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CASR和caspase3在妊娠期高血压疾病中的研究
目的 探讨在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中CASR和caspase3的表达情况与其胎盘急性动脉粥样硬化的发病关系.方法 通过免疫组织化学方法检测妊娠期高血压组(对照组),子痫前期轻度组、重度组患者胎盘急性动脉粥样硬化组织中CASR和caspase3的表达情况.结果 ①妊娠期高血压疾病患者胎盘急性动脉粥样硬化组织中CASR对照组与子痫前期轻度组、子痫前期重度组比较,差异有统计学意义.②妊娠期高血压疾病患者胎盘急性动脉粥样硬化组织中caspase3在子痫前期重度组与子痫前期轻度组比较,差异有统计学意义.③胎盘急性动脉粥样硬化组织中CASR和caspase3表达量呈正相关关系.结论 妊娠期高血压疾病患者胎盘急性动脉粥样硬化组织中CASR的蛋白表达升高和caspase3激活及过度增高,可能在妊娠期高血压疾病胎盘发生急性动脉粥样硬化的病理改变中起重要作用.
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瑞芬太尼预处理对氧化损伤脐静脉内皮细胞的保护作用
目的 研究瑞芬太尼预处理对过氧化氢处理的脐静脉内皮细胞的保护机制.方法 采用5 ng/mL瑞芬太尼预处理脐静脉内皮细胞,然后给予过氧化氢处理,采用MAPK转导通路阻断剂阻断MAPK的p38、JNK或ERK途径,检测caspase 3活性,初步确定作用通路.用5 ng/mL瑞芬太尼进行预保护,荧光定量反转录聚合酶链反应(QRT-PCR)观察通路阻断前后c-JUN的表达水平,确定c-JUN作用.结果 Caspase 3活性在阻断JN K途径后降低,JN K通路被阻断后瑞芬太尼保护作用消失;过氧化氢处理后细胞内c-JU N上调,经瑞芬太尼处理后c-JUN下调,JNK通路被阻断后瑞芬太尼无法下调c-JUN.结论 5 ng/mL瑞芬太尼通过激活JNK通路及其下游信号分子c-JUN,对过氧化氢处理的脐静脉内皮细胞起到抗凋亡保护作用.
关键词： 瑞芬太尼 过氧化氢 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
激素性股骨头坏死早期细胞凋亡相关基因表达及阿仑磷酸钠的干预
背景:近年研究发现激素性股骨头坏死病例中凋亡的骨细胞增多,因此认为激素性股骨头坏死是骨细胞凋亡所致,而并非缺血性坏死.目的:观察大鼠激素性股骨头坏死早期bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,caspase-3)的表达,以及阿仑磷酸钠的干预效果.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/2007-02在吉林大学基础医学院病理实验审完成.材料:健康Wister大鼠100只,随机分为正常对照组、激素模型组、藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组、联合用药组,20只,组.藻酸双酯钠片为占林东丰制药厂产品,阿仑磷酸钠为杭州默沙东制药有限公司产品.方法:除正常对照组外,其余4组大鼠均给予醋酸泼尼松龙臀肌注射建立激素性股骨头坏死模型.藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组分别灌服对应药物,联合用药组灌服藻酸舣酯钠+阿仑磷酸钠.各组肌注用药1次/周,灌服药1次/d,实验持续6周.所有大鼠均强迫间断站立,4 h/d.主要观察指标:光镜观察股骨头病理变化.S-P免疫组织化学染色法检测股骨头组织bcl-2、caspase-3的表达.结果:给药第4周与正常对照组比较,激素模型组股骨头坏死现象明显,骨小梁变细甚至断裂,空骨陷窝数量明显增多(t=2.629,P＜0.01);藻酸双酯钠组骨小梁和空骨陷窝数量介于前2组之间(t=1.713,P＜0.01);阿仑磷酸钠组、联合用药组骨小梁和宅骨陷窝数量接近正常对照组(t=1.462,t=1.657,P＞0.05).与激素模型组比较,藻酸双酯钠组、阿仑磷酸钠组、联合用药组股骨头组织bcl-2阳性细胞率均明显升高(t=2.146,P＜0.05t t=2.815,P＜0.01;t=2.947,P＜0.01),caspase-3阳性细胞率均明显降低(t=2.97,P＜0.01;t=2.462,P＜0.01;t=1.854,P＜0.05),其中阿仑磷酸钠组及联合用药组升高尤为明显(t=2.503,t=1.959,P＜0.05).结论:大剂量激素可能通过抑制bcl-2表达和促进caspase-3表达引起股骨头坏死.阿仑磷酸钠可能通过与其相反的途径来防止骨细胞凋亡,从而预防早期激素性股骨头坏死.
