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脉冲场凝胶电泳与质粒图谱分析应用于浙江省甲副伤寒菌株的分子流行病学调查
目的应用分子生物学方法对浙江省甲副伤寒流行菌株的特征和分子分型进行研究.方法对浙江省26株暴发及散发甲副伤寒菌株作药敏试验、应用快速小量质粒提取方法并作图谱分析,同时应用脉冲场凝胶电泳分型技术(PFGE)分析比较暴发及散发菌株的基因图谱.结果26株菌株对SM、CAR耐药率高于52.00%,对COS、AMP高于84.00%,对SD高达100.00%.所有菌株含有-2.3Kb和-23.1Kb大小质粒.经XbaⅠ酶切,作PFGE分析发现各个菌株的染色体酶切图谱显示19～21条带,26株菌株共出现四种带型,所有菌株分析的条带数仅相差1～2条.结论浙江省甲副伤寒菌株普遍带有质粒且绝大数菌株具多重耐药性,这可能与浙江省甲副伤寒持续性高发有关.PFGE分析所有菌株均为同一克隆系,有一定相关性,说明浙江省流行的甲副伤寒菌株相对保守.
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一起肠炎沙门菌引起的食物中毒调查分析
目的 查明本次食物中毒事件的发生原因和可疑危险因素,同时对致病菌药物敏感性进行分析.方法 通过发病时间和用餐时间结合病例临床特征分析查找可疑餐次,采集可疑食物和病例等标本进行实验室检测,食物及病例阳性标本做脉冲场凝胶电泳(PFGE)同源性分析,同时对致病菌做耐药分析.结果 共确认81例病例,症状主要为发热≥38℃(100.00％,81/81)、腹痛(97.53％,79/81)、腹泻≥3次(100.00％,81/81)、呕吐(69.14％,56/81)等,食用被鸡蛋壳污染的蛋炒饭是发病的危险因素,厨师在制作蛋炒饭时,附有肠炎沙门菌的鸡蛋壳没有清洗干净,炒饭是将蛋液浇到米饭上,加热不彻底,后导致肠炎沙门菌污染蛋炒饭.病例粪便检测为肠炎沙门菌阳性,和食物蛋炒饭中分离的肠炎沙门菌PFGE图谱完全一致,且与生鸡蛋壳涂抹样品中分离的肠炎沙门菌相似度达96％.头孢噻肟、环丙沙星、复方新诺明(TMP/SMZ)等对肠炎沙门菌具有较好的药物敏感性,萘啶酸耐药性强.结论 食用被肠沙门菌污染的蛋炒饭是导致本次食物中毒的主要原因,建议加强对餐饮机构厨师的监督管理,规范卫生操作流程,提高卫生安全意识,防止类似事件再次发生.
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气管导管生物被膜与复发性铜绿假单胞菌呼吸机相关肺炎的相关性
目的确定机械通气患者气管内导管(ETT)细菌生物被膜(BF)与长期机械通气反复发作铜绿假单胞菌呼吸机相关肺炎(PA-VAP)病原的相关性.方法应用染色体DNA SpeI限制酶切脉冲场电泳(PFGE)技术和染色体DNA印迹平均链锁聚类分析及相似系数计算方法,前瞻性研究了15例机械通气且反复发作VAP患者的同期ETT-BF、咽拭子和下呼吸道分泌物分离出的铜绿假单胞菌DNA基因型同源性.结果在15例长期机械通气反复发作VAP患者中,有7例(15次)同时从ETT-BF和下呼吸道分泌物中分离出相同DNA基因型的铜绿假单胞菌.有6例是由同一菌株或亚型所致,9例患者间的细菌DNA基因型各不相同,相似水平很低(<31.2%).结论 ETT的细菌寄殖和BF形成与VAP病原菌有密切的相关性, 是VAP发病机制中的一个重要因素及持续存在的病原来源;反复发作PA-VAP是以原有致病原的持续寄殖及复发为主,而不是发生外源性再感染.
