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骨皮质切开术辅助大鼠正畸牙移动中M-CSFmRNA,ANKLmRNA,OPGmRNA的研究
目的:观察M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子),RANKL(核激活因子KB受体活化因子配体),Osteoprotegerin(骨保护蛋白)在大鼠骨皮质切开术辅助正畸牙移动过程中的表达情况.方法:选取健康雄性Wistar大鼠65只,60只大鼠随机分成3组:组Ⅰ:选择性骨皮质切开术组;组Ⅱ:传统牙齿移动组;组Ⅲ:混合组,剩余5只作为空白对照组(不作任何处理).用镍钛螺旋拉簧施加约60g力近中移动上颌实验侧第一磨牙,在第一磨牙颊腭侧行打孔式骨皮质切开术,分别在加载第7、14、21、28、42d颈椎脱臼处死取材,应用SYBRGreen实时荧光定量技术和MxPro-Mx3000P软件对取材进行分析.结果:组Ⅲ的破骨细胞主要调节因子和生化标记物:M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子),RANKL(核激活因子KB受体活化因子配体)的表达与组Ⅰ和组Ⅱ相比增加,暗示组Ⅲ骨吸收活跃.组Ⅲ与组Ⅱ相比,呈现出独特的牙槽骨改建模式:藕联的RANKL和OPG促进牙槽骨改建.结论:正畸牙齿移动初期骨皮质切开术加速了牙齿移动,改变了早期骨代谢状态,破骨活跃,支持区域性骨代谢加速学说.
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热休克蛋白90 mRNA在大肠腺癌及腺瘤中表达的意义
目的:探讨HSP90 mRNA在大肠腺癌发生中的意义.方法:利用核酸原位杂交技术,对69例大肠腺癌及26例大肠黏膜慢性炎和16例腺瘤标本中HSP90 mRNA进行检测.结果: HSP90 mRNA在大肠黏膜慢性炎中有极低表达率3.8%(1/26),在腺瘤中阳性率为43.8%(7/16),在大肠腺癌中阳性率为69.6%(48/69).HSP90 mRNA的表达与大肠腺癌病理类型、分化程度和淋巴结转移有相关性.结论: HSP90 mRNA高表达与大肠腺癌的发生、发展有关.
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运动性心肌肥大大鼠背根神经节降钙素基因相关肽基因表达的变化
目的:探讨运动性心肌肥大大鼠背根神经节降钙素基因相关肽基因表达的变化.方法:雄性SD大鼠随机分为对照组(n=33)和耐力训练组(n=33).耐力训练组进行10周的跑台耐力训练,建立运动性心肌肥大模型.建模后48h,从两组随机抽取17只大鼠,连续3天进行力竭运动,后一次力竭运动后即刻处死全部实验动物.记录力竭运动距离和大鼠体重,取大鼠心脏和腰段背根神经节,记录心脏湿重,采用荧光定量聚合酶链式反应技术测定大鼠背根神经节降钙素基因相关肽mRNA的表达量.结果:10周后,耐力训练组大鼠心脏重量与体重之比和力竭运动距离显著高于对照组(P＜0.01).与对照组比较,力竭运动前耐力训练组背根神经节CGRP mRNA表达显著下降(P＜0.01),力竭运动后耐力训练组背根神经节CGRP mRNA表达与力竭运动前相比无明显变化,而对照组较力竭运动前显著下降(P＜0.01).结论:运动性心肌肥大大鼠背根神经节CGRP基因表达下调,力竭运动后表达保持稳定.
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不同强度运动后大鼠心肌细胞热休克蛋白72mRNA的表达
目的:探讨不同运动强度和持续时间运动对大鼠心肌细胞热休克蛋白72 mRNA表达的影响.方法:分别使SD大鼠进行低强度(60%VO2max)、中等强度(75%VO2max)和高强度(85%VO2max)跑台运动1天、2天和3天,在末次运动结束后24小时以RT-PCR法检测大鼠心肌细胞热休克蛋白72mRNA的表达.结果:在安静情况下大鼠心肌细胞存在HSP72 mRNA的基础结构性表达;低强度运动1天后心肌细胞HSP72 mRNA表达与对照组相比无显著性差异,但随着运动时间的延长,HSP72 mRNA表达逐渐增加;中等强度运动后心肌细胞HSP72 mRNA表达随运动持续时间的延长显著增加,但运动2天和3天组表达量无显著性差异;大强度运动后心肌细胞HSP72 mRNA表达随运动持续时间的延长显著增加.结论:运动可以造成心肌细胞HSP72 mRNA的表达增加,不同强度运动诱导心肌细胞HSP 72 mRNA表达程度不同,且与运动持续时间存在内在关系.
