189 固相萃取-高效液相色谱法检测含麻黄方剂中的(+)-伪麻黄碱和(一)-麻黄碱

中成药和保健食品中9种5型磷酸二酯酶抑制剂的液相色谱-高分辨质谱检测法

目的 采用分散固相萃取技术结合超高效液相色谱-高分辨质谱法建立中成药和保健食品中9种5型磷酸二酯酶(phosphodiesteras 5,PDE5)抑制剂的检测方法 .方法 用0.1%甲酸-乙腈超声提取后,经磁性复合填料分散固相萃取法净化,以C18色谱柱进行色谱分离,通过高分辨质谱的全扫描/实时二级质谱扫描进行分析检测.结果 9种PDE5抑制剂在5~500 ng/L范围内呈良好的线性关系(r>0.999).9种PDE5抑制剂的方法 检出限和低定量限分别为2、5μg/kg.空白样品在5~500μg/kg范围内的3个加标水平的平均回收率为87.6%~108.9%,相对标准偏差为1.9%~7.2%.应用该方法 对中成药和保健食品实际样品进行检测,有1份样品检出豪莫西地那非非法添加.结论 本方法 适用于中成药和保健食品中9种PDE5抑制剂的快速筛查和定量检测.

从Miconia prasina中分离得到的黄烷酮类化合物

作者从Miconia prasina中分离得到1种新的黄酮苷和5种已知的黄烷酮化合物，并评价了化合物1～3与大麻素受体(CB1和CB2)的亲和力。
　　取M. prasina干燥粉碎茎(140 g)，用甲醇提取，除去溶剂，得到浓缩物(7.5 g)，浓缩物经硅胶减压柱液相色谱分离，用己烷、乙酸乙酯、甲醇梯度洗脱，得到9个部分。将己烷/乙酸乙酯洗脱液(1：1)和己烷/乙酸乙酯洗脱液(1：3)合并，再经固相萃取，用己烷、乙酸乙酯、甲醇梯度洗脱。其中60%乙酸乙酯/己烷洗脱液，经Sephadex LH-20柱色谱分离，用甲醇洗脱，得到化合物4(8 mg)和化合物6(6 mg)。100%乙酸乙酯洗脱液经半制备HPLC分离，用30%～70%甲醇/水洗脱，得到化合物5(11 mg)。将乙酸乙酯洗脱液及乙酸乙酯/甲醇(3：1)洗脱液合并，再经固相萃取，先用己烷/乙酸乙酯(3：1)洗脱，再用甲醇梯度洗脱，得到8个部分。乙酸乙酯/甲醇(3：1)洗脱液经半制备 HPLC 分离，用15%～85%甲醇/水洗脱，得到化合物1(3 mg)和3(5 mg)。乙酸乙酯/甲醇(2：2)洗脱液经Sephadex LH-20柱色谱分离分离，用二氯甲烷/甲醇(1：1)洗脱，得到化合物2(8 mg)。

毛细管气相色谱法测定山楂中15种有机磷农药残留的研究

目的:建立山楂中15种有机磷农药残留量同时检测的分析方法.方法:样品以混合溶剂超声提取,Florisil固相萃取柱净化处理后,采用DB-5毛细管气相色谱柱分离样品,火焰光度检测器检测,外标法定量.结果:在1～10ng·g-1添加范围内,15种有机磷农药的回收率为83.2％～90.8％;相对标准偏差( RSD)为3.1％～5.6％；低检测限为0.05～0.1ng·g-1(S/N=3).结论:此方法简便、可靠,可用于山楂中的有机磷农药残留量测定.