关键词： 激索性股骨头坏死 早期 骨细胞凋亡 Bcl-2 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
黄芪注射液腹腔注射脑缺血再灌注模型大鼠海马组织神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达
背景:有研究表明黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡.目的:观察黄芪注射液腹腔注射脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达.方法:采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注大鼠模型,建模后给予质量浓度2,4,6,8和10 mL/kg的黄芪注射液腹腔注射,并设立假手术组.分别采用原位末端标记法染色和蛋白免疫印迹方法检测各组大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达.结果与结论:模型组大鼠海马神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达明显增多(P < 0.05);与模型组相比,黄芪注射液4,6,8,10 mL/kg组海马神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达明显减少(P < 0.05);与黄芪注射液4 mL/kg组比,黄芪注射液6,8,10 mL/kg 组神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达减少(P < 0.05),且呈剂量依赖性.结果证实,黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达.
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高压氧和氯化血红素联合干预对一氧化碳中毒大鼠脑半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响
目的:观察高压氧和氯化血红素联合治疗对急性一氧化碳中毒大鼠脑海马内凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响,并与单纯应用高压氧治疗进行比较.方法:实验于2005-01/05在华北煤炭医学院解剖学实验室完成.取200只雄性SD大鼠随机分成4组各50只:①模型组:大鼠放入染毒罐,然后向罐内注入体积分数为0.998一氧化碳气体,60 min后取出.②高压氧组:造模同模型组,造模后立即进行高压氧治疗,0.2 MPa,升压30 min,稳压给氧60 min,减压40 min.1次/d.③高压氧+氯化血红素组:除给予高压氧组同样的处理外,于一氧化碳中毒后立即腹腔注射氯化血红素30mol/kg,3次/d.④对照组:不作任何处理.4组均于造模后1,3,5,7和14 d各处死10只大鼠,分别行免疫组化染色和免疫蛋白印迹法,观察大鼠脑海马区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数和灰度值的变化.结果:200只大鼠全部进入结果分析.①脑海马区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数:模型组各个时间点显著高于对照组(P＜0.05),中毒后5 d达高峰[(87.9±1.4)个/视野,P＜0.05];高压氧组和高压氧+氯化血红素组各个时间点阳性细胞数均低于模型组(P＜0.05);而高压氧+氯化血红素组低于高压氧组(P＜0.05).②脑海马区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的灰度值:模型组各个时间点显著高于对照组(P＜0.05),中毒后5 d达高峰(89.1±1.4);高压氧组和高压氧+氯化血红素组各个时间点均低于模型组(P＜0.05);而高压氧+氯化血红素组低于高压氧组(P＜0.05).结论:急性一氧化碳中毒后大鼠脑海马区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达升高,高压氧和氯化血红素联合治疗显著降低其表达,效果优于单纯高压氧治疗.
