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蛇床子素抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖和胶原合成的机制研究
目的:探讨蛇床子素对转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导的小鼠肺成纤维细胞(MLF)增殖、胶原合成和表型转化的影响并探讨机制.方法:使用乳酸脱氨酶(LDH)试剂盒、细胞增殖-毒性(CCK-8)试剂盒、细胞计数法、3H-脯氨酸掺入实验检测各组细胞的死亡、增殖、胶原合成能力;Western blot技术检测胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、Rac-1蛋白表达水平.细胞免疫荧光检测波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在细胞内的定位及表达水平.DCFH-DA检测细胞内活性氧水平.结果:0.1-50μmol/L的蛇床子素对MLF没有毒性.10-50μmol/L的蛇床子素能够浓度依赖性地抑制TGFβ-1诱导的MLF增殖、胶原合成、α-SMA、Rac-1蛋白表达升高及ROS生成.结论:蛇床子素可以浓度依赖性地抑制TGF β-1诱导的肺成纤维细胞的增殖、胶原蛋白合成和表型分化,其可能机制与抑制Rac-1表达、活性氧(ROS)生成有关.
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荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA基因及其与胃癌转移的关系
目的 探讨肿瘤转移相关基因Rac1水平与胃癌转移的相关性,并评价分析Rac1 mRNA基因在胃癌转移和区分胃良、恶性病变中的价值.方法 用荧光定量RT-PCR TaqMan探针技术,选择Rac1基因目的 片段,与pET-20b(+)载体连接构建重组质粒,建立Rac1 mRNA荧光定量RTPCR标准曲线,并用于检测52份胃癌、癌旁组织及12份胃良性病变组织标本中Rac1 mRNA的含量,分析评价其与胃癌转移的关系.结果 胃癌组织中Rac1 mRNA表达阳性率和含量为100.0%,7.41×103 (3.50×105 ～4.36×106)拷贝/μl,癌旁组织为46.2%,0(0～1.73×104)拷贝/μl,良性病变组织为33.3%,0(0～3.55×103)拷贝/μl,3组间阳性率和Rac1 mRNA含量水平差异均有统计学意义(x2=43.16,x2k-w=64.19,P均＜ 0.01).当ROC曲线确定荧光定量RT-PCR检测Rac1含量的佳临界值为1.73×104 拷贝/μl时,诊断胃癌组织标本的敏感度为88.5%,特异度为100.0%;当佳临界值为7.49×103 拷贝/μl时,诊断胃癌是否发生淋巴结转移的敏感度为57.9%,特异度为78.6%.结论 荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA对鉴别胃良、恶性病变及评价胃癌转移均有参考价值.
关键词： 胃肿瘤 肿瘤转移 Ras相关的C3肉毒素底物1 逆转录聚合酶链反应 -
Ras相关的C3肉毒素底物1蛋白在胃癌组织中的表达和分布以及与胃癌进展的关系
目的 观察胃癌组织中Ras相关的C3肉毒素底物1(Racl)蛋白的表达和分布，探讨Racl蛋白的定位与胃癌进展之间的关系。方法 采用免疫组化染色法检测48例胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织中Racl蛋白的表达和分布，采用实时荧光PCR法检测48例胃癌组织中T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）和Racl mRNA的表达水平。结果 48例胃癌组织中，Racl蛋白阳性表达38例(79.2％)，其中31例(64.6％)定位于细胞核。48例癌旁组织中，Racl蛋白阳性表达9例(18.8％)，全部定位于细胞质。Racl蛋白在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率差异有统计学意义(u ＝6.43，P＜0.01)，Racl蛋白在胃癌和癌旁组织中的核定位率差异亦有统计学意义(x2＝45.795,P＜0.001)。实时荧光PCR检测结果显示，Rac1蛋白核定位胃癌组织中Racl和Tiaml mRNA的阳性表达率和中位数均明显高于Racl蛋白非核定位组（均P＜0.05）。Racl蛋白的细胞核定位与胃癌的分化程度、T分期以及局部淋巴结转移相关。结论在多数胃癌组织中，Racl蛋白定位于细胞核，Racl蛋白的核定位可能是Tiaml/Racl信号通路异常活化的表现，也可能预示着胃癌侵袭能力的增强。
关键词： Ras相关的C3肉毒素底物1 免疫组织化学 聚合酶链反应 胃肿瘤 细胞核 -
Rac1和NF-κB p65的表达与非小细胞肺癌转移及预后的关系