麻黄中生物碱类成分富集新方法及化学成分分析

目的:研究麻黄中生物碱类成分富集新方法并对其生物碱类成分进行分析,以期从中发现新的平喘活性成分.方法:为减少非生物碱类成分对定性分析的干扰、提高生物碱类成分分离制备的效率,该研究采用新型固相萃取填料对麻黄提取物中生物碱类成分进行富集,利用高效液相色谱法对富集到的生物碱类成分进行分离制备,采用HPLC-TOF-MS技术对制备的各组分进行分析,应用无标记整合药理学方法筛选各组分对β2受体的激动活性.结果:新型AC18固相萃取填料对麻黄中生物碱类成分的富集具有较高的选择性,采用基于反相/强阴离子交换混合模式的色谱固定相XCharge C18对富集得到的生物碱类成分进行分离,共制备了14个组分,经HPLC-MS分析,共检测出26个生物碱类成分.在筛选的14个组分中有11个组分显示了对β2肾上腺素受体的激动活性.结合这11个组分HPLC-MS分析结果,检识出其中12个生物碱类成分具有β2肾上腺紊受体激动活性,其中包括5组生物碱及其异构体:麻黄碱/伪麻黄碱,甲基麻黄碱/甲基伪麻黄碱,去甲基麻黄碱/去甲基伪麻黄碱,(±)-1-苯基-2-亚胺基-1-丙醇,(±)-酪胺甜菜碱.结论:麻黄中活性生物碱同分异构体的分离和鉴定对新的平喘活性成分的发现具有指导意义.

UPLC-MS/MS联合细胞膜固相色谱法分析补阳还五汤作用于神经元样PC12细胞的效应成分

目的:筛选补阳还五汤(BYHWT)中特异作用于神经元样PC12细胞的化学成分,为该复方的后续研究与应用提供实验依据.方法:采用固相萃取、神经元样PC12细胞细胞膜固相色谱法富集补阳还五汤特异结合神经元样PC12的效应成分,采用超高效液相色谱联用电喷雾飞行时间质谱(UPLC-MS/MS)鉴定特异结合成分,色谱条件为流动相甲醇-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,进样量3 μL,流速0.3 mL·min-1;质谱条件为雾化器压力和辅助气压力均为379.2 kPa,气帘气压力241.3 kPa,离子源温度500℃,喷雾电压-4.5 kV.结果:补阳还五汤特异结合神经元PC12细胞的化学成分可能为6-羟基山柰酚-3,6-二-O-葡萄糖苷,6-羟基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷和毛蕊异黄酮苷.结论:6-羟基山柰酚-3,6-二-O-葡萄糖苷,6-羟基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷和毛蕊异黄酮苷可特异结合神经元样PC12细胞,可能是补阳还五汤中发挥神经保护的效应成分.

甲肿消制剂及其含药血清中熊果酸的含量测定

目的:建立甲肿消制剂及灌胃给予甲肿消后大鼠血清中的熊果酸含量测定方法.方法:采用RP-HPLC/UV法测定熊果酸的含量,色谱柱:Agilent HC C18柱(4.6mm×250 mm,5 μm)和Easyguard 保护柱,流动相为甲醇:0.4%乙酸水溶液(88:12),检测波长为210 nm,流速1 mL·min-1.结果:制剂及大鼠血清中熊果酸的回收率分别为(100.54±0.24)%、(96.77±0.92)%,熊果酸在(3.535～141.4)μg·mL-1的浓度范围内线性良好.每克制剂含熊果酸80.87μg,灌胃给予甲肿消后大鼠血清中熊果酸浓度为13.74μg·mL-1.结论:本方法快速、简便、准确,可用于测定制剂及血清中熊果酸的含量.

固相萃取-高效液相色谱法测定大黄酸血药浓度及在大鼠体内的药动学规律

建立测定大鼠血浆中大黄酸的固相萃取-高效液相色谱方法,研究大黄酸在大鼠体内的药动学规律.方法　单次给予SD大鼠不同剂量的大黄酸,于不同时间点采集大鼠血浆.以固相萃取法处理血浆样品,用HPLC内标法测定血药浓度,色谱柱为Venusil XBP C18 (L)(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1％磷酸水(75:25),柱温为30℃,检测波长254 nm,以DAS2.0软件拟合计算药动学参数.结果　大黄酸的血药浓度在0.0192～11.72 mg·L-1线性关系良好(R2=0.9991),检测限为0.0096 mg·L-1,定量限为0.0192 mg·L-1,提取回收率均大于80％,日内、日间精密度RSD均小于6％.结论　大鼠灌胃给药大黄酸血药浓度-时间曲线呈二室模型.该法操作简便、快速、灵敏,适用于大黄酸在大鼠体内的药物动力学研究.

