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LC-MS-MS法测定参体和参须中人参皂苷Rb1,Rb2和Rc含量
目的:建立检测参体和参须中人参皂苷Rb1,Rb2和Rc的LC-MS-MS方法.方法:应用液质联用,C18色谱柱系统,采用梯度洗脱方法,A-水(0.05％FA),B-乙腈,A-B=65∶35,梯度洗脱(0～3 min,65％ B;3 ～4 min,100％B),流速0.35mL·min-1,柱温40℃,建立了参体和参须中人参皂苷Rb1,Rb2和Rc含量测定方法并进行了方法学考察.结果:建立了同时检测参体和参须中人参皂苷Rb1,Rb2和Rc含量测定方法.结论:该方法准确、简便、快速,可用于参体和参须的质量控制.
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人参皂苷Rb2体外抗感染研究
目的 研究人参皂苷Rb2对金黄色葡萄球菌的体外抗感染活性,为人参皂苷在抗感染类疾病中的应用提供理论依据.方法 采用胞外侵入试验和纤粘连蛋白黏附试验研究Rb2对金黄色葡萄球菌感染鼠肺上皮细胞的作用,并用RT-PCR方法检测对金黄色葡萄球菌相关基因表达的影响.结果 人参皂苷Rb2不能抑制金黄色葡萄球菌的生长,但是在浓度>0.1μmol/L时能够通过调节纤粘连蛋白相关基因agr、sarA和fnbA的表达降低金黄色葡萄球菌表面纤粘连蛋白对宿主细胞的黏附能力,从而降低对鼠肺上皮细胞的侵染.结论 人参皂苷Rb2的体外抗感染活性具有独立于机体免疫系统外的途径,主要通过调节金黄色葡萄球菌表面纤粘连蛋白相关基因的表达而降低对宿主的侵染.
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HPLC-ESI-MS/MS法同时测定珠子参中15种皂苷类化合物
目的 建立了高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定珠子参中15种皂苷类化合物(人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh2、人参皂苷F2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rf、三七皂苷R1、姜状三七皂苷R1、竹节参皂苷IVa)的检测方法.方法 采用Waters Sunfire TM C18色谱柱(150 mm× 1.5 mm,5μm),以含0.05％甲酸的乙腈-水(10∶90)为流动相,梯度洗脱分离,HPLC-ESI-MS/MS多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量.优化了色谱分离条件、质谱去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和碰撞池出口电压(CXP)等参数,并考察了浓缩温度、提取时间等对提取率的影响.结果 15种皂苷类化合物在0.000 9～2 952.592 3 μg/mL线性关系良好,r=0.999 6,检出限范围为0.003～626.554 ng/mL,定量限为0.075～1 762.150 ng/mL,平均加样回收率在98.15％～101.12％,RSD为0.82％～2.15％.结论 该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可以对珠子参中多种皂苷类化合物进行分析鉴定.
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不同干燥方法对人参花和西洋参花皂苷类成分的影响
目的 筛选适合人参Panax ginseng花和西洋参Panax quinquefolius花采收后的加工方法,以14种人参皂苷的质量分数为考察指标,评价不同干燥方法对人参花和西洋参花药材质量的影响.方法 采用HPLC法测定人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd及其相对应的丙二酰基人参皂苷(m-Rg1、m-Re、m-Rb1、m-Rc、m-Rb2、m-Rb3和m-Rd)的量.结果 西洋参花中人参皂苷在40℃烘干的条件下质量分数要比红外干燥、微波干燥和冷冻干燥的高,人参花中人参皂苷在40℃烘干的条件下质量分数要比冷冻干燥的高,并且随着烘干温度的升高质量分数都有不同程度降低,丙二酰基人参皂苷m-Re、m-Rg1、m-Rb1、m-Rc、m-Rb2、m-Rb3、m-Rd的质量分数在高温(＞100℃)时明显下降,且丙二酰基人参皂苷的减少量与相应的人参皂苷的变化量并没有明显的对等关系,这14种皂苷的总量也都有下降的趋势.结论 40℃烘干可使人参花和西洋参花中原有人参皂苷量保持在高水平,而高温处理则可使其转化为其他稀有皂苷.
