(p-JNK)的表达水平.结果:PCOS组BiP mRNA水平(1.67±1.02)及蛋白水平(0.76 ±0.12)均明显高于对照组(分别为1.04±0.54、0.65±0.09),差异有统计学意义(P＜0.05).PCOS组CHOP mRNA水平(0.79 ±0.49)及蛋白水平(0.75 ±0.30)均较对照组(分别为0.63±0.47、0.71 ±0.25)有增高趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).PCOS组JNK蛋白水平与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).PCOS组p-JNK蛋白水平(0.87 ±0.17)明显高于对照组(0.71±0.09),差异有统计学意义(P＜0.05).PCOS患者中胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组的BiP、CHOP mRNA水平及蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:PCOS患者血白细胞中ERS标志性蛋白BiP、p-JNK的表达异常,提示ERS可能通过活化JNK信号通路参与PCOS的发病.
