环磷酰胺下调大鼠睾丸OCT-4和GDNF表达

目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子OCT-4和GDNF表达的影响.方法 12只8周龄大鼠随机分为对照组和实验组,每组6只；实验组每天腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg,连续3d,用药4周后PAS染色法观察大鼠睾丸组织学变化,精原细胞,生精小管直径和附睾尾部精子数量.免疫组织化学法检测精原干细胞相关分子OCT-4和GDNF表达水平.结果 与对照组比较,实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻,睾丸组织学无明显改变,附睾精子活动度降低,附睾精子和精原细胞数量减少.实验组GDNF表达明显减少,而OCT-4表达水平无明显变化.结论 环磷酰胺短期用药可造成精子发生的损害,其中精原细胞的减少可能与损害后GDNF表达下调有关.

双氢睾酮调节原代培养大鼠Sertoli细胞GDNF的表达

目的 观察双氢睾酮对原代培养大鼠Sertoli细胞GDNF及相关细胞信号通路关键蛋白的表达,探讨Sertoli细胞GDNF表达调控的机制.方法 原代培养出生后20 d大鼠Sertoli细胞,给予双氢睾酮干预,免疫荧光检测GDNF在细胞中定位和表达强度,Westem blot检测GDNF,ERK和CREB蛋白的表达及磷酸化情况,并用ERK和cAMP/PKA信号通路抑制剂干预.结果 GDNF表达在Sertoli细胞质中,双氢睾酮干预可增加GDNF的表达(P＜0.05),并使ERK和CREB磷酸化水平增高(P＜0.05),使用ERK和cAMP/PKA信号通路抑制剂可减低双氢睾酮诱导的GDNF表达(P＜0.05).结论 双氢睾酮通过激活ERK信号通路诱导Sertoli细胞GDNF的表达.

脉冲射频对CCI大鼠坐骨神经组织学及脊髓GDNF表达的影响

目的:观察脉冲射频(pulsed radiofrequency,PRF)作用于慢性坐骨神经缩窄模型(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经干结扎部位后大鼠疼痛行为学、坐骨神经组织学变化,检测脊髓L4～6节段胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)表达变化.方法:36只SD大鼠随机等分为3组:Sham-Sham(SS)、CCI-Sham(CS)、CCI-PRF(CP).结扎CS、CP组大鼠右侧坐骨神经干,制作CCI模型;SS组仅分离坐骨神经不结扎.术后第14天,将PRF作用于CP组大鼠坐骨神经干结扎处;SS、CS组仅放置电极针不通电.不同时间点观察3组大鼠的疼痛行为学变化.治疗后14天酶联免疫吸附法检测大鼠脊髓L4～6节段GDNF表达水平,光镜下观察大鼠坐骨神经组织学变化.结果:造模后CS、CP组大鼠结扎侧机械、热痛阈均较SS组明显降低,PRF治疗后14天CP组大鼠痛阈较CS组明显升高;光镜下CP组较CS组神经轴索数量、轴索直径、髓鞘厚度明显增加;CP组大鼠与CS、SS组大鼠相比较L4～6节段脊髓中GDNF表达明显升高.结论:PRF可能通过上调脊髓中GDNF的表达促进受损神经的修复,缓解CCI大鼠的神经病理性疼痛.

酪氨酸激酶受体和神经细胞黏附分子对老年大鼠黑质致密部多巴胺能神经细胞的影响

胶质细胞系源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)能有效地保护中脑黑质多巴胺能神经细胞[1],是迄今所发现的对多巴胺能神经细胞作用强的神经营养因子.