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HPLC法同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷
目的 建立同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷的HPLC方法.方法 采用C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈和水,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃.结果 16种人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F2、Rg3、Rh2及原人参三醇、compound K、原人参二醇均得到良好分离,线性关系良好(r≥0.999 0).加样回收率均在95％～102％,RSD＜2％.结论 该方法快捷简便、稳定可靠,可应用于人参及其制剂的质量控制.
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一测多评法测定芪白平肺颗粒中8种皂苷类成分
目的建立一测多评法(QAMS)测定芪白平肺颗粒中8种皂苷成分的分析方法.方法 以芪白平肺颗粒为研究对象,以人参皂苷Rb1为内参物,计算人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、黄芪甲苷、人参皂苷Rd与人参皂苷Rb1的相对较正因子(f),通过f计算芪白平肺颗粒中7种成分,并在10批芪白平肺颗粒中进行验证,比较该方法与外标两点法测定结果的相似度.结果人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd、黄芪甲苷分别在进样量为0.416 0～4.992、0.315 4～3.785 2、0.259 6～3.115、0.385 2～4.622、0.222 8～2.674、0.193 2～2.318、0.183 5～2.202、0.574 6～6.895 μg线性关系良好,f值分别为1.244、1.075、1.133、1.090、1.071、1.070、0.967,且在不同条件下重复性良好.QAMS法的计算结果与外标两点法的测定结果无显著性差异,再验证结果也无显著性差异,实验所得的f值可信.结论建立的QAMS可以准确、快速地实现芪白平肺颗粒中多种皂苷类成分的定量测定.
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UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分
目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分(毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1)的方法.方法 采用正负离子切换多反应监测模式(MRM),ESI离子源;Phenomenex C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm)进行分离,流动相为甲醇(A)、乙腈(B)、5 mmol/L乙酸铵-0.05 mmol/L乙酸钠水溶液?,梯度洗脱,分析时间为7.0 min.结果 所测11种主要有效成分在测定浓度范围内线性关系良好,r均大于0.99;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为95.2％～104.4％,RSD≤4.64％.4个批次康艾注射液中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1测得量分别为0.004～0.006 μg/mL、0.002～0.003 μg/mL、125.75～148.00 μμg/mL、51.75～77.00 μg/mL、0.010～0.013 μμg/mL、51.50～87.75 μg/mL、27.83～30.73μg/mL、4.23～5.15 μg/mL、8.40～13.35 μg/mL、17.33～27.68 μg/mL和9.03～11.00 μg/mL.结论 首次建立可同时测定康艾注射液的11种主要成分的UPLC-MS/MS方法,该法操作简便,灵敏度高,专属性好,分析速度快,可用于康艾注射液的质量控制.
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HPLC-ELSD法同时测定心脑舒口服液中7种皂苷类成分
目的 建立同时测定心脑舒口服液(人参、黄芪、五味子、党参、麦冬)中人参皂苷Rg;人参皂苷Re;人参皂苷Rf;人参皂苷Rb1;人参皂苷Rb2;人参皂苷Rb3;黄芪甲苷的方法.方法 采用HPLC-ELSD法;Kromasil C18色谱柱;乙腈-水为流动相;体积流量为1 mL/min.结果 根据回归方程,7种成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、黄芪甲苷分别在0.202 8～2.028 μg (r=1.00),0.378 8～3.788μg (r=1.00),1.686 2～16.862 μg (r=1.00),0.843 4～8.434 μg (r=1.00),0.204 8～2.048 μg (r=1.00),0.1816～1.816μ g (r=1.00)和0.116 6～1.166 μg (r=1.00)范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.1％(RSD为1.1％),98.1％(RSD为0.87％),98.5％(RSD为0.58％),98.2％(RSD为0.58％),98.6％(RSD为0.49％),98.7％(RSD为1.1％),98.5％(RSD为0.42％).结论 该方法多种成分同时测定,操作简便、准确、重复性好,可用于心脑舒口服液的质量控制.
