首页 > 文献资料
-
转铁蛋白修饰共载紫杉醇和人参皂苷Rg3脂质体制备及其靶向性研究
目的:构建转铁蛋白修饰共载紫杉醇和人参皂苷Rg3的靶向脂质体TFLP-PTX/Rg3,观察TFLP-PTX/Rg3的肿瘤靶向治疗效果.方法:用后插入法制备转铁蛋白修饰的双载药脂质体,考察其性状、粒径、电位和包封率等理化性质;MTT法检测不同脂质体对肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术和细胞共聚焦实验检测HepG2细胞和HU-VEC细胞对脂质体摄取效率;构建肝癌裸鼠异位瘤模型,考察脂质体的体内分布和不同载药脂质体对肿瘤生长抑制效果以及载近红外染料脂质体在荷瘤裸鼠的体内分布.结果:TFLP-PTX/Rg3的粒径为(133±8.9) nm,电位为(2.35±1.15) mV,PTX与Rg3的包封率分别为81.7％和67.4％.给药24 h后,以生理盐水组为对照,未修饰转铁蛋白的共载药脂质体(LP-PTX/Rg3)对肝癌HepG2细胞抑制率为(35.4±5.5)％,转铁蛋白修饰紫杉醇脂质体(TFLP-PTX)为(32.2±4.3)％,转铁蛋白修饰Rg3脂质体(TFLP-Rg3)为(48.5±6.2)％,转铁蛋白修饰共载药脂质体(TFLP-PTX/Rg3)为(78.7±7.6)％,TFLP-PTX/Rg3与TFLP-PTX组(P=0.004)、TFLP-Rg3组(P=0.003)和LP-PTX/Rg3组(P=0.001)比较,差异有统计学意义;HepG2细胞对TFLP的摄取效率是普通脂质体(LP)的2.9倍,差异具有统计学意义,P=0.002.HUVEC细胞对TFLP的摄取效率与对LP的摄取效率相近,差异无统计学意义,P=0.09;荷瘤裸鼠治疗实验以生理盐水组为对照,LP-PTX/Rg3对肿瘤生长的抑制率为(17.5±3.4)％,TFLP-PTX为(42.6±6.1)％,TFLP-Rg3为(31.6±5.5)％,TFLP-PTX/Rg3为(76.5±7.3)％,TFLP-PTX/Rg3组与TFLP-PTX组(P=0.004)、TFLP-Rg3组(P=0.003)和LP-PTX/Rg3组(P=0.001)比较,差异有统计学意义;荷瘤裸鼠的体内分布实验结果显示,转铁蛋白修饰脂质体在裸鼠肿瘤组织分布显著强于无转铁蛋白修饰脂质体.结论:TFLP-PTX/Rg3与肝癌HepG2细胞具有良好的亲和性,是一种高效的肿瘤靶向靶向给药系统.
-
转铁蛋白受体介导的Bcl-2 shRNA对U251细胞生长的抑制
目的:构建Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体并研究其对神经胶质瘤细胞U251生长的抑制作用.方法:针对Bcl-2基因编码shRNA的序列,克隆到携带绿色荧光蛋白基因的载体,经酶切电泳和DNA测序鉴定.采用转铁蛋白-多聚乙烯亚胺介导的转染方法将重组的shRNA质粒转入U251细胞后,通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察绿色荧光蛋白的表达,用免疫细胞化学的方法检测Bcl-2蛋白表达水平;采用MTT法测定细胞增殖情况.结果:编码短发夹状的RNA序列被成功地插入到预期位点.转染Bcl-2 shRNA1、shRNA2载体分别入U251细胞后,其Bcl-2蛋白表达水平均显著降低,P＜0.05.U251细胞在48、72和96 h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA组比,差异有统计学意义,P＜0.05.结论:构建的两个Bcl-2shRNA均可特异性地抑制U251细胞生长.
