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肝纤维化不同证型与血清透明质酸、转化生长因子-β_1关系的实验研究
目的:观察不同证型的肝纤维化与血清透明质酸、转化生长因子-β_1的关系.方法:分别设立正常对照组、单纯肝纤维化组、肝纤维化肝郁脾虚证组和气虚血瘀证组,采用CCl_4注射法复制单纯肝硬化模型,肝郁脾虚证组附加夹尾和大黄灌胃法、气虚血瘀证组附加游泳疲劳法复制不同证型的肝纤维化模型,分别予相应药物干预.然后取血榆测血清透明质酸和转化生长因子-β_1水平.结果:各模型组透明质酸、转化生长因子-β_1含量均升高较正常对照组有显著差异(P<0.059或P<0.01),且均以气虚血瘀组为明显;药物治疗后有不同程度缓解.结论:透明质酸、转化生长因子-β_1和肝纤维化程度密切相关,可作为中医辨证分型、判断病情和指导治疗的客观指标之一.
关键词： 肝纤维化 透明质酸 转化生长因子-β_1 -
不同潮气量机械通气对大鼠肺组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和转化生长因子β1的影响
目的 观察不同潮气量机械通气大鼠肺组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)和转化牛长因子β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)mRNA及其蛋白表达水平,探讨氧化/抗氧化失衡在呼吸机相关性肺损伤(ventilator associated lung injury,Vau)中的作用.方法 24只雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为对照组、小潮气量组和大潮气量组(各组8只),测定其肺组织和血浆中MDA含量,并分别采用原位分子杂交技术和免疫组织化学染色法检测肺组织γ-GCS,TGF-β_1,mRNA及其蛋白表达水平,并进行相关性分析.组间差异比较采用方差分析法,各组均数间两两比较采用SNK-q检验,以P＜0.05表示差异有统计学意义,相关性分析采用Pearson直线相关分析法.结果 与对照组和小潮气量组比较,大潮气量组大鼠肺组织和血浆MDA含量、肺组织TGF-β_1mRNA及其蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),而γ-GCS mRNA及其蛋白表达水平则明显低于对照组和小潮气量组(P＜0.01);小潮气量组与对照组各项指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05).相关分析结果表明大潮气量组大鼠肺气道卜皮细胞γ-GCS和TGF-β_1 mRNA及其蛋白表达均呈负相关(r值分别为-0.96,-0.85,P＜0.01).结论 大潮气量机械通气町诱导肺组织TGF-β_1 mRNA及其蛋白高表达,使γ-GCS表达降低,谷胱甘肽合成减少,导致局部肺组织氧化/抗氧化系统失衡,是VALI发生的重要因素之一.
关键词： 机械通气 肺损伤 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 转化生长因子-β_1 -
肾炎宁对IgA肾病大鼠TGF-β_1/p38 MAPK的影响
目的 探讨肾炎宁对IgA肾病大鼠肾组织TGF-β_1/p38MAPK信号通路的作用.方法 将SD大鼠随机分为4组,对照组、模型组、西药组(贝那普利+氯沙坦)、中药组(肾炎宁),应用脂多糖+牛血清白蛋白+四氯化碳方法复制IgA肾病模型,按各组相应药物剂量灌胃.于第15周末行IgA免疫荧光检测,并用RT-PCR法检测肾组织转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β1,TGF-β_1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)mRNA表达水平.结果 中药组、西药组与模型组比较IgA免疫荧光强度、TGF-β_1、p38MAPK mRNA表达水平显著下降(P＜0.05).结论 肾炎宁可能通过抑制肾组织TGF-β_1/p38MAPK信号通路,发挥对IgA肾病的治疗作用.
关键词： 肾炎宁 IgA肾病 转化生长因子-β_1 p38丝裂原活化蛋白激酶 大鼠 -
丝胶预处理对DN大鼠肾脏细胞外基质相关蛋白表达的影响
目的 探讨彩色蚕茧提取物-丝胶预处理对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏细胞外基质(ECM)相关蛋白表达的影响.方法 36只雄性SD大鼠随机分为3组(每组12只):正常对照组、DN模型组和丝胶预防组.模型组、丝胶预防组大鼠均建立链脲佐菌素(STZ)致动物模型,以血糖≥16.7 mmol/L为成模标准;丝胶预防组大鼠于注射ST-Z前给与丝胶(2.4 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃35d.采用酶法检测血糖,ELISA方法检测血清Ⅳ型胶原(cⅣ)和层黏蛋白(LN)的含量;免疫组化染色观察肾脏转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达;Western blot法观察肾脏Smad 3蛋白的表达.结果 与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠血糖,血清cⅣ和LN含量,肾脏TGF-β_1、TIMP-1和Smad 3蛋白的表达均明显升高(P＜0.01).丝胶预防组大鼠的血糖、血清cⅣ和LN含量,肾脏TGF-β_1、TIMP-1和Smad 3蛋白的表达明显低于模型组(P＜0.01).结论 丝胶预处理可抑制DN肾脏中TGF-β_1/Smad 3信号通路的激活,防止TIMP-1蛋白高表达导致的MMPs活性的降低,从而预防DN时ECM的积聚和肾小球硬化,对DN的发生发展具有良好的预防作用.