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产KPC肺炎克雷伯菌暴发流行的药敏特点与同源性分析
目的：研究分析北京某三甲医院2014年10－11月产K PC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌暴发流行的药敏特点及其与同源性的关系，为进行有效预防控制提供分子流行病学证据。方法收集2014年10－11月分离自临床和医院感染监测产KPC酶肺炎克雷伯菌20株，通过PCR测定KPC型碳青霉烯酶基因，微量肉汤法测定小抑菌浓度，对于感染有K PC型肺炎克雷伯菌患者的临床资料进行回顾性调查与研究。结果分离鉴定出产K PC肺炎克雷伯菌外科IC U 11株、内科IC U 2株、其他科室7株；分为 A型和B型，其中A型共17株，B型3株；A型菌株除对米诺环素、多粘菌素B敏感外对其余包括碳青霉烯类抗菌药物在内的所有抗菌药物均表现出不同程度的耐药，B型菌株对米诺环素、多粘菌素B、庆大霉素、阿米卡星表现出一定程度的敏感外，对其他抗菌药物也均表现为不同程度的耐药。结论本次产K PC型肺炎克雷伯菌暴发，存在克隆传播的可能，不同的克隆株对药物的敏感性有较大差异，对临床的抗菌药物应用带来极大挑战，同时临床科室应积极加强防护措施，防止再次产K PC型肺炎克雷伯菌暴发流行。
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湖北省部分霍乱弧菌毒力基因和基因分型结果分析
目的 检测霍乱弧菌毒力基因和基因分型,为科学防治提供依据.方法 用PCR方法 检测从湖北省部分地区的猪肉、基围虾、湖水、病人、病人厕所等处采集标本培养分离血清学分型确认的霍乱弧菌毒力基因,采用脉冲场电泳技术(PPGE)检测霍乱弧菌基因分型.结果 同一地区的猪肉、基围虾、湖水中01群小川型霍乱弧菌基因分型结果 一致,毒力基因阴性;病人及病人厕所0139群霍乱弧菌基因分型结果 一致,毒力基因为阳性.结论 检测猪肉、基围虾、湖水中霍乱弧菌毒力基因阴性的结果 ,可以为现场提供避免采取应急防治措施的依据,节约大量的社会和人力资源.
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腹泻病原菌中产超广谱β-内酰胺酶菌株的基因型和同源性分析
目的 了解分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)腹泻病原菌的基因流行情况.方法 采用TEM型、SHV型和CTX-M型ESBLs编码基因的通用引物对产ESBLs菌株进行扩增,并采用PFGE技术对分离的产ESBLs腹泻病原菌进行了DNA指纹图谱分析.结果 在分离的产ESBLs的腹泻病原菌中,CTX-M型是为常见的ESBLs型别,TEM型次之,SHV型少,CTX-M亚型中CTX-M-14多,部分产ESBLs腹泻病原菌同时产生一种以上的β-内酰胺酶,少数菌株的ESBLs基因型不属于上述三种基因型.分离的产ESBLs的大肠杆菌有6种基因型,宋内菌有2种基因型,变形杆菌和克雷伯菌只有1种基因型.结论 ESBLs不仅可以存在于不同种的细菌中,也可以存在同一种细菌的不同基因型中,推测这可能是耐药基因在不同细菌或同一细菌不同基因型中平行转移的结果.
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从北京某地分离的2株犬种布氏菌的鉴定报告
目的 对从北京某地分离的2株布氏菌进行鉴定.方法 布氏菌常规鉴定分型方法,布氏菌噬菌体裂解试验,同时辅以脉冲场电泳基因分型方法.结果 2株待测菌株均为犬种布氏菌,2株待测菌的脉冲场电泳图谱与国际标准犬种布氏菌RM6/66株的图谱完全一致.结论采用传统布氏菌分型方法同时辅以脉冲场电泳基因分型方法对布氏菌进行分型鉴定,可以增加鉴定工作的稳定性与正确性.
