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mTOR/Akt/FoxO3信号通路在人参皂苷Rg1抗PC-12细胞OGD损伤的作用
目的:研究人参皂苷Rg1对PC-12细胞缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用,并初步探讨与mTOR/Akt调控FoxO3核浆穿梭相关的可能的分子机制.方法:建立OGD损伤PC-12细胞模型,MTT 法检测OGD对PC-12细胞存活率.人参皂苷Rg110,20,40 μmol·L-1预处理PC-12细胞24h,加OGD损伤,MTT 检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.Western blot法检测mTOR,p-Aktser473,p-Aktthr308,Akt,p-FoxO3,细胞核、细胞质FoxO3和总FoxO3蛋白表达.结果:OGD作用4～24h显著抑制PC-12细胞增殖,呈时间依赖性.Rg1(20,40 μmol·L-1)预处理24h可显著增加细胞存活率,减少LDH释放,增加SOD活力和降低MDA含量.Rg1可抑制由OGD引起的rmTOR,p-Aktser473表达降低.OGD 6 h可减少FoxO3磷酸化,并促进细胞质FoxO3进入细胞核;预处理Rg1增加FoxO3磷酸化,促进FoxO3进入细胞质.提示Rg1可经由调控mTOR/Akt/FoxO3信号通路抑制PC-12细胞损伤.结论:人参皂苷Rg1可抑制OGD引起PC-12细胞损伤,作用机制可能与激活mTOR/Akt信号通路调控FoxO3核质穿梭密切相关.
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JNK/FOXO3信号通路介导黄连素促人肺腺癌PC-9细胞凋亡的研究
目的:探讨黄连素(berberine,Ber)诱导肺腺癌PC-9细胞凋亡及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)/转录因子叉头蛋白3(forkhead box protein O3,FOXO3)信号通路的作用机制.方法:实验采用完全随机化的分组方法,分为对照组、Ber组(30、60μM),分别检测各组PC-9细胞活力值、凋亡率、ROS含量、caspase 3活性、线粒体膜电位,以及JNK/FOXO3通路和凋亡相关蛋白含量的变化.SP600125特异性抑制JNK(磷酸化)激活后,Ber(0、60μM)处理细胞24 h,重复上述检测.结果:Ber有效抑制PC-9细胞活力,促进细胞凋亡(P<0.05),显著降低PC-9细胞线粒体膜电位,增加ROS含量和caspase 3活性(P<0.05),并呈浓度依赖效应;Western blot检测结果显示Ber上调p-JNK、FOXO3和Bax的含量(P<0.05),下调p-FOXO3和Bcl-2的含量(P<0.05);SP600125特异性抑制JNK激活后,拮抗Ber下调p-FOXO3含量及其促PC-9细胞凋亡作用(P<0.05).结论:Ber可有效抑制肺腺癌PC-9细胞活力、促进细胞凋亡和氧化应激损伤,作用机制可能与上调p-JNK、FOXO3含量和抑制FOXO3磷酸化有关.
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通络醒脑泡腾片经Nampt/SIRT1/FOXO3途径改善SAMP8小鼠的学习记忆
目的 考察通络醒脑泡腾片(川芎、当归和黄芩)对SAMP8小鼠学习记忆的影响,探究其改善认知功能作用机制.方法 将SAMP8小鼠药物干预60 d,采用Moms水迷宫评价其认知变化,随后采用ELISA法和免疫组化法分别测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、羰基化蛋白、NAD+/NADH和海马尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、沉默调节蛋白1 (SIRT1)和叉头蛋白3(FOXO3)的表达.结果 通络醒脑泡腾片能够缩短SAMP8小鼠在隐藏平台实验中第5天的逃避潜伏期和显著增加平台象限所占时间百分比,明显增加SAMP8小鼠在空间探索实验中进入目标象限次数;能够明显提升SAMP8小鼠脑组织SOD活力和NAD+/NADH比值及降低羰基化蛋白浓度;能够显著上调SAMP8小鼠海马Nampt和SIRT1的表达,下调FOXO3的蛋白表达.结论 通络醒脑泡腾片提高SAMP8小鼠认知功能与其调节海马Nampt/SIRT1/FOXO3途径有关.