-
荧光双向电泳和串联质谱技术检测卵巢上皮癌血清标志物的研究
目的 通过差异蛋白质组学的方法寻找卵巢上皮癌血清标志物,以提高卵巢癌诊断的灵敏度和特异度.方法 收集103例卵巢上皮癌、60例正常对照、63例卵巢良性肿瘤和63例盆腔良性病变患者的血清.按照患者年龄匹配,选取卵巢上皮癌、盆腔良性病变、卵巢良性肿瘤和正常对照者血清各20例,等容积混合,去除高丰度白蛋白和IgC后,进行荧光双向电泳(2-DE DIGE),实验重复3次.以OyCyder软件分析得出有显著差异的蛋白质点,以基质辅助激光解吸离子飞行时间串联质谱(MALDI TOF/TOF)鉴定差异蛋白质,分别采用Western blot和酶联免疫吸附实验(ELISA)验证获选的血清标志物.结果 2-DE DIGE得出有显著差异的蛋白质点41个,MALDI TOF/TOF成功鉴定出其中的28个蛋白质.上调显著的蛋白质为结合珠蛋白(Hp),下调显著的蛋白质为转铁蛋白(Tf).Western blot和ELISA验证结果显示,Hp和Tf在卵巢上皮癌与正常对照、卵巢上皮癌与卵巢良性肿瘤、卵巢上皮癌与盆腔良性病变之间的差异有统计学意义(均P=0.000).CAl25+Hp+Tf联合检测诊断卵巢上皮癌的灵敏度(81.6%)和特异度(76.9%)高于CA125(78.6%和70.4%)、Hp(69.9%和70.4%)和Tf(66.0%和70.4%)单独检测.结论 Hp和Tf是卵巢上皮癌血清中差异表达的蛋白质,可作为卵巢上皮癌的血清标志物,CAl25+Hp+Tf联合检测有助于提高卵巢上皮癌诊断的灵敏度和特异度.
-
转铁蛋白基因与晚发性阿尔茨海默病的关联研究
该研究对转铁蛋白基因(TF)多态性与晚发性阿尔茨海默病(LOAD)的关系及其与载脂蛋白E(ApoE)等位基因对LOAD发病风险的共同影响进行探讨.
-
基于靶向转铁蛋白受体的荧光探针在原位胶质瘤动物模型的研究
目的 探究靶向转铁蛋白受体的荧光探针在原位胶质瘤动物模型上的应用价值.方法 将人胶质瘤细胞株U87转染表达荧光素酶的慢病毒H113,构建稳定表达荧光素酶的U87-MGH113稳定细胞株.在15只小鼠尾状核头部接种U87-MG H113细胞.接种3周后,腹腔注射荧光素酶底物,在小动物活体成像仪上采用荧光素酶专用检测通道检测确定成瘤.将确定成瘤的12只动物模型按随机数字表法随机分为PBS组、Cy5-CRT组、Cy5-CG7C组3组,尾静脉分别注射200μ10.1 mol/L的PBS、Cy5-CRT、Cy5-CG7C,注射24、36、48 h后在小动物活体成像仪上采用Cy5专用检测通道检测.结果 (1)成功构建了稳定表达荧光素酶的细胞株,并且证实单位时间内检测到的信号强度与细胞数量的多少成线性关系;(2)在成像效果好的36 h时间段,3组的荧光信号强度分别为5.78±0.16(PBS组)、44.16 ±0.33(Cy5-CRT组)、5.34±0.17(Cy5-CG7C组),Cy5-CRT组明显强于PBS组和Cy5-CG7C组,差异有统计学意义(P ＜0.005).结论 Cy5-CRT光学探针在胶质瘤处聚集,与正常脑组织有很好的区分性,具有潜在的临床应用价值.
-
珠蛋白生成障碍性贫血妊娠妇女血清转铁蛋白受体的测定
目的 通过测定妊娠期珠蛋白生成障碍性贫血(地中海贫血)妇女与正常妊娠妇女、缺铁性贫血妊娠妇女的可溶性血清转铁蛋白受体(sTfR)水平,探讨sTfR值对诊断妊娠期地中海贫血的价值.方法 随机选择妊娠20～24周,年龄24～30岁,排除合并其他疾病的妇女,应用溶血百分比和基因检测法诊断α和β地中海贫血,ELISA法检测sTfR值并进行统计学分析. 结果 妊娠期地中海贫血妇女的sTfR值为18.614±8.464nmol/L,低于临界值(28.1nmol/L, P＜0.05),属于正常范围.妊娠期地中海贫血妇女的sTfR值明显低于正常妊娠妇女( P＜0.01).结论通过sTfR值能准确诊断妊娠妇女的缺铁性贫血,但妊娠妇女sTfR浓度降低的原因及其降低对地中海贫血的影响有待于进一步研究.