关键词： 一氧化碳中毒 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 高压氧 氯化血红素 -
三七总皂苷干预脊髓损伤大鼠诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的变化
目的:观察三七总皂苷注射液对大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的作用机制.方法:实验于2005-06/11在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成.将64只SD大鼠数字表法随机分为损伤组和三七总皂苷组(n=32),2组按存活时间分为1,3,7,14 d 4个时间点,每个时间点8只.所有大鼠采用Allen's法制备脊髓中度损伤模型(致伤能量为40 g·cm),三七总皂苷组伤后30 min腹腔注射50 mg/L三七总皂苷100mg/kg,伤后2 h及4 h再次给予50 mg/kg,以后1次/d,剂量200mg/kg,连用12 d.损伤组相同时间点腹腔注射等体积生理盐水.2组均于预定时间点处死大鼠,取出伤段脊髓(以损伤处为中心,长约10 mm),用苏木精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率.结果:64只大鼠全部进入结果分析.①苏木精-伊红染色光镜下发现脊髓组织病理学改变三七总皂苷组明显轻于损伤组.②诱导型一氧化氮合酶阳性细胞率:三七总皂苷组在伤后1,3,7,14 d均低于损伤组[(21.38±3.69)%,(36.24±3.27)%,(30.56±2.89)%,(21.64±5.31)%;(39.48±3.78)%,(58.69±5.67)%,(68.97±5.34)%,(40.35±4.36)%,t=9.692,9.701,17.893,3.171,P＜0.05].③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率:三七总皂苷组在伤后1,3,7,14 d均低于损伤组[(26.29±3.21)%,(35.42±2.25)%,(48.58±2.64)%,(23.72±3.26)%;(32.43±2.69)%,(46.18±3.07)%,(60.31±5.35)%,(31.98±4.80)%,t=4.147,7.996,5.561,11.231,P＜0.05].结论:三七总皂苷注射液能抑制脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,从而减轻细胞损伤和凋亡.
关键词： 脊髓损伤 三七皂甙 一氧化氮合酶 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
白藜芦醇通过激活Caspase-3和PARP-1影响前列腺癌细胞侵袭和凋亡
目的 探究白藜芦醇对前列腺癌细胞侵袭和凋亡的影响及其分子机制.方法 将前列腺癌细胞分为5组,命名为对照组、Z-DEVD-FMK组、Res低剂量组、Res中剂量组、Res高剂量组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PC-3细胞中Caspase-3和PARP-I mRNA表达情况,分别采用Transwell小室和流式细胞仪检测PC-3细胞侵袭和凋亡情况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测PC-3细胞中MMP-9表达情况.结果 Res组PC-3细胞中Caspase-3和PARP-1 mRNA表达水平显著高于对照组和Z-DEVD-FMK组(P＜0.05),呈剂量依赖性;Res组PC-3细胞侵袭能力显著低于对照组和Z-DEVD-FMK组(P＜0.05),呈剂量依赖性;Res组PC-3细胞凋亡率显著高于对照组和Z-DEVD-FMK组(P＜0.05),呈剂量依赖性;Res组PC-3细胞中MMP-9表达水平显著低于对照组和Z-DEVD-FMK组(P＜0.05),呈剂量依赖性.结论 白藜芦醇能够上调Caspase-3和PARP的表达,进而诱导前列腺癌细胞凋亡,为前列腺癌的临床治疗提供一定的理论依据.
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PARP-1和caspase-3在胰腺癌及癌旁组织中的表达及意义
目的 探讨聚(腺苷酸二磷酸核糖)聚合酶(PARP)1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3在胰腺癌及胰腺癌旁组织中的表达.方法 收集2013年1月-2014年6月于兰州大学第一附属医院行手术治疗并经术后病理证实为胰腺癌患者的癌组织标本66例及癌旁组织标本113例,行免疫组化检查,分别检测标本中PARP-1及caspase-3的表达.计数资料组间比较采用x2检验.结果 66例胰腺癌标本中53例有不同程度PARP-1表达,阳性率为80.3％;113例癌旁组织中有39例PARP-1表达,阳性率为34.5％;PARP-1在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织,差异具有统计学意义(x2=34.79,P＜0.01).在中分化(18/25,72.0％)和低分化(10/14,71.4％)的胰腺癌组织中PARP-1的表达强度明显高于高分化(3/14,21.4％)肿瘤组织,三者间差异具有统计学意义(x2=10.76,P＜0.01).66例胰腺癌标本中47例有不同程度caspase-3表达,阳性率为71.2％;113例癌旁组织中有71例caspase-3表达,阳性率为62.8％.高分化(11/18,61.1％)的胰腺癌组织中caspase-3的表达强度明显高于中分化(4/20,20.0％)和低分化(0/9,0)肿瘤组织,三者间差异具有统计学意义(x2=11.44,P＜0.01).结论 胰腺癌组织中PARP-1表达水平明显高于癌旁组织,其强阳性率随肿瘤分化程度降低而升高;caspase-3在胰腺癌中的表达与癌旁组织相似,其强阳性率随肿瘤分化程度的降低而降低.PARP-1、caspase-3的表达水平可能与胰腺癌的发生发展有关.