不同时间修复周围神经损伤后给予GDNF治疗作用的比较

目的：观察应用胶质细胞源性神经生长因子（ GDNF）在不同时间修复大鼠周围神经损伤的结果。方法：在损伤大鼠周围神经后不同时间段予以修复，同时给予GDNF注射治疗，通过免疫组织化学检测、苏木素-伊红（ HE）染色、轴突计数、石蜡切片图像分析等方法观察治疗效果，寻找佳治疗时机和治疗剂量。结果：免疫组化、HE染色等结果显示，相对手术组各组均有不同程度的改善，其中5天修复组治疗效果佳。结论：GDNF对于周围神经损伤有较好的治疗作用，佳的治疗时机是在损伤后第五天。

Recently, we have demonstrated the ability of naringin, a well-known flavanone glycoside of grapefruits and citrus fruits, to prevent neurodegeneration in a neurotoxin model of Parkinson’s disease. Intraperitoneal injection of naringin protected the nigrostriatal dopaminergic projection by increasing glial cell line-derived neurotrophic factor expression and decreasing the level of tumor necrosis factor-alpha in dopaminergic neurons and microglia, respectively. These results suggest that naringin can impart to the adult dopaminergic neurons the ability to produce glial cell line-derived neurotrophic factor against Parkinson’s disease with anti-inlfammatory effects. Based on these results, we would like to describe an important perspective on its possibility as a therapeutic agent for Parkinson’s disease.

磷酸化蛋白质组学揭示小热休克蛋白27是胶质细胞源性神经营养因子引起神经突触生长的新信号分子

胶质细胞源性神经营养因子(GNDF)是胶质细胞分泌的一种神经营养因子,是胶质细胞对神经元发挥保护作用主要的途径.GNDF对多巴胺能神经元的保护及促生长作用明显,是神经保护治疗帕金森病(PD)首选神经营养因子.而对GDNF信号转导的机制尚不清楚,因此,我们用蛋白质组学的方法寻找参与GDNF信号转导通路的可能信号分子.

人GDNF基因的克隆

目的:克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因.方法:从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增出了一段约558bp的cDNA片段,将这一片段克隆于pUC18载体中,进行全序列分析.结果:证实该研究所克隆的cDNA是编码正确的人GDNF基因.与发表于GeneBank上的序列相比,发现该研究克隆的基因有一段78bp的核苷酸序列缺失,但不影响密码子的阅读框.结论:克隆到了编码正确的人GDNF的cDNA全序列,对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义.

预处理星形胶质细胞GDNF神经元保护机制研究

目的 观察星形胶质细胞预处理后分泌的GDNF对神经元的保护作用.方法 将星形胶质细胞正常培养基及预处理+缺氧后培养基制备成ACM1、ACM2,将GDNF抗体加入ACM2中制备成ACM3;用3种培养基孵育缺氧的神经元后测定神经元凋亡率.结果 加入ACM2组的神经元凋亡率低于其他2组.结论 星形胶质细胞预处理后通过上调GDNF表达抗神经元早期凋亡.

GDNF与新生儿缺氧缺血性脑损伤

GDNF是重要的神经营养因子,具有强大的神经保护作用.新生儿HIBD是围生期窒息的严重并发症,是导致智能落后和脑性瘫痪等儿童神经系统伤残的原因之一.本文就GDNF的分子结构、生物学功能及其与新生儿HIBD的关系作一综述.

GDNF对局灶性脑缺血大鼠海马区环氧酶表达的影响

目前,研究发现缺血性脑卒中后,缺血部位的脑组织发生着一系列变化,其中为重要的就是神经元的缺血、坏死以及脑水肿,在缺血半暗带处的神经元死亡存在两种不同的发生机制:缺血中心区的神经元迅速坏死,而稍后位于缺血半暗带边缘处的神经元开始凋亡.脑卒中后的缺血再灌注损伤可导致脑出血和脑水肿,引起神经元更广泛损伤,加重脑细胞凋亡和已经存在的脑水肿.因此,抑制神经元凋亡、减轻脑水肿并缩小缺血半暗带成为治疗缺血性脑血管病的有效途径.