-
IgA肾病肾组织中CD71表达的分子特征
目的 阐明转铁蛋白受体(CD71)在IgA肾病(IgAN)肾组织中表达的分子构象特征及其与IgA分子构象特征之间的相互关系,探讨它在IgAN免疫发病机制中的作用.方法 170例肾活检患者根据临床表现和肾活检病理诊断分为原发性IgAN组(原发组)、非IgAN性IgA沉积患者组(继发组)、无IgA沉积肾病组(对照组).在激光共聚焦荧光显微镜下,运用免疫荧光双套色法标记的抗体观察四甲基罗丹明(TRITC)标记CD71和异硫氰荧光素(FITC)标记IgA在肾组织上的分子表达.结果 CD71在对照组患者的肾小球上呈微弱表达或不表达,在原发组和继发组呈不同程度的阳性表达,且在原发组呈阳性高表达.在激光共聚焦荧光显微镜下观察到CD71的表达与IgA表达呈共位.结论 CD71在IgAN患者肾小球上呈高表达,且与IgA分子呈共位状态,说明CD71参与了IgAN的发病过程,提示CD71在IgAN免疫发病机制中发挥着重要的作用.
-
可溶性转铁蛋白受体在糖尿病患者贫血诊断中的应用
本文探讨了可溶性转铁蛋白受体水平在糖尿病(DM)患者缺铁性贫血(IDA)和非缺铁性贫血鉴别诊断中的意义.
-
血清铁等四项联合检测对妊娠期贫血的诊断价值研究
目的:探讨血清铁(Fe)、铁蛋白(SF)、可溶性转铁蛋白受体(sTfR)及促红细胞生成素(EPO)等4项联合检测对妊娠期贫血的诊断价值.方法:选择不同妊娠期妇女150例及健康对照非妊娠妇女50例,分别测定血清Fe、SF、sTfR及EPO水平并进行比较.结果:早孕组SF和EPO,以及中孕组及晚孕组各项指标与对照组比较,均差异显著或非常显著(P＜0.05,P＜0.01);中孕组及晚孕组各项指标异常例数与早孕组比较,均差异非常显著(P＜0.01).结论:血清铁等4项联合检测对妊娠期妇女贫血的早期诊断具有重要参考价值.
-
关键词：
-
微量免疫比浊法测定血清免疫球蛋白、转铁蛋白和载脂蛋白含量
本研究建立了一种微量免疫比浊方法,可同时测定人体血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、转铁蛋白(Tf)和载脂蛋白(Apo-AI,Apo-B).方法原理根据人体蛋白质分子的抗原特性,与抗体试剂发生特异性结合后形成微细颗粒复合物在PEG液中沉淀,经呈90度角的荧光照射后所产生的光散射强度求得相应的蛋白质含量.方法具有用血量微、灵敏度高和简单快速的特点.本文用此方法对我国优秀运动员的正常参考值进行了测定.
-
低氧暴露对运动性低血红蛋白大鼠血清铁代谢的影响
目的:探讨低氧暴露对运动性低血红蛋白大鼠血清铁代谢的影响.方法:采用6周递增负荷跑台运动建立大鼠运动性低血红蛋白模型,人工常压低氧环境下(14.5%O2)分别采用每天1h、2h、和(1+1)h三种暴露方式进行恢复,3周后测定运动性低血红蛋白大鼠血清铁、总铁结合力、血清铁蛋白和转铁蛋白的变化.结果:1h、2h和(1+1)h三种低氧暴露方式均能使运动性低血红蛋白大鼠血清铁、血清铁蛋白和总铁结合力显著升高(P＜0.05,P＜0.01),而血清转铁蛋白则显著下降 (P＜0.05);三种低氧暴露方式之间,除(1+1)h低氧暴露恢复组总铁结合力显著高于1h低氧暴露恢复组(P＜0.01)外,其他未见显著差异.结果提示:低氧暴露可促进血清铁代谢,使体内储存铁增加,有利于运动性低血红蛋白恢复.