关键词： 胰腺肿瘤 聚ADP核糖聚合酶类 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
福辛普利对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的影响
目的 探讨福辛普利对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达水平的影响.方法雄性Wistar大鼠50只随机抽取10只为假手术组,其余大鼠采用肾上腹主动脉缩窄法建立大鼠CHF模型,6 w后将成模大鼠随机分为CHF组、Fos10组、FOS20组(福辛普利10、20 mg·kg-1·d-1).治疗8 w后,观察各组大鼠血流动力学指标和左心室重量指数(LVMI);透射电镜观察左室心肌组织形态的改变;TUNEL法检测大鼠左心室心肌细胞的凋亡指数;SP免疫组织化学染色法检测左心室心肌组织Caspase-3蛋白的表达.结果CHF组与假手术组相比,大鼠左心室舒张末压(LVEDP)、LVMI、心肌细胞凋亡指数、Caspase-3蛋白的表达均明显升高(P<0.01),左心室内压大上升和下降速率(±dp/dtmax)显著下降(P<0.01);与CHF组比较,Fos10组和Fos20组大鼠LVEDP、LVMI、心肌细胞凋亡指数、Caspase-3蛋白的表达均明显降低(P<0.01),左心室内压大上升和下降速率(±dp/dtmax)显著升高(P<0.01),且Fos20组效果明显.电镜下观察:Fos10组和Fos20组心肌损伤程度较CHF组明显减轻.结论福辛普利可通过下调Caspase-3的表达抑制心肌细胞凋亡,改善CHF大鼠心室功能及心肌超微结构.
关键词： 福辛普利 慢性心力衰竭 超微结构 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
沉默UVRAG基因在二烯丙基二硫诱导K562细胞中caspase3的表达
目的:沉默UVRAG基因在DADS诱导K562细胞中观察caspase3的表达.方法:以K562细胞为细胞模型,将构建成功并筛选出有效干扰抑制UVRAG基因的siRNA序列片段采用lipofectamine TM2000脂质体转染法转染白血病K562细胞,组别为:空白对照组,转染试剂组、阴性对照组,阳性对照组,转染24小时后,利用QT-PCR检测UVRAG mRNA的表达水平以此观察干扰效果,再以40 mg/LDADS处理转染试剂组12小时,采用蛋白印迹(Western Blotting)技术检测凋亡相关基因easpase3的表达.结果:QT-PCR显示:与空白组相比,UVRAG mRNA表达明显减少,表明沉默UVRAG基因成功;Western Blotting显示:DADS处理的干扰成功的K562细胞12小时后,检测到caspase3的蛋白表达水平下降.结论:沉默UVRAG基因能使白血病K562细胞中凋亡相关基因caspase3的蛋白表达水平下降,提示抑制UVRAG表达的同时也可能抑制DADS诱导K562细胞的凋亡.
关键词： 二烯丙基二硫 K562细胞 凋亡 抗紫外线相关基因 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
唐古特大黄多糖组分1对辐射损伤所致肠上皮细胞凋亡的保护作用及其可能的机制
目的:探讨唐古特大黄多糖(Rheum tanguticum polysaceharide,RTP)组分1(RTP1)对60yCo射线诱导的肠上皮细胞IEC-6凋亡的保护作用及其可能的机制.方法:采用大鼠空肠上皮细胞(IEC-6细胞株),共分为4组,正常对照组(Normal Control,NC)、辐射对照组(Irradiation Control,Ic)以及RTP1低剂量组(10 μg/m1)、中剂量组(30 μg/m1)和高剂量组(100 μg/ml),以6.0 Gy60Coγ射线一次性照射损伤细胞,损伤前用RTP1预处理细胞48 h.采用MTT比色法测定细胞活力,吖啶橙荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,Western blot测定Caspase-3酶活性.结果:6.0 Gy60Coγ射线照射可明显降低细胞存活率并诱导细胞凋亡,凋亡率为31.3％,细胞Caspase-3的活性明显升高,RTP1预处理细胞可明显提高细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率(30、100μg/ml)分别降低至24.4％和21.5％,Caspase-3酶活性降低,并呈现一定的剂量依赖性.结论:RTP1可明显抑制60γCo射线诱导的IEC-6细胞凋亡,其细胞保护作用可能与抑制Caspase-3活性相关.
