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LMP-1基因慢病毒载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞的表达
目的:构建人LMP-1重组慢病毒载体,体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,检测LMP-1基因在大鼠骨髓间充质干细胞的表达.方法:利用PCR法从cDNA文库中钓取LMP-1基因,将其与经Age Ⅰ酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU-EGFP相连接,转化感受态大肠杆菌,筛选出阳性克隆pGC-FU-LMP-1-EGFP,基因测序对其鉴定.经293T细胞包装后,收集富含病毒颗粒LV-LMP-1-EGFP的细胞上清,浓缩并标定滴度,RT-PCR检测并鉴定.以佳MOI值体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜观察转染是否成功,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR和Western blot检测转染细胞LMP-1基因的表达.结果:①基因测序及RT-PCR检测证实携带人LMP-1基因的慢病毒载体构建成功,包装后获得滴度为2× 108 TU/ml的LV-LMP-1-EGFP.②以MOI=100转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜下可见大量绿色荧光蛋白表达,转染效率可达93.5％,经RT-PCR与Western blot检测,被转染细胞内有LMP-1基因表达.结论:成功构建携带人LMP-1基因的慢病毒载体,可高效转染大鼠骨髓间充质干细胞,被转染细胞可高效表达LMP-1基因.
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LMP-1 mRNA反义寡核苷酸抑制大鼠成骨细胞的分化
为深入探讨LIM矿化蛋白1(LMP-1)在成骨细胞分化中的作用,体外培养大鼠成骨细胞,在培养基中加入LMP-1反义寡核苷酸(LMP-1 antisense 终浓度为0.8mol/L),以阻断大鼠成骨细胞中LMP-1 mRNA的表达.对照组加nonsense(终浓度为0.8mol/L).测定细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性、培养基中骨钙素 (OC)的含量,免疫组化分析Ⅰ型胶原蛋白的表达,Northern blotting 检测Ⅰ型胶原mRNA的表达.结果显示: LMP-1 mRNA被LMP-1antisense阻断后,ALP活性降低、OC分泌减少、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA的表达下降.上述结果表明: LMP-1 mRNA被LMP-1反义寡核苷酸阻断后,成骨细胞分化受到明显的抑制,提示LMP-1是成骨细胞分化必不可少的正调节因子.
关键词： LMP-1 LMP-1反义寡核苷酸 成骨细胞的分化 -
鼻咽癌组织内EBV感染与c-myc、bcl-2、Bax表达和癌细胞增殖、凋亡的关系及临床意义
目的 研究鼻咽癌(NPC)组织内EBV感染与c-myc、bcl-2、Bax的表达和癌细胞增殖、凋亡的相关性及与NPC预后的关系.方法 原位杂交方法检测51例鼻咽非角化性癌(NKC)中EBERs的表达率,并用免疫组化EnVision二步法检测35例生存期＜5年的NKC、60例生存期≥5年的NKC及30例鼻咽黏膜慢性炎症组织(NP)中EB病毒潜伏膜蛋白-1(LMP-1)、c-myc、bcl-2、Bax、Ki-67和M30的表达水平,并计数增殖指数(PI)和凋亡指数(AI).结果 ①51例NKC患者EBERs的表达率为70.6%,LMP-1表达率为68.6%,两者呈正相关(P＜0.005);②生存期＜5年、≥5年及NP组中LMP-1、c-myc的阳性表达率依次递减,各组差异显著(P＜0.05);③bcl-2和Bax在NKC组阳性率分别为66.3%和56.8%;bcl-2/Bax的比值与患者的预后相关;LMP-1的表达与bcl-2/Bax＞1的表达呈正相关(P＜0.05);④LMP-1、c-myc的表达及bcl-2/Bax的比值与PI指数呈明显正相关(P＜0.05),而与AI指数无明显相关性;⑤LMP-1与c-myc的表达呈正相关(r=0.673,P＜0.005),且二者共同表达时的PI值较单独表达时明显增高(P＜0.05).结论 LMP-1、c-myc的表达及bcl-2/Bax的比值与NKC细胞的失控性增殖和预后密切相关,且LMP-1与c-myc在NKC发生、发展过程有相互增强的协同作用,提示上述基因可作为预测肿瘤恶性度及判定预后的参考指标.