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碳纳米管结合人参皂苷Rb1、Rb2纳米乳经皮给药系统的制备
目的 制备碳纳米管结合人参皂苷Rb1、Rb2纳米乳经皮给药系统.方法 0.5％碳纳米管加入已制备的纳米乳中,透射电镜观察其结合状态,考察该给药系统的皮肤刺激性和透皮机制.再建立小鼠皮肤UVA损伤模型,评价其抗氧化活性.结果 碳纳米管对纳米乳具有很强的吸附作用,并在表皮层形成药物储库,从而增加人参皂苷Rb1、Rb2的透皮渗透量.给药系统组小鼠皮肤组织中SOD活性显著高于模型组和纳米乳组(P＜0.01),MDA含有量显著减少(P＜0.01).结论 碳纳米管结合人参皂苷Rb1、Rb2纳米乳经皮给药系统对皮肤刺激性小,并可使药物更好地透过皮肤以发挥抗氧化活性.
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人参皂苷Rb2对高脂性脂肪肝小鼠肝脏脂质代谢的影响及其机制
目的:探讨人参皂苷Rb2对高脂性脂肪肝小鼠肝脏脂质代谢的影响及其机制.方法:雄性C57BL/6J小鼠18只,随机分为正常对照组、高脂模型组和人参皂苷Rb2组.正常对照组用10% kcal对照饲料喂养,其余用60% kcal高脂饲料喂养8周,按分组情况分别予PBS或人参皂苷Rb2(40 mg·kg-1·d-1)腹腔注射10 d.HE染色观察脂肪变性程度,荧光定量PCR检测肝脏脂肪代谢相关基因的表达,荧光定量PCR和Western blot检测肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α表达.结果:人参皂苷Rb2明显减轻肝质量,改善肝脂肪变性,下调脂肪酸合成酶(FAS)、脂蛋白脂酶(LPL)、固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1c和上调肉碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)、胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)的mRNA水平,增加PPARα基因和蛋白的表达.结论:人参皂苷Rb2可以改善小鼠脂质代谢,其作用机制可能与增加肝中PPARα表达,调节脂代谢相关靶基因SREBP-1c、FAS和CYP7A1表达有关.
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人参水提物在Caco-2模型的吸收特征
目的 建立Caco-2细胞单层模型,探讨人参水提物的吸收特征.方法 将Caco-2细胞以1×105 个/cm2的密度接种于Millicell小室,培养21 d,以TEER值、阳性对照药荧光黄和普萘洛尔的Papp值来评价模型的完整性、紧密性和通透性.进行人参水提物AP-BL和BL-AP两个方向的转运实验,用HPLC/MS对标志性成分进行分析,计算Papp、外排比(Efflux ratio)和转运量.结果 TEER值和阳性对照药的Papp值均达到要求.水提物中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Ro的Papp AP-BL分别为(4.97±1.28)×10-6、(3.88±0.93)×10-6、(2.54±0.18)×10-6、(2.51±0.44)×10-6、(2.21±0.46)×10-6和(0.65±0.09)×10-6cm·s-1,Papp BL-AP分别为(4.61±0.67)×10-6、(4.32±0.83)×10-6、(3.05±0.37)×10-6、(3.53±0.27)×10-6、(3.24±0.24)×10-6和(1.45±0.16)×10-6 cm·s-1.人参皂苷Rg1单体的Papp AP-BL为(0.39±0.02)×10-6 cm·s-1,Papp BL-AP为(0.47±0.01)×10-6 cm·s-1.结论 Caco-2细胞单层模型建立成功.水提物中三醇型人参皂苷的吸收优于二醇型,吸收一般;齐墩果烷型人参皂苷Ro吸收差,可能存在主动外排作用.水提物中其它成分可促进人参皂苷Rg1的吸收.
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人参皂苷Rb2在大鼠肠外翻实验中吸收特征的研究
目的 利用大鼠肠外翻模型研究人参皂苷Rb2在不同肠段的吸收特征,考察其是否存在分段吸收的差异.方法 采用大鼠肠外翻模型,将不同肠段(十二指肠、空肠、回肠、结肠)的肠管外翻模型置于含0.2 mg/ml Rb2的Tyrode液中,在不同时间点取样并用高效液相色谱测定囊内药物浓度,通过Rb2的吸收参数分析其在肠道中的吸收特征.结果 人参皂苷Rb2在十二指肠呈现明显主动吸收,空肠和回肠也能够主动吸收人参皂苷Rb2;但在结肠表现为简单扩散特征.结论 人参皂苷Rb2能够通过十二指肠、空肠和回肠部位主动吸收.