HPLC法测定甲肿消及大鼠血清中土贝母苷甲的含量

目的 建立甲肿消制剂及灌胃给予甲肿消后大鼠血清中土贝母苷甲的含量测定方法.方法 采用RP-HPLC法,甲肿消制剂用甲醇萃取,血清样品采用C18SPE固相萃取柱(3 mL,200 mg,60μm)处理,甲醇洗脱;色谱柱:DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)和Easyguard保护柱;流动相:甲醇-水(65:35),检测波长:214 nm,流速:1 mL/min.结果 甲肿消制剂及大鼠血清中土贝母苷甲的回收率分别为(103.49±3.49)%、(104.70±4.69)%,土贝母苷甲在1.18-88.5 μg/mL浓度范围内线性良好.每1 g制剂舍土贝母苷甲995.3μg,灌胃给予甲肿消后大鼠血清中土贝母苷甲浓度为3.19μg/mL.结论 本方法快速、简便、准确,可用于测定制荆及其血清中土贝母苷甲的含量.

SPE-HPLC测定乐舒洗液中黄柏碱含量

目的 建立乐舒洗液中黄柏的薄层鉴别,以及用固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC)测定黄柏碱含量的方法.方法 采用薄层色谱法对乐舒洗液中的黄柏进行定性鉴别.采用Bond Elut plexa PCX强阳离子交换固相萃取小柱净化,Platisil-NH2柱为色谱柱,柱温为30℃,流动相为0.3%三乙胺(磷酸调pH 3.82)-四氢呋喃-乙腈(18:12:70),等度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为286 nm,测定乐舒洗液中黄柏碱的含量.结果 薄层色谱法能明显检出黄柏的特征有效成分黄柏碱;黄柏碱在1.22~12.2μg(r=0.9999)范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为101.18%,RSD=1.71%.结论 本方法操作简单,准确性、重复性好,可用于乐舒洗液的质量控制.

SPE-HPLC测定金鸡颗粒中3种生物碱含量

目的 建立固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC)测定金鸡颗粒中盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱3种生物碱含量的方法.方法 选用WCX弱阳离子交换固相萃取小柱净化,采用Hvydro-RP 80A C18柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm),乙睛-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH 2.8,27∶73)为流动相,柱温为35℃,流速1.0mL/min,检测波长为265 nm.结果 盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱分别在4.94～49.44 ng(r =1.000 0)、4.36～43.60 ng(r= 0.9999)、3.99～ 39.94 ng(r= 0.9999)范围内线性关系良好,加样回收率分别为97.63% (RSD= 1.6%)、99.95%(RSD= 3.1%)、99.01% (RSD= 2.2%).结论 本方法 操作简便,准确性、重复性好,可用于金鸡颗粒中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱的含量测定.