关键词： 丝胶 预处理 糖尿病肾病 细胞外基质 转化生长因子-β_1 Smad 3 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1 -
喹那普利对单侧输尿管结扎大鼠肾纤维化拮抗作用的研究
目的 研究喹那普利对梗阻性肾病肾间质纤维化的影响及其机制.方法 30只SD大鼠随机分为3组:假手术组(n＝6)、单侧输尿管结扎(UUO)组(n＝12)和喹那普利组(n＝12).喹那普利组在UUO术前1 d予喹那普利10 mg·kg~(-1)·d~(-1) 灌胃,假手术组及UUO组予同等体积生理盐水灌胃.各组大鼠分别于术后14和28 d取梗阻侧肾组织.采用Masson染色及免疫组化方法 观测各组大鼠的肾间质容量、肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子-β_1(TGF-β_1)蛋白水平的变化.以原位杂交法检测各组大鼠肾组织TGF-β_1 mRNA表达的变化.结果与假手术组比较,UUO组大鼠肾小管明显萎缩塌陷或极度扩张,伴肾间质增生,输尿管梗阻后4周时上述病理改变尤为明显,肾间质容量明显升高(P<0.001).免疫组化染色检测结果显示,UUO组α-SMA及TGF-β_1蛋白水平均明显高于假手术组,且随梗阻时间的延长呈进行性升高(P<0.001).原位杂交结果表明,UUO组TGF-β_1 mRNA在肾小管间质中的表达显著高于假手术组(P<0.001).喹那普利组肾间质容量、肾小管间质中TGF-β_1 mRNA表达、TGF-β_1蛋白和α-SMA水平均显著低于UUO组(P<0.05或<0.01).结论 喹那普利可明显抑制肾组织分泌TGF-β_1,可能的机制之一是减少其下游效应细胞-肌纤维母细胞的活化,从而减缓UUO大鼠肾纤维化进程.
关键词： 喹那普利 转化生长因子-β_1 α-平滑肌肌动蛋白 单侧输尿管结扎 大鼠 -
转化生长因子-β_1基因L10P多态与结直肠癌遗传易感性的相关性
目的 探讨转化生长因子(TGF)-β_1基因L10P多态与结直肠癌(CRC)遗传易感性的关系.方法 采用TaqMan方法检测345例CRC患者及670名对照者的TGF-β_1 L10P基因型的分布.结果 两组间TGF-β_1 L10P基因型分布的差异无统计学意义(P=0.213).TNM分层分析结果显示,P是TNM Ⅰ～Ⅱ期CRC发病风险的遗传保护因子,与LL纯合子相比,LP杂合子的CRC发病风险显著降低至0.65(95%CI为0.44～0.95,P=0.027),PP纯合子的CRC发病风险显著降低至0.47(95%CI为0.28～0.78,P=0.004);将LP和PP基因型合并计算,则其CRC发病风险与LL基因型相比,降低至0.59(95%CI为0.41～0.85,P=0.005).结论 TGF-β_1基因L10P多态可能是中国人群TNM Ⅰ～Ⅱ期CRC发病风险的一个遗传保护因素.
关键词： 结直肠癌 转化生长因子-β_1 基因多态 遗传易感性 -
苯那普利及己酮可可碱对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用
目的:探讨苯那普利、己酮可可碱及两药联合应用对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用.方法:42只SD大鼠随机取出6只大鼠为正常对照组,余下经尾静脉注射阿霉素制备肾病模型,正常对照组给予等量生理盐水注射.造模成功的大鼠(24 h蛋白尿＞100 nag)随机分为模型组、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)组(苯那普利)、PTX组(己酮可可碱)、联合治疗组(苯那普利加己酮可可碱).8周后处死大鼠,经腹主动脉取血,检查生化指标;取肾皮质作HE染色,巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)免疫组织化学染色,应用图像分析系统进行免疫组化半定量分析.结果:联合组与单独用药组比较能有效降低阿霉素肾病大鼠血压[模型组(141±5)mm Hg,PTX组(134±6)mm Hg,ACEI组(130±5)mm Hg,联合治疗组(126±5)mm Hg].各治疗组均显著降低蛋白尿,ACEI组疗效略优于PTX组,但差别无统计学意义;联合治疗组疗效优于单独治疗组(P＜0.01),且可以显著抑制MCP-1、TGF-β1的表达(P＜0.01).结论:己酮可可碱、苯那普利及两药联用可更好地保护阿霉素肾病大鼠,其机制与其降低尿蛋白、抑制肾脏炎症及抗肾间质纤维化有关.