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不同周期运动后大鼠心肌细胞热休克蛋白72 mRNA的表达
目的: 探讨不同周期运动对大鼠心肌细胞热休克蛋白72 mRNA表达的影响.方法: 以不同周期跑台运动为运动模式,观察了一周运动、二周运动和三周运动后24h大鼠心肌细胞热休克蛋白72 mRNA的表达.结果:安静对照组大鼠心肌细胞存在HSP72 mRNA的基础结构性表达;一周运动后大鼠心肌细胞HSP72 mRNA表达明显增多,两周运动后HSP72 mRNA表达较一周运动稍减少,但无统计学意义;三周运动后大鼠心肌细胞HSP72 mRNA表达较运动一、二周减少,且存在显著性差异.结论:运动可以造成心肌细胞HSP72 mRNA的表达增加,长时间规律运动可以使HSP72 mRNA表达在细胞中累积,但一定时间后HSP72 mRNA累积会逐渐减少.
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运用荧光定量PCR检测低氧训练大鼠肝脏ChREBP基因表达
目的:建立碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术.方法:32只SD大鼠随机分为常氧安静组、常氧运动组、低氧安静组和低氧运动组,运动组每天运动1小时,每周运动5天;低氧组每天在低氧下生活10小时.实验6周后取肝组织,应用实时定量PCR方法检测肝组织ChREBP mRNA的表达.结果:实时定量PCR方法可对肝组织ChREBP mRNA表达进行定量检测.ChREBP基因拷贝数与检测阈值呈线性关系,相关系数r＞0.99.结论:实时定量PCR方法检测ChREBPmRNA结果准确、可靠.
关键词： 碳水化合物反应元件结合蛋白 信使核糖核酸 实时定量PCR -
生理状态下外周血白细胞穿孔素基因表达的荧光定量PCR检测
目的:建立穿孔素(perforin,PFR)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术.方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员生理状态下处周血PFR mRNA的表达.主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性PFR mRNA表达进行定量分析,相关系数r=1.
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人外周血自然杀伤T细胞分泌胰岛素样生长因子-1的研究
目的:建立人外周血自然杀伤T细胞(NKT)体外扩增及检测NKT细胞分泌胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的方法.方法:采用IFN-γ,CD3和IL-2的方法从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出NKT细胞,采用流式细胞仪检测扩增效率,并使用绝对实时定量PCR(real-time PCR)的方法检测扩增出的NKT细胞中IGF-1的mRNA表达量.使用内源性管家基因GAPDH校正误差.结果:两周扩增后NKT细胞增加了4倍.受试者扩增的NKT细胞IGF-1 mRNA表达量为1.29±0.56拷贝数/106 GAPDH.结论:从PBMC扩增NKT细胞可以获得良好的效果,扩增出的NKT细胞有IGF-1的表达,但是表达量相对较低.
关键词： 自然杀伤T细胞 胰岛素样生长因子-1 实时定量PCR 信使核糖核酸 -
生理状态下外周血白细胞IL-2基因表达的荧光定量PCR检测
目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术.方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员中IL-2 mRNA的表达.主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2 mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99.
关键词： 白细胞介素2(IL-2) 信使核糖核酸 实时定量PCR -
生理状态下外周血白细胞γ-干扰素基因表达的荧光定量PCR检测
目的:建立γ-干扰素(IFN-γ)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术.方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员生理状态下外周血白细胞IFN-γ mRNA的表达.主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IFN-γ mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99.
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女子赛艇运动员低氧训练前后外周血白细胞γ-干扰素、白细胞介素-4和穿孔素基因表达的变化
目的:探讨高住高练低训(HiHiLo)和低住高练(LoHi)对机体免疫功能的影响.方法:12名女子赛艇运动员随机分为高住高练低训(HiHiLo)组和低住高练(LoHi)组.实验期间,两组运动员均采用常氧训练为主,低氧运动为辅的方式训练,实验为期5周.HiHiLo组每周6天低氧睡眠.两实验组每周进行3次低氧训练,每次1.5～2h.低氧环境氧分压为15.4%(相当于海拔2500m高度).分别于低氧训练前1天、低氧训练1、4、5周末及低氧训练结束2周末取血,采用实时定量PCR检测技术观察受试者低氧训练过程中外周血白细胞γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、穿孔素(PFR)的基因表达.结果:两组运动员低氧训练1周末IFN-γ、IL-4、PFR mRNA表达与低氧训练前相比均无显著差异;低氧训练5周末,HiHiLo组IFN-γmRNA表达较低氧训练1周末显著上调,IL-4、PFR mRNA的表达较实验前显著下调,LoHi组仅表现为IL-4 mRNA表达较实验前显著下调.提示不同模式低氧训练对女子赛艇运动员IFN-γ、IL-4和PFR基因表达的影响不同.