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鼻咽癌转移机制与LMP-1关联性的光学表征
中国的东南部是全球鼻咽癌高发区域之一,对鼻咽癌转移机制的研究存在强烈的需求.凭借可视化光子技术研究鼻咽癌转移机制与LMP-1癌蛋白的关联性,探索早期预测癌转移的潜在可能并进行调控干预,提高患者的生存率,具有医学理论意义和临床应用价值.本文综述了近年来相关研究的发展趋势,特别是高分辨光学成像技术与荧光相关光谱技术的新进展.展望了以鼻咽癌细胞调控的LMP-1为特异性靶标,结合高灵敏度分子荧光探针技术,获取癌细胞脂筏微区的高分辨光学成像和LMP-1动态聚集特性的光学表征,达到可视化且半定量地预测鼻咽癌转移的倾向,为有效地提高鼻咽癌患者治愈率提供新思路和理论支持.
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Bcl-2和EB病毒与B细胞淋巴瘤关系的研究进展
Bcl-2蛋白能抑制细胞调亡，与肿瘤的发生、转化及转移有关。50％～80％的滤泡性淋巴瘤，10％～25％的弥漫性大细胞性B细胞淋巴瘤中有Bcl-2蛋白的表达。EB病毒(EBV)与免疫缺陷相关性BCL密切相关，而与非免疫缺陷相关性BCL的相关性较小。EBV在体外可以诱导B淋巴细胞表达Bcl-2蛋白。该病毒可能通过LMP-1诱导Bcl-2的表达参与了免疫缺陷相关性BCL的发病。
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LMP-1、EBNA-2在滤泡上皮起源甲状腺肿瘤中的表达及意义
目的 研究EB病毒LMP-1、EBNA-2在滤泡上皮起源甲状腺肿瘤中的意义.方法 应用Envision二步免疫组织化学方法检测LMP-1、EBNA-2在30例甲状腺乳头状癌、11例甲状腺滤泡癌、3例甲状腺未分化癌、9例滤泡腺瘤及5 例桥本甲状腺炎中的表达.结果 甲状腺肿瘤中LMP-1与EBNA-2表达均主要位于细胞质,偶见于细胞核,癌旁甲状腺组织为阴性;LMP-1和EBNA-2在甲状腺癌和滤泡腺瘤、乳头状癌和滤泡癌的表达差异均无统计学意义(P＞0.05);LMP-1与EBNA-2在甲状腺乳头状癌和滤泡癌的表达无相关性.结论 推测部分甲状腺癌的发生及演变可能与EBV感染有关,两者的关系还有待于进一步研究和探讨.
关键词： 滤泡上皮起源甲状腺肿瘤 LMP-1 EBNA-2 免疫组化 -
EB病毒诱发淋巴瘤中LMP的表达
背景与目的:EB病毒潜伏膜蛋白-1(latent membrane protein-1,LMP-1)是一种病毒癌蛋白,可能在淋巴瘤发生中起重要的作用.本文旨在了解EB病毒诱发的淋巴瘤细胞与正常人淋巴细胞中LMP的差异表达情况.方法:应用实时定量PCR方法检测EB病毒诱发淋巴瘤细胞和正常人淋巴细胞中LMP (LMP-1、LMP-2A及LMP-2B)的差异表达情况.采用Western blot检测LMP-1蛋白表达.结果:建立了EBV诱发淋巴瘤的动物模型获得诱发淋巴瘤,检测LMP-1、LMP-2A、LMP-2B在诱发淋巴瘤细胞及正常人淋巴细胞中的表达情况.实时定量PCR结果表明,LMP-1在诱发淋巴瘤细胞中的表达比在正常细胞中的表达上调255.7倍,表达差异有统计学意义(P＜0.05),LMP-2A在诱发淋巴瘤细胞中的表达比在正常细胞中的表达上调37.74倍,表达差异有统计学意义(P＜0.01),LMP-2B在诱发淋巴瘤细胞中的表达比在正常细胞中的表达上调330.63倍,表达差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果表明LMP-1在诱发的淋巴瘤细胞中的表达比在正常淋巴细胞中的表达上调.结论:在EB病毒诱发的淋巴瘤发生过程中LMP可能起重要作用.