大鼠尿样中马兜铃酸及马兜铃内酰胺的固相萃取方法

目的:研究大鼠尿样中多种马兜铃酸类(AAs)及马兜铃内酰胺类(ALs)化合物的固相萃取和富集的方法,为定量测定建立前处理方法.方法:以马兜铃酸-Ⅰ(AA-Ⅰ)、马兜铃酸-Ⅱ(AA-Ⅱ)、马兜铃内酰胺-Ⅰ(AL-Ⅰ)、马兜铃内酰胺-Ⅱ(AL-Ⅱ)和其他16个AAs及ALs化合物的高效液相色谱峰面积为指标,比较填料为C18的Agilent C18/100 mg,Alltech HC18/100 mg,Alltech C18/100 mg,Alltech C18/300 mg和填料为苯基(Phenyl)的AgilentPhenyl/200 mg 5种固相萃取(SPE)小柱对目标成分的萃取保留作用的强弱;以AA-Ⅰ,AA-Ⅱ,AL-Ⅰ和AL-Ⅱ的萃取回收率为指标,比较水和1%醋酸-0.02%三乙胺水溶液2种淋洗溶剂,乙醚、丙酮、氯仿、醋酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙腈7种洗脱溶剂对AAs及ALs化合物的萃取效果的影响;采用4因素3水平正交试验对影响固相萃取的条件包括活化体积、清洗体积、淋洗体积、洗脱体积等进行优化,以AA-Ⅰ,AA-Ⅱ,AL-Ⅰ,AL-Ⅱ和其他7个分离度好的AAs及ALs的色谱峰面积为指标,确定佳的因素水平.结果:确定固相萃取的条件为采用200 mg的Phenyl柱作固相萃取小柱,用1.0 mL甲醇活化和1.0 mL水清洗后,上大鼠尿样1.0 mL,以1%醋酸-0.02%三乙胺水溶液0.8 mL淋洗,3.0 mL甲醇洗脱.结论:建立的尿样固相萃取方法萃取效率高、选择性好、简单、省时,可作为大鼠尿样中多种AAs及ALs化合物分析测定的尿样前处理方法.

SPE-HPLC测定注射用红景天(冻干)中红景天苷和酪醇的含量

目的:测定注射用红景天(冻干)中红景天苷和酪醇的含量.方法:选用C18固相萃取小柱对样品进行纯化后用高效液相色谱法测定红景天苷和酪醇含量.Irregular-H C18柱(4.6 mm×250 mm,10μm),流动相甲醇-乙腈-0.06%磷酸(10:10:80),流速1.0 mL·min-1,检测波长275 nm,柱温30℃.结果:红景天苷在2.24～22.4μg、酪醇在0.856～8.56μg呈现良好的线性相关性,r分别为0.999 7,0.999 6,平均回收率分别为101.3%,99.8%.结论:本方法简便快捷,分离度好,结果准确可靠.

金银花中18种有机磷农药残留量分析方法的研究

目的:一次性检测金银花中18种有机磷农药的残留量.方法:以丙酮为提取溶剂,超声提取10 min,固相萃取为前处理方法,配有脉冲式硫磷检测器(PFPD),HP-1701毛细管柱的气相色谱仪检测.结果与结论:18种农药能够在30 min内完全分离,低检测限为4.0～18.0μg·kg-1;对18种有机磷农药在金银花中的添加回收率在83.64%～88.65%,RSD 2.8%～6.0%,符合多种农药残留的分析要求.

不同填料的固相小柱对人参皂苷Re血浆样品萃取回收率的研究

目的:以人参皂苷Re为研究对象,考察固相萃取小柱的洗脱条件和不同填料固相小柱的萃取效率,从而确定固相萃取人参皂苷Re血浆样品的实验方法.方法:以水,乙腈及不同含量的甲醇对固相小柱进行洗脱,将洗脱液在Zorbax SB-C18(4.6 mm×75 mm,5 μm)柱上以乙腈-水进行梯度洗脱,进行高效液相色谱分析.确定人参皂苷Re在固相萃取小柱上的洗脱条件.通过比较不同固相填料的萃取回收率,选择佳的固相萃取小柱.结果:大可用甲醇清洗含量为40%甲醇,甲醇洗脱小含量为80%的甲醇;在所考察的3种固相填料中,以Waters OasisHLB柱为固相填料时样品的萃取回收率好.结论:经试验,Waters Oasis HLB柱的萃取回收率在103%～113%,适用于血浆中人参皂苷Re的分析.