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心律失常相关microRNA的研究进展
心脏性猝死是目前威胁人类的主要疾病之一,其病因很多,主要由恶性心律失常引起.由于不能确切认识心律失常的发生机制,目前尚无有效方法预防和治疗心脏性猝死.近年来,发现microRNA(miRNA)在心脏生理病理过程中发挥重要的调控作用,尤其与心律失常的发生、发展密切相关.该文就miRNA在心律失常发生、发展中的作用予以综述.
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miRNA在癌症中的临床应用
miRNAs是一类进化上保守的多效性非编码小RNA,通过序列特异性与同源信使核糖核酸(mRNA)的3'非翻译区(非编码区)靶向相互作用,抑制转录后的基因表达.miRNAs的表达和处理模式在人类多种疾病(包括恶性肿瘤)上表现出多方面的改变,通过靶向作用于几十到数百个基因,可以改变肿瘤发生和发展所必须的基本生物学功能和路径[1].另外miRNA在物种中的保守性,使它们成为治疗癌症具有吸引力的候选者.miRNAs的肿瘤生物网络是复杂的,目前发现了许多新兴的miRNA,随着研究的进一步深入开辟了针对早期发现疾病的新型生物标志物、定义治疗反应性和现在治疗的补充疗法的新道路,为我们提供了miRNAs在癌症治疗方面的广阔视角.
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载体介导shRNA对胃癌细胞株MKN45中C-met的抑制作用
目的 探讨载体介导短发夹核糖核酸(shRNA)对胃癌细胞株MKN45中原癌基因C-met的抑制作用.方法 9株胃癌细胞株分为转染组、阴性对照组和空白对照组, 各3侏.通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术, 观察转染24 h和48 h后, 原癌基因C-met的信使核糖核酸(mRNA)的CT值的变化;通过免疫印迹试验(Western blot), 观察转染后C-met的蛋白变化;通过四氮唑盐MTT比色法, 计算细胞存活率.结果 载体介导的C-met shRNA转染24 h和48 h后, RT-PCR结果 显示, C-met的mRNA抑制率分别为56%和88%;与空白对照组比较, C-met的蛋白表达水平明显下降, 转染后24 h [(0.812±0.105) VS (0.640±0.011)]、48 h[(0.811±0.103) VS (0.331±0.009)], 差异均有统计学意义(P<0.05);MTT比色法显示, 细胞存活率均有明显下降, 转染后24 h为65.9%, 48 h为59.6%.结论 载体介导的C-met shRNA不仅可降低胃癌细胞株MKN45中原癌基因C-met的mRNA及其蛋白表达水平, 而且对癌细胞的存活有明显的抑制作用.
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原发性高血压患者颈动脉内膜与炎症的关系及罗格列酮防治机制
目的 探讨原发性高血压患者颈动脉内膜中层厚度(IMT)与PPARγ、TNF-α、IL-6 mRNA水平的关系及罗格列酮干预后对PPARγ、TNF-α、IL-6 mRNA的影响.方法 用彩超测量原发性高血压患者颈动脉IMT,将50例原发性高血压患者分成IMT正常组(24例)和IMT增厚组(26例),用逆转录PCR法测定罗格列酮体外干预外周血单核细胞(PBMC)前、后PPARγ、TNF-α和IL-6 mRNA水平.结果 IMT正常组IMT值为(0.68±0.09)mm,IMT增厚组1MT值为(1.2±0.38)mm.与IMT正常组比较,IMT增厚组PPARγ降低(P=0.001),TNF-α、IL-6升高(P=0.002),且PPARγ与TNF-α、IL-6均呈负相关(r=-0.900,r=-0.916,p=0.000).罗格列酮干预后两组PPARγ mRNA较干预前升高,TNF-α、IL-6 mRNA较干预前降低(P<0.01),且IMT增厚组干预前、后的差值较IMT正常组干预前、后的差值更明显(P<0.01).结论 原发性高血压IMT增厚与炎症相关,外周血单核细胞PPARγ可能参与了炎症的调控;罗格列酮通过上调PPARγ mRNA水平,下调TNF-α、IL-6 mRNA水平而影响颈动脉IMT厚度.