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鼻咽癌细胞凋亡与细胞毒淋巴细胞和LMP-1表达之间的关系
目的:探讨鼻咽癌细胞凋亡与肿瘤内细胞毒淋巴细胞和LMP-1表达之间的关系.方法:收集未经治疗的鼻咽癌活检组织38例,采用TUNEL法定量检测鼻咽癌细胞凋亡程度,用免疫组化法检测肿瘤细胞LMP-1表达情况和肿瘤内TIA-1+细胞毒淋巴细胞数.结果: (1) 38例鼻咽癌组织学分为角化性鳞癌7例,非角化性癌 8例,未分化癌23例.平均凋亡指数分别为72.3、74.6和30.7.角化性鳞癌和非角化性癌与未分化癌相比,差异有显著性(P<0.05);(2) 38例中LMP-1阳性病例19例,占50%.除外角化性鳞癌后,LMP-1阳性组平均凋亡指数为51.7,高于LMP-1阴性组的37.3,差异有显著性(P<0.05);(3) 每1 000个癌细胞范围内浸润的TIA-1+细胞数为3～75个;在角化性鳞癌中平均12,低于非角化性癌和未分化癌(平均21.4),差异有显著性(P<0.05);除外角化性鳞癌后,TIA-1+细胞数多者凋亡指数较高(r=0.4047, P<0.05).结论∶(1) 鼻咽癌细胞凋亡程度在不同组织学类型中差异有显著性; (2)鼻咽癌组织内TIA-1+细胞数在不同的组织学类型中有差别;(3) 非角化性鼻咽癌组织中,LMP-1阳性者凋亡指数高,TIA-1+细胞数多者凋亡指数高.说明细胞毒淋巴细胞和LMP-1的表达具有促进鼻咽癌细胞凋亡的作用.
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EB病毒LMP-1筛查鼻咽癌的诊断效果分析
鼻咽癌传统检查主要依赖于鼻咽镜检查或病变组织取样进行病理学检查[1],由于上述检查均具有侵袭性,且部分患者需反复取样活检[2],故不是鼻咽癌筛查和诊断的理想手段.因此,有必要寻找能够早期筛查鼻咽癌的简便方法,为临床早诊断、早治疗提供依据.本科室收集鼻咽癌患者的鼻咽拭子标本,采用免疫组化和PCR法检测鼻咽癌组织中的LMP-1表达,分析两种方法检测LMP-1水平筛查鼻咽癌的效果,为LMP-1应用于鼻咽癌的早期筛查提供依据.
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MMP-9、LMP-1在鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中的表达及意义
目的 通过检测鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、潜伏膜蛋白-1(LMP-1)蛋白的表达及分布情况,探讨两者间的相互关系,为临床治疗和预后判断提供依据.方法 采用免疫组化S-P法检测20例鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中MMP-9、LMP-1的表达情况,同时与组织芯片中其他类型淋巴瘤及10例淋巴组织反应性增生进行比较.结果 鼻NK/T细胞淋巴瘤组中MMP-9、LMP-1阳性表达率分别为90.0%(18/20)和45.0%(9/20);组织芯片包含的B细胞淋巴瘤组及外周T细胞淋巴瘤组MMP-9的阳性表达率分别为61.1%(11/18)、50.0%(6/12),LMP-1的阳性表达率分别为11.1%(2/18)、25.0%(3/12).淋巴组织反应性增生组未见LMP-1的阳性表达, MMP-9的阳性表达率为30.0% (3/10).鼻NK/T细胞淋巴瘤组MMP-9、LMP-1 阳性表达率与淋巴组织反应性增生组比较差异有统计学意义(P＜0.05),MMP-9与LMP-1表达呈正相关(r=0.327,P＜0.05).结论 MMP-9在鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中存在高表达,与EB病毒感染关系密切,LMP-1能上调MMP-9表达,可能与鼻NK/T细胞淋巴瘤的高度侵袭性有关.
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EB病毒LMP-1、BALF4及BARF1片段的B细胞表位预测
目的:预测EB病毒LMP-1、BALF4及BARF1片段的B细胞表位.方法:采用Protean软件分析EBV的LMP1、BALF4及BARF1三个氨基酸片段的亲水性、表面可能性、抗原指数及其二级结构中的柔性区域,并结合吴玉章的抗原指数预测法预测其B细胞表位.结果:B细胞表位可能位于LMP-1 N端第356-58,2-19,249-314区段,BARF1N端第8-11,18-25,41-49,203-211区段,BALF4N端第385-387,833-845,398-415,427-435,453-458,23-32,466-473,234-250,642-652区段；另外LMP-1第185-223、BARF1第265-272,132-135以及BALF4第827-832区段内或附近也可能存在B细胞表位.结论:用多参数同时预测LMP-1、BALF4及BARF1的B细胞表位,为制备高效的鼻咽癌血清学诊断试剂和表位疫苗奠定了理论基础.