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四川省石渠县鼠疫菌脉冲场电泳分析
目的确定四川省石渠县分离的鼠疫菌株的类型.方法脉冲场电泳.结果四川分离的鼠疫菌中出现3个图型.从鼠疫病人分离到的菌株与青海田鼠体分离的菌株明显不同,而与强毒的青藏高原型菌株相似;青海田鼠体分离的菌株与内蒙古布氏田鼠型菌株相似,与其他地区的菌株均不相同.结论青海田鼠间可能存在一种独立的鼠疫自然疫源地,1999年四川省石渠县发生的人间鼠疫并非由该地占优势的青海田鼠型菌株引起,可能在该疫源地之外感染.
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社区获得甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌
金葡菌是引起感染性疾病的重要致病菌,侵袭性金葡菌感染常可导致患者死亡.上世纪40年代青霉素应用于临床后患者的预后获显著改善,但不久便出现产青霉素酶的耐药菌株,甲氧西林等耐酶青霉素能有效抑制该耐药株.随后迅即出现遍布世界各地医院的耐甲氧西林金葡菌(MRSA),该菌对所有β内酰胺类抗生素耐药,但迄今MRSA在社区中仍很少发现[1-4].
关键词： 耐甲氧西林金葡菌 葡萄球菌基因盒染色体 杀白细胞素 脉冲场电泳 -
2017年南京市部分沙门菌感染特征及菌株脉冲场电泳鉴定
目的 了解2017年南京市沙门菌感染及分子流行病学特征.方法 2017年4-10月收集南京市各哨点医院送检疑似细菌性感染的分离菌株,以常规方法鉴定,挑取单克隆菌落,进行脉冲场电泳分析,采用PulseNet China系统聚类分析软件进行图谱分析;并结合临床指标进行描述性分析.结果 分离、鉴定84株沙门菌,共计32种血清型,主要为鼠伤寒沙门菌(23株,占27.38％).94.0％菌株分离自粪便标本,病例年龄1个月～95岁,主要为≤1岁(29.76％)、≥60岁组(17.86％);7月为感染高峰(占25.00％);临床诊断主要为感染性腹泻／急性胃肠炎(占72.62％).不同年龄感染谱不同:鼠伤寒沙门菌感染者多为≤10岁组(95.65％),肠炎沙门菌感染者多为50～60岁组(62.50％),乙型副伤寒沙门菌感染以及斯坦利沙门菌感染者均≤1组岁,都柏林沙门菌感染者均为40～50岁组.经Xba I酶切、电泳片段为30～700kD,PFGE指纹图谱带型相似度为0.35％～100.00％,同血清型相同菌株的PFGE指纹图谱带型均不同,鼠伤寒沙门菌S1相似群相似度高为92.59％,其余种属相似群相似度均＜80％.结论 南京市2017年沙门菌感染多以鼠伤寒沙门菌为主,婴幼儿和老年人为高危人群,夏季为感染高峰.沙门菌血清型与PFGE指纹图谱未发现直接关联,应进一步加强监测及PFGE数据库建设.
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荧光PCR和脉冲场电泳技术在一起霍乱弧菌疫情诊断中的应用
目的 探讨荧光PCR和脉冲场电泳(PFGE)在霍乱弧菌疫情调查中的应用,为霍乱防治提供依据.方法 采集疫情相关标本,进行分离培养鉴定和荧光PCR检测,霍乱弧菌分离菌株基因组进NotⅠ酶切,通过PFGE获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析.结果 血清分型分离菌株为霍乱弧菌0139群,标本荧光PCR检测结果毒力基因呈阳性,该起疫情分离的8株霍乱弧菌毒株PFGE图谱一致.结论 荧光PCR可快速准确鉴定病原体,PFGE具有较强的菌株同源性分析能力,两种方式的联合应用能在突发公共卫生事件的快速诊断及疫情处置中发挥重要作用.