山梗菜生物碱类化合物的ESI-MSn研究

目的:对山梗菜中生物碱类化合物进行定性分析.方法:利用固相萃取技术(SPE)、电喷雾多级串联质谱技术(ESI-MSn)对山梗菜中生物碱类化合物进行定性分析.结果:初步确定了山梗菜中的2个生物碱结构分别是异山梗菜酮碱和8,10-二乙基山梗二酮,并根据其在正离子条件下表现出的特征质谱行为,提出了山梗菜中生物碱类化合物可能的电喷雾质谱碎裂规律.结论:固相萃取技术、电喷雾多级串联质谱技术能够快速简便地对山梗菜中生物碱类化合物进行定性分析.

SPE-HPLC测定复方吴茱萸巴布膏中吴茱萸碱和吴茱萸次碱血药浓度及药动学研究

目的:建立大鼠血浆中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的SPE-HPLC测定方法,并用于透皮给药后的药动学研究.方法:Kromasil C_(18)(4.6mm×250 mm,5μm),以乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸(51:48:1:0.1)为流动相,流速1 mL·min~(-1),检测波长为225 nm,柱温35℃,以氯氟舒松为内标溶液,崮相萃取后采用HPLC法测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的血浆浓度.结果:透皮给药后,药-时曲线符合一室模型,吴茱萸碱主要药动学参数Ka 224 h~(-1),Ke0.114 h~(-1),C_(max).0.211 mg·L~(-1),L~(-1),T_(peak)6.132h,吴茱萸次碱主要药动学参数K_a0.220 h~(-1),Ke0.118 h~(-1),C_(ma)×0.272 mg·L~(-1),T_(peak)6.102 h.结论:本方法简便、准确、灵敏度高,适用于大鼠透皮给药后吴茱萸碱和吴茱萸次碱的血药浓度测定及其药动学研究.

高效液相色谱法测定仙茅中仙茅苷的含量

目的:建立中药材仙茅中仙茅苷含量的反相高效液相色谱法.方法:甲醇为溶剂,超声提取,Sep-Pak C18柱净化,色谱柱Intertsill ODS-3,流动相甲醇-水-冰醋酸(45∶80∶1),流速1.0 mL*min-1,检测波长283 nm.结果:平均回收率为99.2%,RSD=1.7%(n=5),6个不同来源的仙茅药材中仙茅苷的含量在0.11%～0.35%.结论:可作为仙茅药材的质量控制方法.

枳实中辛弗林的固相萃取-HPLC测定

目的:和]用固相萃取-反相高效液相色谱法测定枳实中辛弗林的量,建立一种较佳的枳实中辛弗林的测定方法.方法:考察不同的样品处理方法及不同色谱条件对含量测定结果的影响,并进行方法学考察.结果:2%冰醋酸超声30 min,提取液通过C_(18)固相萃取小柱(500 mg,径高比2:1)处理,可得到较好的纯化效果.辛弗林进样量在0～0.996μg呈良好的线性关系(r=0.999 5),平均回收率和RSD分别为100.8%和2.5%,所测得各批次枳实中辛弗林的质量分数在0.2～7.9 mg·g~(-1).结论:本方法简便、准确,可为枳实质量评价提供有效手段.

固相萃取快速测定黑果枸杞果汁中酚酸类化合物

目的:建立固相萃取-HPLC快速测定黑果枸杞果汁中6种酚酸(没食子酸、原儿茶素、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、丁香酸).方法:经过固相萃取后的黑果枸杞果汁在色谱条件为:C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%甲酸缓冲液,流速1 mL·min-1时进行梯度洗脱.结果:6种酚酸类化合物在一定的范围内有良好的线性关系,相关系数均为0.9999.平均回收率(n=5)分别为97.70%(RSD2.3%),99.64%(RSD1.8%),100.70%(RSD2.1%),99.98%(RSD2.6%),99.60%(RSD2.2%),99.04%(RSD2.4%).结论:通过固相萃取技术以及HPLC法测定6种酚酸类成分的含量,为黑果枸杞果汁的质量控制和资源开发提供了切实可行的方法.