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LMP-1转染人胎盘源间充质干细胞前后蛋白质组学研究
目的:采用蛋白质组学技术检测LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)转染人胎盘源间充质干细胞(Human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPDMSCs)前后蛋白质组学改变.方法:提取hPDMSCs LMP-1和hPDMSCsvector细胞总蛋白,通过二维凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)制备两组细胞的二维电泳图谱,并用PDQuest软件进行图像分析,寻找差异表达的蛋白质点,并用基质辅助激光解吸粒子-飞行时间电离质谱(matrix-assisted laser desorption-ionization time-of-flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析技术对这些差异表达的蛋白质点进行鉴定,并选取6个与成骨相关的蛋白(PCNA,vimentin,annexin A1,annexin A2,eEF2和peroxiredoxin-1)作为验证对象,蛋白质印迹法检测各蛋白在两组细胞中的表达水平.结果:采用2-DE技术建立了hPDMSCsLMP-1和hPDMSCsvector两组细胞的二维电泳图谱;PDQuest软件分析图像发现两组细胞有22个差异蛋白质点,采用MALDI-TOF-MS质谱初步鉴定出15个蛋白质点,其中表达上调9个,下调6个.Western blot检测结果与蛋白质组学一致.结论:LMP-1基因转染hPDMSCs后共筛选获得15个差异表达的蛋白,它们是成骨分化潜在的重要参与者,为进一步阐明LMP-1对hPDMSCs细胞功能和成骨分化影响的分子机制奠定基础.
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胞内信号分子LIM矿化蛋白1的研究进展
LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是LIM结构域蛋白家族成员, 由Boden首先发现[1].相关体内外研究表明, LMP-1是一种胞内非分泌蛋白, 不仅影响骨基质的矿化,而且还是胚胎骨的发育和成骨细胞分化过程中重要的正调节因子[1～4].近期研究表明[5～7],LMP-1在人牙髓牙本质复合体及牙周膜细胞也有表达并发挥了重要作用.本文就LMP-1的结构特点、分布、作用及应用前景作一综述.
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潜伏膜蛋白-1与鼻咽癌的研究现况及进展
EBV病毒是一种人类疱疹病毒,与多种肿瘤的发生有关,而该病毒编码的癌基因蛋白潜伏膜蛋白-1(LMP-1)影响着鼻咽癌的发生发展.本文通过对LMP-1与鼻咽癌的研究状况及进展做一综述,为针对鼻咽癌LMP-1的治疗提供新的思路.
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环氧化酶-2及潜伏膜蛋白-1在鼻咽癌中的表达及其临床意义
目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)、潜伏膜蛋白-1(LMP-1)在鼻咽癌的表达及临床意义.方法 用SP免疫组织化学法检测76例鼻咽癌活检标本(鼻咽癌组)和32例正常鼻咽黏膜组织常规石蜡切片标本(正常组)的COX-2、LMP-1的表达情况,分析其与鼻咽癌的临床分期及颈部转移的关系.结果 鼻咽癌组中COX-2及LMP-1在的阳性率分别为73.6％和63.2％,高于正常组织的6.2％和9.4％(均P＜0.01).颈部淋巴结转移组的COX-2及LMP-1表达的阳性率分别为83.6％和80.0％,均高于无颈部淋巴结转移组的47.6％和57.1％(P＜0.01或0.05).而鼻咽癌组中的早期与晚期的COX-2及LMP-1的阳性率差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 COX-2、LMP-1在鼻咽癌的发生及颈部淋巴结转移有重要的意义.