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HPLC法同时测定生脉散中4种人参皂苷类成分的含量
目的:建立同时测定生脉散中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rd含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为ZORBAX Extend-C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,检测波长为203 nm,柱温为30℃,进样量为10μl.结果:人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rd的检测进样量线性范围分别为0.78~38.75、0.51~25.50、0.43~21.50、0.20~10.00μg(r分别为0.9996、0.9996、0.9997、0.9997);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2%;加样回收率分别为96.6%~101.2%、97.0%~102.1%、99.1%~102.8%、96.3%~101.1%,RSD分别为1.6%、1.7%、1.3%、1.6%(n=6).结论:该方法简便、快速、稳定性和重复性好、精密度高,可用于生脉散的质量控制.
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不同产地人参根和根茎中人参皂苷的含量分析
目的:研究不同产地人参根和根茎中14个人参皂苷的含量,为制定人参皂苷的质量标准提供科学依据.方法:采用Diamonsil(R) ODS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈和乙腈-水-0.1％磷酸水溶液(5∶90∶8,ν/v/v)为流动相,梯度洗脱,203 nm波长处二极管阵列检测器检测,外标对照品法测定人参根和根茎中人参皂苷(G)Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Ro,20-0-葡萄糖基人参皂苷Rf(20-GG-Rf),三七人参皂苷(NG)R1、R2 14个化合物.结果:不同产地人参根和根茎中人参皂苷含量的变化较大,26批次五年生人参根和根茎样品中14个人参皂苷的含量(μm·g-1,人参根和根茎)变化幅度分别为G-Ra1,0～2 958;G-Ra2,0～1 320;G-Rb1,1 195～7 129;G-Rb2,835～6 993;G-Rb3,178～1 812;G-Rc,414～5 569;G-Rd,393～5 529;G-Re,603～3 564;G-Rf,301～1 504;G-Rg1,738～4 710;G-Ro,893～8 569;20-GG-Rf,110～656;NG-R1,74～778;NG-R2,0～844.结论:G-Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc和Rd为典型的原人参二醇型人参皂苷,G-Re、Rf、Rg1,20-GG-Rf、NG-R1和R2为典型的原人参三醇型人参皂苷,G-Ro为典型的齐墩果酸型人参皂苷,三大类人参皂苷能代表体现人参药物活性的皂苷成分.其中,又以G-Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Ro和20-GG-Rf含量更高,作为判定人参根和根茎中人参皂苷质量的指标性成分更科学.
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LC-MS/MS法同时测定参芍胶囊中人参皂苷和芍药苷的含量
目的:建立高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定参芍胶囊中人参皂苷Rb2、Rd、Re、Rg1和芍药苷的含量.方法:采用Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm),以乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱(0～10 min,15％乙腈→40％乙腈;10～13 min,40％乙腈→70％乙腈),流速0.3 mL· min-1,柱温40C;采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)模式,负离子检测.结果:人参皂苷Rb2、Rd、Re、Rg1和芍药苷的线性范围分别为0.01～12.66 μg· mL-1(r=0.999 7)、0.01～10.34 μg·mL-1(r=0.999 6)、0.02～17.44μg`mL-1(r=0.999 1)、0.02～17.29 μg· mL-1(r=0.999 1)和0.01～11.76 μg`mL-1(r=0.999 9),平均加样回收率(n=6)均在96.8％～100.1％范围内.3批样品中人参皂苷Rb2、Rd、Re、Rg1和芍药苷的含量测定结果分别为3.903～3.990、6.555～6.628、10.69～11.42、7.024～8.381和84.65～86.87 mg·g-1.结论:所建立的方法可用于参芍胶囊的质量控制.
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人参皂苷Rb2致中国仓鼠肺细胞染色体畸变的作用
目的:研究人参皂苷Rb2致中国仓鼠肺细胞(Chinese hamster lung cells,CHL)染色体畸变的作用.方法:细胞计数法测定人参皂苷Rb2对CHL细胞的半数抑制浓度(50％inhibition concentration,IC50),根据IC50设立不同剂量组,进行CHL细胞染色体畸变试验,分别观察人参皂苷Rb2染毒6、24 h及加S9后染毒6 h CHL细胞染色体的数目及结构变化,进行染色体畸变分析.结果:人参皂苷Rb2染毒6、24 h及加S9后染毒6 h CHL细胞染色体畸变均为阴性.结论:在本试验条件下,人参皂苷Rb2未引起CHL细胞染色体产生畸变.