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血液透析室洋葱伯克霍尔德菌流行株的调查
目的 通过对血液透析室暴发院内感染的洋葱伯克霍尔德茵(Burkholderia cepacia,BC)茵株进行分子流行病学调查,为控制其流行和临床合理用药提供依据.方法 收集血透室疑似暴发流行的BC菌株,用全自动鉴定仪进行细菌鉴定,用K-B法进行药物敏感试验,并用脉冲场电泳(PFGE)检测11株BC的同源性.结果 血透室暴发感染的9株BC(其中1株是从反渗水中分离出来的)与血液内科(1株)、重症监护室(1株)的BC高度同源.药敏试验示11株BC药敏谱基本相似.结论 BC是导致血透室暴发院内感染的致病菌,来源于反渗水.监测透析液及透析用水和有关管道、器械等感染源头,是控制院内感染流行的重要措施.
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重症监护室产OXA-23碳青霉烯类酶的鲍曼不动杆菌的分子流行病学研究
目的:研究重症监护病房中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的分子流行病学特征,为临床预防和控制医院感染暴发提供分子流行病学依据.方法:本研究收集了重症监护病房自2006年10月～2010年1月,从患者分离的40株耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌,琼脂稀释法测定14种抗菌药物的小抑菌浓度,设计通用引物多重PCR扩增D类碳青霉烯酶基因blaOXA-23、blaOXA-24、blaoxA-51、blaOXA-58,并测序.EDTA纸片法检测金属酶表型,PCR检测基因型blaIMP、blaVIM、blaSIM,脉冲凝胶电泳分析其同源性.结果:所有耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素和左氧氟沙星等保持有一定敏感性,但对其余抗菌药物耐药率均为100%.所有耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌均产OXA-23型碳青霉烯酶,在blaOXA-23上游连接有ISAba1启动元件,未检测到blaOXA-24、blaOXA-58碳青霉烯酶基因；金属酶表型及基因型均为阴性.PFGE分为4种克隆型,以A、D型为主.所有耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌感染患者中,34例(85.0%)为呼吸道感染,5例(12.5%)为伤口感染,1例(2.5%)为血流感染.经临床治疗后,21例(52.5%)存活,12例(30.0%)死亡,7例未出院.结论:本研究重症监护病房流行的40株耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌均产OXA-23型碳青霉烯酶,以A型和D型克隆为主要流行株,随着抗菌药物选择性压力的作用,出现了全耐药菌株.
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脉冲场凝胶电泳技术在鼠伤寒沙门菌分型中的应用
[目的]探讨脉冲场凝胶电泳(PFGE)在鼠伤寒沙门菌分型中的应用.[方法]选择Xba Ⅰ酶对鼠伤寒沙门菌全基因组DNA进行酶切、脉冲场凝胶电泳,电泳带用Freeview软件进行相似性比较.[结果]13株鼠伤寒沙门菌经PFGE,根据其条带的差异可分为10个PFGE型别.[结论]PFGE法重复实验结果稳定,分型力较强,适合鼠伤寒沙门菌分型应用.
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O157血清群大肠杆菌分子亚型的研究
[目的] 了解山东和福建两省不同来源的O157血清群大肠杆菌分子亚型和菌株间的相关性. [方法] 对1993-1996年间分离到菌株进行脉冲场电泳(PFGE),图象经计算机处理后进行聚类分析. [结果] O157大肠杆菌染色体DNA用XbaI酶切后,经PFGE可生15～20条带,以90%的同源性作为界值,可将11株菌分成9个PFGE亚型,其中山东分离到的6株菌分成4个亚型,福建的5株菌分属5个亚型. [结论] 山东、福建的O157血清群大肠杆菌均存在多个克隆系.