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EB病毒转化淋巴母细胞LMP-1,LMP-2A及LMP-2B的表达
了解EB病毒转化淋巴母细胞LMP-1,LMP-2A,LMP-2B基因的表达改变.采用实时定量PCR方法分别检测并比较同一献血员来源的正常人淋巴细胞与EBV转化淋巴母细胞前后LMP基因(LMP-1、LMP-2A、LMP-2B)的表达改变.采用Western bolt检测LMP-1蛋白表达.LMP-1、LMP-2A、LMP-2B基因在转化淋巴母细胞比在正常人淋巴细胞的表达分别上调863倍、1 763倍、90 078倍.Western bolt检测LMP-1蛋白在转化淋巴母细胞中的表达比正常人淋巴细胞明显增强.在EBV转化淋巴母细胞过程中LMP-1、LMP-2A和LMP-2B表达均上调.
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T-cadherin和LMP-1在鼻咽癌中的表达及相关性研究
目的 检测鼻咽癌组织中T-cadherin和LMP-1的表达情况,探讨两者的相关性及T-cadherin与鼻咽癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化SP法检测50例鼻咽癌组织和20例鼻咽炎症组织中T-cadherin及LMP-1表达,并结合临床病理特征进行分析.结果 T-cadherin在鼻咽炎症组织阳性表达率为100％ (20/20),而在鼻咽癌组织中的阳性表达率仅为40％ (20/50).经x2检验两者差异有显著性意义(P＜0.01).LMP-1在鼻咽癌组织中阳性表达率为64.0％ (32/50),而在鼻咽炎症组织阳性表达率为20.0％ (4/20).经x2检验两者差异有显著意义(P＜0.01).Spearman相关分析显示鼻咽癌组织中LMP-1与T-cadherin的表达呈负相关.T-cadherin在鼻咽癌组织中的表达情况与TNM分期和颈淋巴结转移负相关.T-cadherin在鼻咽癌组织中的表达情况与患者年龄、性别、肿瘤瘤体直径大小等因素无显著相关.结论 在鼻咽癌组织中存在T-cadherin的表达缺失或低水平表达,与LMP-1在鼻咽癌组织中异常高表达呈负相关,提示T-cadherin和LMP-1在鼻咽癌的发生、发展和转移中起着重要的作用.
关键词： T-cadherin 鼻咽癌 LMP-1 免疫组织化学 -
bcl-2蛋白、LMP-1表达与恶性淋巴上皮病关系的研究
目的：观察涎腺恶性淋巴上皮病中bcl-2 蛋白和EB 病毒潜在膜蛋白(LMP-1)表达与恶性淋巴上皮病的关系。方法：用免疫组化Envison 法检测10 例恶性淋巴上皮病中bcl-2 蛋白和LMP-1 的表达。结果：LMP-1 阳性表达率为80%(8/10)，bcl-2蛋白的阳性表达率为70%(7/10)，两种指标的表达率在恶性淋巴上皮病中无明显差别。结论：EB 病毒感染和bcl-2 蛋白阳性表达与恶性淋巴上皮病有关，EB 病毒感染是否是恶性淋巴上皮病的病因有待进一步阐明。
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EB病毒转化淋巴母细胞及诱发瘤中LMP基因的表达
目的了解EB病毒在正常人淋巴细胞、体外培养的EBV转化的淋巴母细胞及诱发的淋巴瘤细胞三种细胞中LMP的表达情况及表达差异。方法采用实时定量PCR方法检测LMP基因在三种细胞中的表达改变。采用Western bolt检测LMP-1蛋白表达。结果实时定量PCR检测LMP基因在三种细胞中均有表达。同正常细胞相比，LMP-1、LMP-2A、LMP-2B在转化细胞中表达上调，在诱发瘤细胞中表达也上调，且这三个基因在转化母细胞中表达的上调幅度均大于其在诱发瘤中的表达。结论 EB病毒在体内和体外可能通过不同的方式诱导细胞突变，促进肿瘤的发生。
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EB病毒LMP-1蛋白与Fas系统在非霍奇金淋巴瘤的表达及意义
目的:研究EB病毒LMP-l、Fas、FasL在NHL的表达及意义.方法:采用免疫组化S-P法对于9例NHL进行LMP-1及Fas系统的检测.结果:LMP-1、Fas、FasL表达在NHL均比对照组明显增高;LMP-1的表达与Fas、FasL呈正相关;FasL低表达,Fas高表达;呈不平衡表达;Fas、FasL的表达与淋巴瘤免疫表型及疾病分期无关.结论:LMP-1可上调Fas系统,Fas系统在感染EBV淋巴细胞的恶性转化可能起重要作用,通过FasL低表达,影响CTL的功能,抵抗肿瘤的免疫监视所致.