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和核转录因子(NF)-κB p65的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化Super Pic TureTM Polymer二步法,检测112例石蜡包埋的NSCLC组织及112例相同患者石蜡包埋的正常余肺组织Rac1和NF-κB p65的表达.结果 NSCLC组织中Rac1及NF-κB p65的表达明显高于正常余肺组织,且两者的表达强度在NSCLC组织中呈正相关(r=0.549,P< 0.001).在肿瘤不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的NSCLC患者的Rac1的表达强度差异有统计学意义;在不同TNM分期及淋巴结转移情况的NSCLC患者的NF-κB p65的表达强度差异有统计学意义;而在低分化、高分期及有淋巴结转移的NSCLC患者组织中,2种指标协同表达的现象更容易出现,且差异有统计学意义(P < 0.05).Rac1高表达组的3年生存率(35.29%)低于低表达组(79.07%);NF-κB p65高表达组的3年生存率(40.28%)低于低表达组(74.36%);Rac1与NF-κB p65共同高表达组的3年生存率(37.70%)低于仅1种蛋白高表达(61.11%)及共同低表达者(81.25%).Rac1和NF-κB p65共同高表达及淋巴结转移是预后的不良因素(P < 0.05).结论 在NSCLC组织中,Rac1和NF-κB p65的表达呈现较好的相关性,检测两者的表达会对NSCLC患者的临床病理学特征及预后起一定的提示作用.
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NSC23766改善大鼠脑缺血后认知功能缺陷
目的:探讨Rac1在大鼠海马CA1区缺血性神经元损伤中的作用.方法:健康成年雄性SD大鼠制作四动脉闭塞全脑缺血模型,实验动物随机分为Sham、缺血再灌组(ischemia/reperfusion,I/R)、溶剂对照(Vehicle)组(I/R+生理盐水)、NSC23766组(I/R+NSC23766).采用激光共聚焦显微镜技术观察海马CA1区生存神经元.利用Morris水迷宫观察脑缺血再灌注后大鼠的空间学习记忆功能的变化情况.结果:与缺血再灌注组相比,Rac1抑制剂NSC23766组海马CA1区神经元生存数量增加;大鼠缺血后的空间学习记忆缺陷明显得到改善.结论:Rac1的激活可能是导致大鼠缺血再灌注后神经元损伤的重要因素,其抑制剂NSC23766可有效减轻这种损伤,为临床治疗缺血性脑中风提供理论依据.
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Rac1在小鼠哮喘发病前后的变化及其影响
目的:建立小鼠哮喘动物模型,检测在哮喘发病前后相关组织中Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-relat-ed C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达水平的变化,分析其和2型固有淋巴细胞(type 2 innate lymphocytes,ILC2)相关细胞因子如白细胞介素(interleukin,IL)-5、IL-13之间的相关性,以探讨Rac1在小鼠哮喘发病机制中的作用.方法:用卵蛋白(ovalbumin,OVA)诱发小鼠产生哮喘,采用免疫荧光法在蛋白表达水平检测Rac1的改变,同时用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)分析哮喘前后Rac1、IL-5、IL-13 mRNA水平变化.结果:在哮喘发病后,Rac1的水平呈明显下降趋势,而ILC2相关的细胞因子表达水平升高,且Rac1与IL-5、IL-13之间均呈明显负相关.结论:小鼠在哮喘发病后,Rac1呈低表达,同时刺激ILC2的活化,诱导IL-5和IL-13的表达,从而影响哮喘的免疫病理过程.
关键词： 哮喘 Ras相关的C3肉毒素底物1 白细胞介素-5 白细胞介素-13 小鼠 -
结直肠癌组织中Vav1、Rac1、CyclinD1、p21表达的意义
[目的]通过检测Vav1、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21蛋白在结直肠癌组织中的表达情况,分析Vav1蛋白与Rac1、CyclinD1、p21的关系及意义.[方法] 180例结直肠癌肿瘤组织和162例癌旁组织的石蜡组织标本进行免疫组化染色,检测肿瘤组织和癌旁组织中Vav1、Rac1、CyclinD1、p21蛋白表达.[结果]结直肠癌肿瘤组织中Vav1、Rac1、CyclinD1蛋白表达高于癌旁组织,p21蛋白在癌组织表达低于癌旁组织(P＜0.05).Vav1蛋白表达与肿瘤的浸润深度、分化情况及淋巴结转移有关;Rac1与肿瘤的分化情况、淋巴结转移有关;CyclinD1表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移有关(均P＜0.05).Spearman相关分析显示,肿瘤组织中Vav1蛋白表达与Rac1、CyclinD1蛋白呈正相关,与p21负相关(P＜0.05).[结论]Vav1在结直肠癌组织中的表达与肿瘤增殖的指标有关,可能通过调节Rac1、CyclinD1、p21促进肿瘤的生长.