关键词： 唐古特大黄多糖 IEC-6细胞 细胞凋亡 辐射损伤 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
丹参酮Ⅱa对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠大脑GFAP和Caspase-3表达的影响
目的 观察丹参酮ⅡA对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的治疗作用以及对大脑中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达的影响.方法 把40只大鼠随机分成4组,空白对照组(Naive组)、EAE高剂量用药组(50 mg/kg,TSⅡA-H组)、EAE低剂量用药组(25 mg/kg,TSⅡA-L组)和EAE溶剂对照组(Vehicle组).EAE模型诱导后每天对大鼠进行神经功能评分和体质量测量.发病高峰期(第18天)处死大鼠并取材,分别进行H E染色和劳克坚牢蓝(LFB)染色检测大鼠脑组织炎性浸润改变和脊髓脱髓鞘情况.采用免疫组化法和免疫印迹法(West-ern Blot)检测各组大鼠脑组织中GFAP和Caspase-3的表达水平.结果 用药后TSⅡA-H组和TSⅡA-L组大鼠临床症状好转,大脑炎性细胞浸润减少,脊髓脱髓鞘的改变减轻,大脑中GFAP和Caspase-3的表达水平下降.结论 丹参酮ⅡA对EAE大鼠有治疗作用,其作用机制可能是通过下调GFAP和Caspase-3的表达来参与炎性反应和凋亡过程的调节.
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益肾活血颗粒对大鼠前列腺增生模型影响的实验研究
目的 研究益肾活血颗粒对大鼠前列腺增生的影响及作用机制.方法 雄性SD大鼠40只去势后7d在每日皮下注射丙酸睾酮5 mg/kg的同时灌胃给药,益肾活血颗粒大、小剂量组分别每天给予2.25、1.12 g/kg灌胃,阳性对照组给予非那雄胺片0.001 g/kg灌胃,模型组给予等体积的生理盐水灌胃,连续28 d,处死大鼠,观察前列腺指数及病理形态改变,采用免疫组化法检测半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶3(caspase-3)表达情况.结果 各治疗组大鼠前列腺指数均明显低于模型组,caspase-3表达水平明显高于模型组,其中尤以益肾活血颗粒大剂量组为明显(P＜0.01).益肾活血颗粒大剂量组与阳性对照组比较差异亦有显著性(分别为P＜0.05、P＜0.01),小剂量组与阳性对照组比较差异无显著性.结论 益肾活血颗粒可抑制大鼠前列腺增生,其作用可能与增强前列腺组织中caspase-3的表达从而促进增生细胞的凋亡有关.
关键词： 益肾活血颗粒 前列腺增生 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
龟版有效成分抗无血清损伤表皮干细胞凋亡的研究
目的:探讨龟版有效成分对无血清培养所致的表皮干细胞(epidermal stem cell,ESC)凋亡的药效作用和可能机制.方法:分离培养孕龄2周的Sprague-Dawley胎鼠背部皮肤制备ESC,分为正常组、模型对照组和龟版有效成分各组.采用含龟版有效成分的无血清达尔伯克改良伊格尔培养基培养24、48和72 h后,用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5---苯基四氮唑溴盐（3-（4,5-dimethyhhiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法检测ESC的活力,筛选药物佳作用时间；ESC用各药物培养48 h后,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V和碘化丙锭双标后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (caspase-3)和Bcl-2蛋白的表达水平.结果:MTT检测结果表明,在24、48和72 h时各有效成分组ESC活力较模型对照组增强(P＜0.01),且作用48 h时乙酸乙酯部位提取物组ESC活力高于十八酸乙酯、十四酸甾醇酯、4-甾酮各组(P＜0.05,P＜0.01).作用48 h时,乙酸乙酯部位提取物抗凋亡效果强,4-甾酮抗凋亡效果弱.蛋白免疫印迹结果表明,乙酸乙酯部位提取物、十八酸乙酯、十四酸甾醇酯、4-甾酮均能显著上调Bcl-2和下调caspase-3的表达,有抗凋亡作用.结论:乙酸乙酯部位提取物有较强的抗ESC凋亡作用,优于它的各组分单独作用,调控Bcl-2与caspase-3之间的表达平衡可能是其抗ESC凋亡的机制之一.