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FoxO3在复发胶质母细胞瘤中的表达及其对替莫唑胺耐药性的影响
目的:研究抑癌基因FoxO3在复发胶质母细胞瘤中的表达及其在胶质母细胞瘤替莫唑胺耐药中的潜在作用机制.方法:通过基因芯片分析、qPCR和Western blot检测FoxO3在原发和复发胶质母细胞瘤中的表达,并检测其在替莫唑胺耐药细胞株中的表达.通过FoxO3过表达芯片筛选其下游靶基因,并进一步探讨FoxO3在胶质母细胞瘤替莫唑胺耐药中的作用机制.结果:FoxO3 mRNA及蛋白的表达在复发胶质母细胞瘤组织及耐替莫唑胺细胞系中明显减低.过表达FoxO3可通过抑制跨损伤修复蛋白REV3L的表达来增加胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺的敏感性.结论:FoxO3在复发胶质母细胞瘤组织中表达减低.FoxO3表达减低与胶质母细胞瘤化疗耐药密切相关.FoxO3可能通过抑制REV3L基因表达增加胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性.
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肺癌组织及其肺癌干细胞中FOXO3的表达及意义
目的：探讨FOXO3在肺癌组织与肺癌干细胞中的表达特点,为肺癌的诊断和治疗提供新的着手点。方法应用免疫组化、RT-PCR及Western blot法检测肺癌组织中FOXO3的表达,同时应用RT-PCR和Western blot法验证肺癌干细胞中FOXO3 mRNA及蛋白的表达,比较其在不同分型肺癌中的阴性率。结果免疫组化结果显示FOXO3在肺癌组织中呈明显低表达, RT-PCR和Western blot检测结果显示肺癌组织及肺癌干细胞中FOXO3 mRNA及蛋白均呈明显低表达,FOXO3蛋白在所有病例中的阴性率为66.7%,且随着癌细胞的分化及转移,其阴性率逐渐升高。结论 FOXO3在肺癌组织及肺癌干细胞中均呈低表达,同时其与肺癌的恶性程度、转移密切相关,或许可成为治疗肺癌的新靶点。
关键词： 肺肿瘤 FoxO3 肺癌干细胞 RT-PCR Western blot -
FOXOs转录因子在心脏疾病治疗中的研究进展
心脏疾病发病率高、死亡率高,严重影响人类健康,其中以缺血性心脏病和心肌肥厚为常见.转录因子FOXOs可以通过对抗氧化应激、促进细胞凋亡和自噬等作用保护心脏组织,在心脏疾病的治疗中发挥着重要作用.该文综述了FOXOs在心脏疾病中的作用以及信号通路,FOXOs作为心脏疾病治疗的潜在靶点,为心脏疾病的治疗提供新的思路.
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FOXO3在结直肠癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨叉头框蛋白O3(forkhead box class O3,FOXO3)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达及其临床意义.方法 选择手术切除的结直肠癌标本100份,采用实时定量PCR (real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测结直肠癌组织及相应正常癌旁组织中FOXO3基因mRNA水平表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测上述患者FOXO3蛋白的表达,采用免疫组织化学方法(immunohistochemistry,IHC)检测肠癌组织样本与正常肠粘膜组织FOXO3蛋白的表达.结果 肠癌肿瘤组织中FOXO3 mRNA、蛋白表达水平显著低于远端癌旁组织(P＜0.05);FOXO3阴性组生存率较FOXO3阳性组和FOXO3强阳性组生存率显著降低(P＜0.05);FOXO3强阳性组与FOXO3阳性组生存率比较无明显差异(P＞0.05);FOXO3表达与肿瘤分化(x2=32.7468,P=1.05e-08)、浸润深度(x2=4.0921,P=0.04308)、淋巴结转移(x2=5.7301,P=0.01668)、TNM分期(x2=9.2374,P=0.01451)及组织学分类(x2=8.5963,P=0.01359)密切相关.结论 FOXO3表达可能与结直肠癌的肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和组织学分类有关.FOXO3表达可能成为判定结直肠癌严重程度及预后效果的预测因子.