GDNF及其在中枢神经系统损伤中的保护作用

神经营养因子在神经细胞的发育、分化、存活、突触的形成中起重要作用,对它的研究已成为神经科学领域中的热点之一.自1952年Montalcini发现神经生长因子(nerve growth factor,NGF)以来,随着技术手段的不断提高,特别是分子生物科学的飞跃发展,新的神经营养因子不断发现,同时对它们的基因序列、分子构成、分布特点、调控机制的研究也取得了令人瞩目的成果.胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)于1993年由Lin等人[1]从大鼠胶质细胞系B49的培养液中纯化得到,初的研究表明GDNF对多巴胺能神经元及运动神经元有很强的营养作用[2],继后的实验发现它对交感神经元、去甲肾上腺素能神经元、感觉神经元亦有一定营养作用[3],并且在动物实验中显示GDNF对多种原因造成的神经损伤具有明显的保护作用,从而为神经系统疾病的治疗开辟了新的途径.

不同时间针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠GDNF和bFGF蛋白表达的影响

目的 观察局灶性脑缺血再灌注大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达的情况及不同时间针刺对二者的影响.方法 采用线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,并分别在造模后6,12,24h开始针刺,运用免疫组化法观察不同时间段治疗组与模型组缺血半暗带的GDNF和bFGF蛋白表达情况.结果 在半暗带,bFGF和GDNF在缺血再灌注6h都开始表达,随着时间延长,bFGF表达逐渐增加,而GDNF表达逐渐减弱;不同时间开始针刺的各组与相应时段的模型组相比,GDNF和bFGF蛋白表达均明显升高(P均<0.05);不同时间进行针刺的各组之间,12h组、24h组与6h组比较二者均有显著性差异.结论 针刺可通过促进神经营养因子的表达而对缺血半暗区的神经细胞具有保护作用,针刺介入的佳时机应在脑缺血的早期.

GDNF基因的克隆及重组质粒pAd-GDNF的构建

目的克隆大鼠胶质细胞源性营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)基因,构建重组质粒pAd-GDNF,并观察GDNF基因在3周龄大鼠卵巢的表达.方法从3周龄大鼠卵巢组织中提取总RNA,用PT-PCR方法扩增出两个分别约668 bp、590 bp的片段,并将其中约668 bp的片段克隆到载体pAdTrack-CMV中,进行酶切鉴定和序列分析.结果证实成功克隆到大鼠GDNF基因.出生后发育期成年大鼠卵巢组织表达两种GDNF mRNA,其中长的mRNA片段强于短的片段.结论出生后发育期成年大鼠卵巢组织GDNF基因表达两种mRNA,可能主要以长片段GDNF mRNA发挥其生理作用;克隆到正确的大鼠GDNF基因,并构建出重组质粒pAd-GDNF,为下一步的研究打下基础.

人参皂甙Rb1对大鼠局灶性脑缺血脑组织GDNF表达的影响

目的 从蛋白水平探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的表达规律及人参皂甙Rb1对其的影响.方法 阻塞大鼠大脑中动脉(MCA)2 h再灌注3 h至5 d制备脑缺血模型,通过免疫组织化学(IHC)染色观察GDNF表达的改变与分布的特点及人参皂甙Rb1对其的影响.结果 脑缺血再灌注损伤后GDNF表达在3 h与2 d分别有两个高峰.给予人参皂甙Rb1后,GDNFmRNA与蛋白表达在2 d达高峰.单纯脑缺血再灌注组和人参皂甙Rb1给药组,GDNF阳性细胞数主要分布于额项皮质缺血周边区,其次为纹状体缺血周边区,下丘脑缺血周边区GDNF阳性细胞数少.人参皂甙Rb1给药组各时间点GDNF阳性细胞数远远高于与单纯脑缺血再灌注组同时间点的GDNF阳性细胞数(P<0.01).结论 脑缺血再灌注后GDNF的表达与缺血性损伤有一定的联系,人参皂甙Rb1对中枢神经系统有保护作用.