关键词： 龟版 表皮干细胞 凋亡 Bcl-2 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
重组人IL-24的表达及其体外抗肿瘤细胞活性的研究
目的 构建重组人白细胞介素24(recombinant human interleukin 24,rhIL-24)表达载体并在大肠杆菌中表达,体外评估rhIL-24的生物学活性.方法 用基因工程方法构建rhIL-24表达载体并在大肠杆菌巾表达rhIL-24.表达的重组蛋白经层析法纯化后,分别用噻唑蓝比色法和蛋白印迹法检测rhIL-24对肿瘤细胞生长的影响和对内源性IL-24的诱导,用实时PCR检测不同肿瘤细胞与rhIL-24共孵育后细胞内的胱天蛋白酶3(caspase 3)mRNA变化.结果 rhIL-24能在大肠杆菌中高效表达,并能明显抑制多种肿瘤细胞生长.rhIL-24能诱导正常MRC.5细胞和多种肿瘤细胞产生内源性IL-24,并能改变肿瘤细胞的胱天蛋白酶3水平.结论 rhIL-24能在大肠杆菌中高效表达,且具有生物学活性.
关键词： 白细胞介素类 抗肿瘤药 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 -
二硫代氨基甲酸吡咯烷对重症急性胰腺炎肺损伤中核因子-κB表达及细胞凋亡作用
目的:探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)活化及细胞凋亡的作用.方法:大鼠建立模型后取肺组织行大体及光镜下病理观察,免疫组织化学检测NF-κB、凋亡调控因子(Fas)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡,免疫印迹法观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达情况.结果:SAP组与PDTC预处理组肺组织病理改变明显,细胞凋亡明显,NF-κB、Fas、Bcl-2与TNF-α表达均明显升高,6h达高峰.PDTC预处理组与SAP组比较,则病理改变明显减轻,凋亡指数、NF-κB、Fas、TNF-α与caspase-3蛋白表达均下降,但仍高于对照组,而Bcl-2表达趋势相反.结论:NF-κB活化参与了SAP时肺组织的细胞凋亡.PDTC能有效缓解SAP肺损伤症状,其机制可能是通过抑制NF-κB激活与细胞凋亡.
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siRNA沉默Ran基因对结肠癌细胞株凋亡和Caspase-3、PARP表达的影响
结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一.本课题组前期研究发现结肠癌特异性抗原类硫氧还蛋白-2(Txl-2)的亚型之一Txl-2b可与Ras相关核蛋白(Ran)相互作用,但Ran在结肠癌发病过程中的作用和机制鲜有报道.目的:以RNA干扰技术靶向沉默结肠癌细胞株Ran基因,观察该方法对细胞凋亡和半胱天冬酶-3(caspase-3)、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)表达的影响.方法:设置si-1、si-2、si-3以及阴性对照(NC)组,分别将终浓度为20、40、60 nmol/L的Ran小干扰RNA(siRNA)-1、siRNA-2、siRNA-3以及NC siRNA转染结肠癌细胞株HCT116、DLD-1.采用蛋白质印迹法检测siRNA干扰效率以及caspase-3、PARP表达的变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:20 nmol/L siRNA-1、siRNA-2抑制Ran表达的效果佳.si-1组HCT116、DLD-1细胞的早期凋亡率较NC组显著增加(19.37%±7.57%对4.83%±1.72%;16.53%±3.38%对6.27%±3.13%;P均<0.05).si-1组、si-2组HCT116、DLD-1细胞的晚期凋亡率较NC组显著增加(15.97%±3.31%、16.33%±5.40%对6.40%±1.05%;22.93%±1.57%、11.50%±0.70%对6.20%±0.98%;P均<0.05).si-1组、si-2组DLD-1细胞与NC组相比,被切割的caspase-3(活性形式)和被切割的PARP(非活性形式)表达水平显著升高.结论:沉默Ran基因能明显促进结肠癌细胞凋亡,其机制与调控caspase-3、PARP表达有关.