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IKKβ增强通过LIN28B/TCF7L2正反馈环路：促进癌细胞干性和转移
相当多的证据表明，促炎途径推动肿瘤干细胞样细胞（CSC）的自我更新，但其潜在机制仍未明确。有来自中国的学者报告let7阻遏基因LIN28B及其调节因子IKKβ通过与Wnt/TCF7L2（TCF4）信号传导通路交互作用维持癌细胞干性，促进癌症的进展。他们发现：在乳腺癌患者中基因LIN28B表达与临床进展和干性标志物的表达相关。功能研究表明IKKβ可增强表达LIN28B的人乳腺癌和肺癌细胞的干性属性，而LIN28B缺失则使这些细胞的干性属性消失。TCF7L2直接与LIN28B基因的基因内区1结合增强LIN28B基因表达，进而通过一个正反馈环路促进TCF7L2信使核糖核酸的翻译。是前者通过与TCF7L2交互作用而驱动了上述现象。值得注意是，RNAi介导的LIN28B基因沉默或IKKβ的药物抑制足以抑制体内原发和转移性肿瘤的生长。总之，他们的结果表明基因LIN28B/TCF7L2交互作用环路可作为一个在癌症进展和转移过程中由促炎过程驱动的肿瘤干性核心介导因素，可能提供一个用于晚期癌症广泛干预的新的治疗靶标。论文由Cancer Res于2015年优先在线发表。
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大环内酯类药物对免疫调节作用的研究进展
大环内酯类药物(macrolides,MA)是作用于细菌核糖体50S亚单位,阻断信使核糖核酸(mRNA)位移,从而抑制菌体蛋白合成的一类快速抑菌药.MA主要用于革兰阳性菌感染,对支原体、衣原体、军团菌及螺杆菌也有较强的抑制作用.MA按化学结构分为14元环、15元环和16元环三大类.MA可分为三代:第一代为天然品种,包括红霉素和许多16元环药物;第二代为半合成品种,为红霉素的一系列衍生物,如克拉霉素、罗红霉素、地红霉素、阿奇霉素等,提高了对酸的稳定性、增强了抗菌活性、毒副作用小;第三代为酮内酯抗生素(新一代MA衍生物),对过去的MA耐药菌有很好的作用且抗菌谱广,代表药物泰利霉素(telithromycin)等.
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新辅助化疗对子宫内膜癌VEGF mRNA表达的影响
目的 分析新辅助化疗对子宫内膜癌血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达的影响.方法 子宫内膜癌患者180例均经临床确诊,随机分为观察组与对照组各90例.对照组患者使用常规术后化疗,观察组患者使用新辅助化疗,比较2组患者治疗效果、VEGF mRNA表达情况及不良反应发生率的差异.结果 观察组总有效率高于对照组(83.3% vs 65.5%,P<0.05),各个分期VEGF mRNA表达均低于对照组(P<0.05),总不良反应发生率明显低于对照组(14.4% vs 34.4%,P<0.05).结论 新辅助化疗可以有效降低VEGF mRNA的表达,并降低不良反应的发生,提高其临床疗效,值得在临床推广使用.
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癌胚抗原信使核糖核酸与腹腔肿瘤关系的研究
癌胚抗原信使核糖核酸(CEA mRNA)是指导癌胚抗原(CEA)合成的模板,其基因组位于19号染色体上. 随着核酸类肿瘤标志物的不断被发现以及研究的深入,CEA mRNA与肿瘤的关系以及CEA mRNA在肿瘤的诊断、肿瘤行为的判断、对肿瘤疗效的评估、对肿瘤预后的判断等方面的研究也有了长足进展.
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黄芪复方对重症肌无力 IFN-γ及其mRNA表达水平的影响
目的:采用中药黄芪复方调控重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者血清干扰素-γ及其mR-NA表达水平,以探讨其治疗MG的可能作用机制.方法:应用酶联免疫吸附法检测60例MG患者治疗前后血清IFN-γ水平,采用RT-PCR方法检测患者用药前后IFN-γmRNA水平.结果:中药组MG患者治疗后血清IFN-γ水平(32.40±2.40)显著低于用药前(55.50±4.95)(P＜0.05),西药强的松组MG患者治疗后血清IFN-γ水平(31.85±3.00)显著亦低于用药前(57.70±3.11)(P＜0.05),组间用药前后差值均数比较无显著性差异(P＞0.05);中药组MG患者治疗后淋巴细胞IFN-γmRNA水平(0.40±0.31)明显低于治疗前(0.85±0.20)(P＜0.05),西药组MG患者治疗后淋巴细胞IFN-γmRNA水平(0.45±0.24)明显低于治疗前(0.90±0.11)(P＜0.05),组间用药前后差值均数比较无显著性差异(P＞0.05).结论:具有补益脾肾作用的中药黄芪复方可能通过下调MG患者IFN-γmRNA表达,降低IFN-γ水平,从而减少血中AchRAb的生成,缓解肌无力症状.