关键词： 阿霉素 肾病 苯那普利 己酮可可碱 联合治疗 巨噬细胞趋化因子-1 转化生长因子-β_1 -
曲尼司特抗大鼠肺纤维化的作用及机制
目的:探讨曲尼司特对肺纤维化的治疗作用及机制.方法:48只Sprague-Dauley大鼠随机分为正常对照组(N组)、肺纤维化模型组(M组)和曲尼司特治疗组(Q组)各16只,分别在14、28 d处死8只,每组大鼠分别采用HE染色、Masson染色行肺泡炎、肺纤维化程度分级.采用免疫组化法检测肺组织NF-κB;荧光定量PCR技术测定TGF-β1 mRNA表达;样本碱水解法测定羟脯氨酸(HYP);DTNB法测定超氧化物歧化酶(SOD);硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA).结果:M组的肺泡炎及肺纤维化程度及HYP含量、NF-κB、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)mRNA及MDA含量均较N组显著升高(P＜0.01).Q组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度及HYP含量、NF-κB、TGF-β_1 mRNA MDA含量均较M组显著降低(P＜0.01).结论:曲尼司特可能是通过抑制氧自由基生成而下调了NF-fcB的活性,从而抑制了TGF-β mRNA的表达而发挥抗肺纤维化作用.
关键词： 肺纤维化 NF-κB 转化生长因子-β_1 氧自由基 曲尼司特 -
特异性免疫治疗对哮喘大鼠转化生长因子-β_1/Smad信号通路的影响
目的:探讨特异性免疫治疗(specific immunotherapy,SIT)对哮喘大鼠转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及信号转导分子Smads表达的影响.方法:40只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机均分成正常对照组、哮喘组、SIT对照组和SIT治疗组等4组,每小组10只.通过卵蛋白(OVA)雾化吸入的方法对致敏大鼠进行SIT,用双抗体夹心ELISA法测定血清和BALF中TGF-β_1浓度,免疫组化方法检测肺组织TGF-β_1以及磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)、Smad7蛋白表达水平.结果:哮喘组和SIT治疗组的血清、BALF中TGF-β_1浓度均分别高于正常对照组,但SIT治疗组与哮喘组相比,两者的TGF-β_1浓度则均有所下降;哮喘组肺组织TGF-β_1和P-Smad2/3蛋白表达较正常对照组和SIT治疗组增高,而Smad7蛋白表达下降.结论:SIT通过抑制哮喘大鼠体内TGF-β_1和P-Smad2/3的过度表达及上调Smad7,从而阻断TGF-β_1的胞内信号转导,可在一定程度上减轻哮喘大鼠气道炎症和抑制气道重塑的发生发展.
关键词： 哮喘 特异性免疫治疗 转化生长因子-β_1 Smads -
酒精对HBV转基因小鼠肝脏的损伤作用及其机制
目的 探讨在肝损伤早期酒精和HBV协同作用的分子机制.方法 20只HBV转基因小鼠和20只普通小鼠随机分为4组:转基因小鼠酒精组(alcohol-fed Tg mice)和普通小鼠酒精组(alcohol-fed Wt mice),以白酒灌胃;转基因小鼠对照组(control Tg mice)和普通小鼠对照组(control Wt mice),以生理盐水灌胃.连续处理10 wk后检测各组小鼠血清ALT、AST水平,肝组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、Smad3、Smad7、结缔组织生长因子 (CTGF) mRNA表达水平及TGF-β_1、CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平.结果 酒精可升高转基因小鼠血清ALT、AST水平,诱发其肝脏病理损伤,但纤维化不明显;肝组织TGF-β_1、Smad3、Smad7、CTGF mRNA及TGF-β_1、CTGF、α-SMA蛋白表达增加.结论 酒精和HBV对肝损伤协同作用的机制可能与TGF-β_1、Smad3、CTGF、α-SMA表达增加以及TGF-β_1/Smads通路信号分子表达比例失调有关.