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塞来昔布对人结肠癌细胞株HT-29 MIF、PTEN和Caspase-3表达的影响
塞来昔布为环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂,近年研究发现其具有抗肿瘤作用.目的:观察塞来昔布对人结肠癌细胞株HT-29巨噬细胞游走抑制因子(MIF)、抑癌基因蛋白PTEN和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响,探讨其防治结肠癌可能的分子机制.方法:25、50、100 μmol/L塞来昔布分别作用于HT-29细胞24 h后,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HT-29细胞MIF mRNA表达,蛋白质印迹法检测MIF、PIEN、Caspase-3蛋白表达.结果:经25～100 μmol/L塞来昔布处理后,HT-29细胞MIF mRNA和蛋白表达随塞来昔布浓度的增加而减低,PTEN和Caspase-3蛋白表达随塞来昔布浓度的增加而增加,与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论:塞来昔布的抗结肠癌作用可能与下调MIF表达和上调PTEN、Caspase-3表达有关.
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Caspase-3、E-cad在新疆维吾尔族艾滋病相关型与经典型卡波西肉瘤患者肿瘤组织中的表达及意义
目的 通过测定新疆维吾尔族艾滋病相关型卡波西肉瘤(AIDS-KS)和经典型KS患者肿瘤组织中Caspase-3、E-cad蛋白,进一步明确不同类型KS的发病机制.方法2011年7月至2014年10月新疆医科大学第一附属医院及乌鲁木齐市传染病医院就诊的KS患者的活组织检查标本38例,其中男28例,女10例,均为维吾尔族.38例者中AIDS-KS22例,经典型KS16例.采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测两组者KS组织中Caspase-3、E-cad蛋白的表达.正态分布的计量资料采用t检验,计数资料两两比较用行×列表χ2检验.结果 经典型KS患者KS病变仅限于皮肤,无黏膜、淋巴结或内脏受累表现.AIDS-KS患者病变不仅局限于皮肤及浅表淋巴结,12例口腔黏受累,7例受累内脏器官,以肝、肺受累多见.AIDS-KS患者CD4+T淋巴细胞计数为200.8±166.0)/μL,其中＜200/μL者15例,且均发生机会性感染;经典型KS患者CD4+T淋巴细胞计数为(562.52±222.66)/μL,＞350/μL者16例,无患者发生机会性感染.采用免疫组织化学法检测显示,AIDS-KS患者KS组织中Caspase-3蛋白表达阳性率为68.2%,经典型KS患者表达率为100.0%,两组比较差异有统计学意义χ2=7.37,P=0.01);AIDS-KS患者KS组织中E-cad蛋白表达阳性率为72.7%,经典型KS患者表达率为100.0%,两组比较差异有统计学意义(χ2=5.18,P=0.03).蛋白质印迹法检测显,AIDS-KS患者KS组织中Caspase-3灰度值为0.55±0.36,经典型KS患者为0.86±0.56,两组比较差异有统计学意义(t=-2.070,P＜0.05);AIDS-KS患者KS组织中E-cad灰度值为0.54±0.41,经典型KS患者为0.85±0.45,两比较差异有统计学意义(t=-2.060,P＜0.05).结论 Caspase-3、E-cad在新疆维吾尔族AIDS-KS与经典型KS患者KS组织中的表达存在差异,可能与AIDS-KS具有更快的进展速度和更高的病死率相关.
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 肉瘤 卡波西 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 E-Cad -
胰升糖素样肽1对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护机制
观察胰升糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)对原代培养的心肌细胞在缺氧/复氧条件下损伤的影响及机制.结果显示,缺氧/复氧使乳酸脱氢酶活性[(210.0±11.5)对(101.4±6.5)U/L]、细胞凋亡率[(8.138±1.512)对(0.575±0.168)%]和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性[(44.52±5.69)对(19.98±1.97),均P<0.01]均升高,GLP-1能直接作用心肌细胞,并对其在缺氧/复氧的损伤具有抑制作用[乳酸脱氢酶活性(190.2±9.0)U/L,细胞凋亡率(2.688±0.580)%,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性30.34±4.18],该作用可能与磷脂酰肌醇3激酶(PBK)/Akt介导的抗细胞凋亡作用有关.
关键词： 胰升糖素样肽1 缺氧复氧 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