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弓形虫不同株染色体DNA多态性PFGE分析
目的 分析弓形虫不同分离株染色体DNA多态性.方法 采用PFGE技术对弓形虫8个分离株进行分子核型分析.结果 在2.0～6.0Mb范围内分离出7～8条染色体,各株PFGE电泳分子核型大体相似,但部分染色体DNA电泳迁移速度并不一致并存在共迁移现象,8个分离株分为3个类型.结论 弓形虫不同分离株既存在一定的同源性,但同时又显示染色体DNA多态性.这可能同弓形虫不同分离株毒力等生物特性的差异有关.
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1例小肠结肠炎耶尔森菌人畜感染情况研究
目的：研究小肠结肠炎耶尔森菌（Y ．e）人畜感染情况，探索传染来源。方法采集腹泻病人粪便标本和猪咽拭子进行Y ．e常规分离鉴定。对分离株进行血清学分型，用PCR方法检测毒力基因，用脉冲场凝胶电泳（PFGE ）进行分子分型。结果从150例腹泻病人中分离到Y ．e 3株，其中1株血清型为O∶3；从该O∶3株病患老家采集的222份猪咽拭子分离到Y ．e 14株，都为O∶3血清型；PFGE分子分型显示病人体内分离到的致病Y ．e与家猪分离株有较高的同源性。结论证实1例小肠结肠炎耶尔森菌从家猪传染人的病例，并发现Y．e在治愈病人体内至少存在了2个月。
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致泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的研究
目的:分析泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的流行情况和分子特征.方法:应用全自动细菌分析仪Microscan WalkAway40和纸片扩散法,对40株大肠埃希菌进行抗生素敏感性测定,PCR扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子,对扩增产物进行测序,并分析其中的基因盒,利用脉冲场电泳(PFGE)对菌株进行分子分型.结果:22株细菌含有Ⅰ类整合子,整合子大小为1 000、1 200、1 700和3 000 bp,22株细菌各含1～2个整合子.1 000 bp整合子含基因盒aadA1,1 200 bp整合子含基因盒dfr1-OFRx,1 700 bp整合子含基因盒dfr17-aadA5,3 000 bp整合子两端分别含基因盒aadB、cmlA1,40株细菌被分为不同的基因型,在不同基因型菌株中发现了相同的整合子.结论:整合子在泌尿系统感染大肠埃希中广泛存在,整合子是介导细菌耐药性的重要分子机制,基因分型结果提示整合子在细菌种内水平传播.
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脉冲场电泳在霍乱弧菌分型中的应用
目的:了解天津市霍乱弧菌的基因型.方法:选择保留的20株埃尔托霍乱弧菌进行血清分型及生化实验确认,采用琼脂糖包埋胶块法制备染色体DNA,以sfiⅠ内切酶进行切割,选定脉冲电泳参数进行片段分离.结果:20株霍乱保留株用脉冲场电泳分离可得到5种不同的基因型.结论:20株霍乱弧菌经血清学及生化检定确认未发生表型特征变异,脉冲场电泳分析表明,不同年代分离株基因型别重叠出现.
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聚合酶链式反应和脉冲场电泳在金黄色葡萄球菌肠毒素检测的应用
目的 采用聚合酶链式反应(PCR)和脉冲场电泳(PFGE)在不同角度和层次的研究和探讨,为明确食物中毒诊断提供依据,并为不同时期、不同地区、不同检测要求的疾病预防控制提供新的手段和思路.方法 用各种采集样品进行PCR检测,并且用检测到的肠毒素进行同源性调查研究.结果 3例食物中毒事件中分离到金黄色葡萄球菌菌株中检测出肠毒素及其相应的编码基因,并用PFGE证实了3株菌属于同一克隆,但本次的金黄色葡萄球菌经比较与另一次导致食物中毒事件中分离的金黄色葡萄球菌不具有同源性.结论 PCR快速有效的鉴定病原菌,PFGE能准确地追溯其同源性,为食物中毒病原菌鉴定提供快速而可靠的方法.