关键词： 结直肠肿瘤 Vav1蛋白 Ras相关的C3肉毒素底物1 细胞周期蛋白D1 p21 -
Rac1基因在子宫内膜癌组织表达及其临床意义
目的 探讨Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)基因在子宫内膜癌组织中表达情况及其临床意义.方法 应用实时荧光定量PCR检测96例子宫内膜癌和40例正常子宫内膜组织Rac1基因的表达,并分析其与子宫内膜癌病人生存的关系以及子宫内膜癌病人预后的影响因素.结果 子宫内膜癌组织Rac1 mRNA相对表达量为1.75±0.16,显著高于正常子宫内膜组织(1.38±0.14),差异有统计学意义(t=14.095,P＜0.01).子宫内膜癌组织Rac1 mRNA相对表达量与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和血管浸润有关(t=5.322～9.739,P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析显示,Rac1低表达组病人平均生存时间为58.82个月,高表达组为45.98个月,两组比较差异有显著性(x 2 =4.972,P＜0.05).Cox比例风险回归模型分析显示,肿瘤分化程度、淋巴结转移和Rac1mRNA相对表达量是影响子宫内膜癌病人预后的风险因素(HR=2.449～13.582,P＜0.05).结论 Rac1基因在子宫内膜癌组织中呈高表达,是影响预后的风险因素之一.
关键词： 子宫内膜肿瘤 Ras相关的C3肉毒素底物1 实时聚合酶链反应 预后 -
肝细胞肝癌患者癌组织中Ras相关C3肉毒素底物1、转化生长因子β1表达变化及其意义
目的 观察肝细胞肝癌(HCC)患者癌组织中Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达变化,并探讨其意义.方法 73例HCC患者,均行HCC切除术,术中保留HCC组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法检测HCC组织、癌旁正常组织Rac1及TGF-β1,分析其与HCC临床病理特征之间的关系.应用kaplan-Meier生存曲线分析Rac1和TGF-β1共同表达与HCC预后的关系.结果 HCC组织、癌旁正常组织Rac1的阳性表达率分别为37.0％(27/73)、20.5％(15/73),二者比较,P＜0.05;HCC组织、癌旁正常组织TGF-β1的阳性表达率分别为61.6％ (45/73)、28.8％ (21/73),二者比较,P＜0.05.HCC组织TGF-β1的表达与肿瘤直径、血清甲胎蛋白表达、门静脉癌栓、TNM分期、淋巴结转移有关(P均＜0.05).Rac1与TGF-β1在HCC中的表达呈正相关(r =0.313,P＜0.01),Rac1与TGF-β1的共同高表达与HCC TNM分期、淋巴结转移有关(P均＜0.01).Rac1与TGF-β1共同高表达与HCC患者的不良预后呈正相关(r=0.499,P＜0.05).结论 HCC组织中Rac1、TGF-β1均呈高表达.Rac1、TGF-β1共同高表达与HCC的进展及不良预后有关.