醒脑解毒汤对急性期缺血性中风大鼠BDNF及GDNF mRNA表达的影响

目的:观察醒脑解毒汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型脑组织中BDNF、GDNF mRNA表达的影响.方法:利用线栓法制备急性期缺血性中风大鼠模型,给予醒脑解毒汤,在不同时间点取大鼠脑组织,用BT-PCR法检测BDNF、GDNF mRNA表达变化.结果:醒脑解毒汤能够上调BDNF、GDNF mRNA表达.结论:醒脑解毒汤能够改善急性期缺血性中风大鼠脑组织的缺血情况.

艾灸对TNBS诱导大鼠神经营养因子、神经生长因子及其受体p75的影响

目的:通过观察艾灸疗法对克罗恩病(Crohn's disease,CD)大鼠结肠组织神经营养因子GDNF、神经生长因子NGF及其受体p75表达的影v向,探讨艾灸对克罗恩病大鼠肠神经系统的调节作用机理.方法:采用Moms的造模方法,将52只清洁级SD大鼠随机分为正常组、模型组、温和灸组、隔药灸组,每组12只,除了正常组大鼠外,其他均采用2,4,6-三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)进行灌肠造模.选取双侧天枢穴进行温和灸和隔药灸治疗.采用HE染色光镜下观察各组大鼠结肠组织病理学变化,采用免疫组化法检测大鼠结肠组织的神经营养因子GDNF、NGF及其受体p75的表达.结果:与正常组相比,TNBS诱导大鼠结肠组织存在充血水肿、溃疡形成等组织病理学损伤,肠神经因子GDNF、NGF及其受体p75的表达均显著升高(P＜0.05);温和灸和隔药灸治疗后大鼠结肠病理学损伤得到改善,肠神经因子GDNF、NGF及其受体p75的表达均有所下降(P＜0.05).结论:艾灸能下调CD大鼠肠神经因子GDNF和NGF及其受体p75的表达,提示对肠神经系统的调节可能是艾灸治疗克罗恩病的机制之一.

单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建

背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法.目的:利用Cre/Loxp 高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体.方法:分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre 重组酶的c66-SV40-cre 质粒转染Vero 细胞,构建一株带有Loxp 位点的重组HSV-1 框架载体HSVLoxp.构建穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES 及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT 培养基筛选出阳性毒株后用GDNF 引物做PCR 鉴定,扩增培养后测定滴度.结果与结论:成功构建pHV-TK-GFP 质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01.成功构建HSV-1 框架载体HSVLoxp 及穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF 基因,并将其转移到了HSV-1 基因组上,成功构建了表达GDNF 的单纯疱疹病毒HSV-1 载体,测定其滴度约为2.25×106 IU/mL.

胶质细胞源性神经营养因子在针刺营养小脑浦肯野细胞机制探析

小脑性共济失调是多系统萎缩(multiple system atrophy,MSA) MSA-C亚型的首发和突出症状,临床表现为进行性步态和肢体共济失调.小脑浦肯野细胞及相关神经元的萎缩及丧失是导致此疾病的重要原因,但目前尚没有能够明确改善患者症状的有效药物.研究已证实,胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是对小脑浦肯野细胞有效的神经营养因子,针刺治疗能够通过神经一体液一内分泌途径调节GDNF的释放,因此,该文将对GDNF在针刺营养小脑浦肯野细胞的机制作一浅析.

大鼠局灶脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对GDNF表达的影响

目的 探讨大鼠局灶脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)表达的影响.方法 用线栓法制作脑缺血-再灌注损伤模型.缺血2 h再灌注6、12、24、48 h后断头取脑,应用TTC染色和免疫组化方法,观察脑梗死体积、神经行为学改变及GDNF的表达.结果 与手术对照组相比,雌二醇组神经行为学分值显著降低,脑梗死体积亦显著缩小,在损伤区皮层,雌二醇组GDNF表达明显高于手术对照组,且在再灌注24 h明显.结论 脑缺血-再灌注损伤后雌二醇具有明确的保护作用,可以使GDNF表达增加,雌二醇可能通过上调GDNF的表达而发挥其作用.