关键词： 结直肠癌 免疫组织化学 FoxO3 RT-qPCR Western blot -
FOXO3调控NF-κBp50表达介导肠上皮细胞凋亡参与溃疡性结肠炎相关癌变及健脾清热活血方药干预研究
目的 观察溃疡性结肠炎相关癌变(ulcerative colitis associated carcinogenesis,UCAC)结肠黏膜FOXO3、NF-κBp50、C-myc、肠上皮细胞凋亡及健脾清热活血方药对上述指标的影响,探讨健脾清热活血方药防治UCAC的可能机制.方法 120只SPF级雄性Balb-c按体质量随机分为正常组、模型组、对照组(美沙拉嗪组)、治疗组(低、中、高剂量组),采用DMH/DSS复合法制备UCAC模型,除正常组同步饲养外,其余各组分别予不同药物干预20周,第20周末处死全部动物.采用TUNEL染色检测肠上皮细胞凋亡;采用Real-time PCR及Western-bloting技术检测FOXO3、NF-κBp50、C-myc表达变化.结果 UCAC模型组小鼠结肠黏膜上皮细胞凋亡率为(18.65±2.47)％,结肠Foxo3、NF-KBp50、C-myc基因及其蛋白表达上升,该变化与UCAC组织病理学积分呈正相关;治疗组结肠黏膜上皮细胞凋亡率为(6.54±1.13)％,结肠FOXO3、NF-κBp50、C-myc基因及其蛋白表达较模型组比较明显下降,有统计学意义(P＜0.05).结论 FOXO3上调NF-κBp50表达诱导肠上皮细胞凋亡加速,破坏肠黏膜屏障,导致炎症持续在UCAC发病中占据重要地位;健脾清热活血方药可能通过下调FOXO3、NF-κBp50、C-myc表达,介导肠上皮细胞凋亡,修复肠黏膜屏障而发挥缓解UCAC的效用.
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FoxO3基因与膀胱癌临床病理特征及预后的相关性
目的 探讨FoxO3在膀胱癌中的表达及其与患者预后和临床病理特征的相关性.方法 收集111例膀胱癌患者的癌组织及癌旁正常组织标本,采用实时定量PCR、免疫组织化学方法和Western blot法检测FoxO3的表达.分析FoxO3与膀胱癌临床病理特征的相关性.对FoxO3进行Kaplan-Meier法生存分析.采用Cox比例风险模型分析影响预后的独立因素.结果 FoxO3基因的mRNA和蛋白在膀胱癌组织中的表达均低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05).膀胱癌淋巴结转移组的FoxO3蛋白的阳性率显著低于无淋巴结转移组(P＜0.05).TNM分期中Tis～T1浅表性膀胱癌组FoxO3蛋白的阳性率显著低于T2～T3浸润性膀胱癌组.组织学分型中高级别组的FoxO3蛋白阳性率显著低于低级别组(P＜0.05).膀胱癌组织中FoxO3蛋白表达与疾病的恶化程度呈正相关(P.＜0.05).FoxO3蛋白表达阴性、淋巴结转移是膀胱癌患者预后不良的危险因素.结论 FoxO3蛋白表达在膀胱癌组织中显著低表达,其阴性表达是膀胱癌患者预后不良的危险因素.
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白藜芦醇对前列腺增生上皮细胞系BPH-1氧化应激及凋亡的作用
目的 探究白藜芦醇(Resveratrol)在前列腺增生上皮细胞系BPH-1中的作用及可能的机制.方法 用不同浓度的白藜芦醇处理BPH-1细胞,处理24 h后用MTT法、流式细胞术等方法测不同白藜芦醇对BPH-1的作用,Western blot测定不同浓度白藜芦醇作用后相关蛋白的表达及改变,探究其作用可能的机制.结果 白藜芦醇处理BPH-1细胞24 h及48 h后,细胞生长明显受抑制,且呈浓度、时间依赖性;流式细胞术显示随着浓度的增加,细胞的凋亡率及活性氧(ROS)均增加,细胞周期分析显示白藜芦醇可以诱导细胞发生S期阻滞;Western blot显示白藜芦醇作用24 h后,FOXO3显著降低,且浓度越高FOXO3降低越明显,FOXO3下游Catalase呈下降趋势,凋亡相关蛋白Caspase 3、Bcl2、Bcl2-XL也出现相应改变.免疫荧光提示30 μmol/L白藜芦醇处理24 h后FOXO3蛋白发生核转移.结论 白藜芦醇可以抑制前列腺增生上皮细胞系BPH-1的增殖并促进其凋亡,其机制可能是白藜芦醇抑制了FOXO3的表达,促进FOXO3蛋白入核,抑制Catalase蛋白表达,使细胞清除活性氧能力下降,导致活性氧蓄积,触发凋亡相关蛋白而诱导细胞发生凋亡,并且白藜芦醇可以诱导BPH-1细胞发生S期阻滞,具体机制有待进一步探究.