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肾移植术后巨细胞病毒感染对受者远期肾功能的影响
目的 观察肾移植术后外周血单个核细胞(PBMC)转化生长因子β_1,(TGF-β_1)mRNA表达,探讨巨细胞病毒(CMV)感染对远期肾功能的影响和可能机制.方法 选择2000年3月至2005年12月期间手术受者为研究对象,根据术后CMV感染与发病情况,将完成3年随访的96例受者分成3组:A组为有症状的活动性感染(n=33),B组为无症状的活动感染(n=33),C组为无活动性感染(n=30).分析CMV感染、PBMC内TGF-β_1,mRNA表达和血清肌酐(Scr)三者之间关系,对6例肾功能异常者实施移植肾活检术.结果 术后6月3组Scr水平无明显差异(P>0.05),有症状的A组PBMC的TGF-β_1,mRNA表达水平明显较无症状的B组和C组高(均P<0.01),而术后3年A组Scr水平明显较其它两组高(P<0.01),A组有10例(10/33)出现肾功能异常,发生率较B组(3/33)和C组(3/30)显著增高(均P<0.05).3组肾功能异常者(16例)在术后6月PBMC的TGF-β_1,mRNA表达水平较肾功能正常者(80例)明显增高(P<0.01).肾功能异常患者组织病理提示以间质纤维化、肾小管萎缩改变为主,符合慢性移植肾肾病(CAN)的病理改变.结论 肾移植术后有症状CMV感染是诱发CAN的重要因素,TGF-β_1可能介导了移植肾的损伤,早期监测PBMC内TGF-β_1 mRNA表达对防治CAN发生、发展有一定的临床意义.
关键词： 巨细胞病毒 慢性移植肾肾病 转化生长因子-β_1 -
红景天甙对低氧诱导肾小管上皮细胞转分化的作用研究
目的 观察红景天甙(salidroside,Sal)对氯化钴(cobaltous chloride,CoCl_2·6H_2O,Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(normal rat kidney tubular epithelia cell,NRK52E)转分化的影响并分析其可能的机制.方法 体外培养NRK52E细胞,分为正常对照组,氯化钴低氧组,10、50、100 μmol/L不同浓度红景天甙组.观察低氧标志蛋白低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible foctor-1α,HIF-1α)的表达.倒置相差显微镜观察细胞形态变化;荧光免疫及细胞免疫法检测NRK52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达情况;RT-PCR检测NRK52E细胞α-SMA、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)mRNA的表达;Western blot蛋白印迹检测HIF-1α和α-SMA蛋白的表达;酶联免疫吸附法检测细胞上清液胶原Ⅰ(collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的含量.结果 100 μmol/L Co诱导NRK52E细胞表达HIF-1α.Co组细胞明显肥大、拉长,呈肌成纤维细胞外观.不同浓度Sal组细胞形态介于正常与Co组之间.CO组α-SMA基因、蛋白和TGF-β_1 mRNA表达量较对照组升高(P＜0.05),不同浓度Sal组α-SMA基因、蛋白和TGF-β1 mRNA表达量较Co组减少(P＜0.05).Co组细胞上清液Col-Ⅰ和FN的含量较对照组增加(P＜0.05),不同浓度Sal组Col-Ⅰ和FN的含量明显下降(P＜0.05),以高剂量组为明显.结论 Sal可在一定程度上改善Co诱导的低氧状态和细胞转分化,减少细胞外基质的增加.其机制可能是通过抑制TGF-β_1和HIF-1α的表达实现的.
关键词： 低氧 红景天甙 肾小管上皮细胞转分化 低氧诱导因子-1α 转化生长因子-β_1 -
苦参碱对肺成纤维细胞TGF-β_1信号转导途径的干预作用
目的 研究苦参碱对肺成纤维细胞转化生长因子-β_1(TGF-β_1)信号转导途径的影响.方法 以人肺成纤维细胞系(HLF-02)为研究对象,用Western blot法检测TGF-β_1、丝/苏氨酸激酶抑制剂星形孢菌素(Staurosporine,SP)和细胞外信号调节激酶(ERK_(1/2))抑制剂PD98059、苦参碱(Matrine,Mat)作用对结缔组织生长因子(CTGF)、p-Smad2、p-ERK_(1/2)蛋白表达的影响,免疫组织化学方法检测CTGF蛋白,RT-PCR技术检测CTGF mRNA的表达.结果 体外培养的HLF-02表达基础水平的CTGF蛋白,1 ng/mL TGF-β_1可使CTGF、CTGF mRNA、p-Smad2、p-ERK_(1/2)表达水平增强(P<0.01);使用SP及PD98059预处理细胞可以抑制TGF-β_1刺激的CTGF的表达增加(P<0.01).使用苦参碱预处理细胞可以抑制TGF-β_1刺激的CTGF、CTGF mRNA、p-Smad2、p-ERK_(1/2)蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),且与苦参碱浓度呈负相关(r分别为0.845,0.900,0.789,0.942;P<0.01).结论 TGF-β_1可使CTGF蛋白及CTGF mRNA的表达明显增强,可能是通过Smad2和ERK途径促进CTGF表达.苦参碱可能是通过Smad2和ERK通路在基因及蛋白水平抑制TGF-β_1诱导的CTGF表达.
关键词： 人肺成纤维细胞 转化生长因子-β_1 结缔组织生长因子 苦参碱