关键词： Ras相关的C3肉毒素底物1 转化生长因子β1 肝肿瘤 肝细胞肝癌 -
Tiam1-Rac1在乳腺癌组织中的表达及意义
目的：探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）和Ras相关的C3肉毒素底物1（Racl）在乳腺癌发生发展中的作用。方法采用免疫组化学法检测20例正常乳腺组织（正常组）、20例乳腺增生组织（增生组）及97例乳腺癌术后标本（乳腺癌组）中Tiam 1和Rac1表达。分析Tiam1和Rac1表达与乳腺癌临床病理参数的关系及二者表达的相关性。结果正常组、增生组和乳腺癌组Tiam1和Rac1表达阳性率明显高于正常组及增生组（ P＜0．05）；Tiam 1和Rac1表达与乳腺癌组织分级、TNM分期、淋巴结转移密切相关（P均＜0．01），与患者年龄、肿瘤大小、病理类型等无关；两者在乳腺癌组织中的表达呈明显正相关；其在乳腺癌组织中的共表达及其表达强度与乳腺癌的淋巴结转移密切相关。结论 Tiam1和Rac1可促进乳腺癌的转移，在此过程中可能存在协同作用。联合检测Tiam1和Rac1在乳腺癌组织中的表达及其阳性强度对于预测乳腺癌的预后具有重要意义。
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miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响及机制探讨
目的 观察miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响,并探讨其分子机制.方法 取结直肠癌细胞株SW620、SW480,稳定过表达miR-101细胞株SW620(miR101-SW620)及其阴性对照GV209-SW620,瞬时沉默miR-101表达细胞株SW480(SW480-miR101)及其阴性对照SW480-NC,采用Western blotting法检测细胞中miR-101靶基因Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)及其下游关键蛋白细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)、人Ras同源基因家族成员A(RhoA).取SW620、GV209-SW620、miR101-SW620细胞,分别给予0、2、4、6、8 Gy射线处理24 h;Westernblotting法检测DNA损伤标志性蛋白γ-H2AX、细胞凋亡标志蛋白Caspase-3判断细胞放疗敏感性变化,同时检测细胞Rac1、Cdc42、RhoA蛋白.结果 与SW620、GV209-SW620细胞比较,miR101-SW620细胞Rac1、Cdc42、RhoA蛋白表达降低(P均＜ 0.05);与SW480、SW480-NC细胞比较,SW480-miR101细胞Rac1、Cdc42、RhoA蛋白表达均增高(P均＜ 0.05).随着照射剂量增加,结直肠癌细胞γ-H2AX、Caspase-3表达均增高,而Rac1、RhoA、Cdc42蛋白表达均降低(P均＜ 0.05);与同等照射剂量下SW620、GV209-SW620细胞比较,miR101-SW620细胞γ-H2AX、Caspase-3蛋白表达均增高,而Rac1、RhoA、Cdc42蛋白表达均降低(P均＜0.05).结论 miR-101可能通过调控Rac1/Cdc42/RhoA信号通路增强结直肠癌细胞对放疗的敏感性.
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Ras相关的C3肉毒素底物1在草酸所致的肾小管上皮细胞氧化损伤中的作用
目的 观察Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)在草酸所致的肾小管上皮细胞氧化损伤中的作用.方法 体外培养犬肾小管上皮细胞(MDCK细胞)制成爬片后,随机分为空白对照组(A组)、Rac1抑制组(B组)、草酸组(C组)、Rac1抑制+草酸组(D组).B组和D组分别暴露在含Rac1抑制剂NSC23766(100 μmol/L)培养液中,30 min后C组及D组分别更换为含草酸(5 mmol/L)的培养液,余对照更换为磷酸盐缓冲液(PBS).4h后分别测定各组培养液中过氧化氢(H2 O2)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性和细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶活性,免疫细胞化学染色观察细胞Rac1表达,向培养液中加入草酸钙(0.75 mmol/L)15 min后在倒置显微镜下观察细胞对草酸钙结晶的黏附.结果 A组H2O2浓度、LDH活性及细胞NADPH氧化酶活性分别为(24.23±2.44) mmol/L、(0.62 ±0.06) U/ml、(1 042.83±61.00) RLU/(min· mg);B组分别为(24.46±3.39) mmol/L、(0.56±0.06) U/ml、(1 096.67±66.12) RLU/(min· mg);C组分别为(67.84±4.25) mmol/L、(1.71 ±0.08) U/ml、(2 852.50±105.71) RLU/(min· mg);D组分别为(34.79±3.07) mmol/L、(0.96±0.07) U/ml、(1 118.83±57.56) RLU/(min· mg).与A组比较,C组细胞Rac1表达增强(P＜0.05),NADPH氧化酶活性、H2O2浓度、LDH活性明显增强(P＜0.05),细胞对草酸钙结晶的黏附数量增多;而与C组比较,D组细胞Rac1表达降低(P＜0.05),NADPH氧化酶活性、H2O2浓度、LDH活性均显著降低(P＜0.05),黏附在细胞表面的草酸钙结晶数量减少.结论 草酸通过Rac1调节的NADPH氧化酶致肾小管上皮细胞氧化损伤,抑制Rac1可显著减少活性氧物质的产生及细胞损伤.