-
经动脉导人脂质体联合转铁蛋白介导的p53基因治疗肝癌的实验研究
目的 探讨经导管动脉内联合应用转铁蛋白对脂质体介导的p53基因治疗肝癌的转染效率及治疗效果的影响.方法 25只荷瘤兔(VX2肝癌模型兔)采用随机数字表法分为5组,每组5只.取0、100、200、300、400 μg的转铁蛋白(Tf)分别与阳离子脂质体(LipofectAMINE)和真核细胞表达质粒(pCMV-myc-p53)的复合体混合后,分别注入5组兔VX2肝癌模型的肿瘤供血动脉内,48 h后提取肿瘤组织蛋白,采用免疫斑点法(Western blot)和免疫组化法检测基因的转染及其表达水平.对5个不同Tf剂组p53表达水平的比较,采用x2检验.另取10只荷瘤兔分为2组,1组经肿瘤供血动脉注入Tf200 μg及LipefectAMINE 45 μl和pCMV-myc-p53质粒15 μg形成的复合体,另1组仅注入后两者的复合体,观察2组兔的肝功能、肿瘤体积和生存期.对2组实验兔同一时间点的肝功能输测结果采用成组t检验;肿瘤体积检查结果采用配对t检验;生存期采用单一样本均数t检验.结果 Western blot半定量分析显示,含Tf组的实验兔p53基因的转染及表达水平均较不含Tf组高.免疫组化染色显示,含0、100、200、300、400 μg Tf的5组实验兔,p53基因高度表达的阳性率分别为58.33%、69.44%、80.00%、83.33%、81.67%,含Tf组与不含Tf组之间差异有统计学意义(总体x2=42.37,P<0.01);随着Tf的量从0增加到200 μg,053基因高度表达的比例逐渐增加,但Tf自200 μg增加到400 μg时,p53基因高度表达比例差异无统计学意义(x2分割:前3组x2=4.8161,P<0.05,后3组x2=0.67,P>0.05).含Tf及不含Tf组实验兔术前及术后各时间点肝功能结果比较的差异无统计学意义(P值均>0.05),术后第3、7、10、14、20、25、30天2组实验兔平均肿瘤体积分别为(4.33±0.72)、(5.65±0.85)、(7.12±0.99)、(8.44±1.23)、(9.21±1.51)、(10.32±1.78)、(11.55±1.90)cm3和(4.36±0.66)、(4.86±0.68)、(5.12±0.73)、(5.72±0.93)、(6.13±1.26)、(6.68±1.38)、(7.02±1.55)cm3,在同一时间点差异有统计学意义(t=4.59,P<0.05),2组实验兔的平均生存时间分别为(28.6±2.2)及(35.8±3.1)d,差异有统计学意义(t=1.52,P<0.05).结论 经动脉途径联合应用Tf是安全的,可明显提高脂质体介导的p53基因的转染效率和治疗效果.
-
转铁蛋白在蛋白多肽药物口服给药中的应用
转铁蛋白作为一种药物载体,在蛋白多肽药物的口服给药领域有着美好前景.以转铁蛋白作为药物载体,可以使蛋白肽类药物在肠道吸收;对转铁蛋白进行适当的修饰,可以提高其递送效率.本文概述了近年来转铁蛋白在蛋白多肽药物口服给药中的作用及有关转运机制的研究进展.
-
青蒿素类化合物抗肿瘤机制研究-青蒿素类化合物/转铁蛋白对接研究
本文采用柔性分子对接技术,将11个青蒿素类化合物对接到在不同分离度下测出转铁蛋白结构的活性腔内,研究其抗肿瘤机制,运用多种打分函数对结果进行打分.从对接结果可看出,转铁蛋白结构中键合铁的Asp-63、Tyr-188和His-249残基以及稳定键合位点的Arg-124和Lys-296残基与青蒿素小分子的距离小于0.5 nm,活性大的化合物得分较高.对接后的模型解释了转铁蛋白的存在促使Fe2+与青蒿素作用、青蒿素不参与其他的代谢、增加青蒿素细胞毒性的机制,为设计、合成全新青蒿素类化合物打下了良好的基础.
-
转铁蛋白转运培氟沙星的分子作用机制研究
利用光谱实验结合计算机模拟技术研究转铁蛋白(Transferrin,Tf)转运药物培氟沙星(pefloxacin mesylate,PM)的相互作用机制,测定反应体系的结合参数及热力学函数,考察PM对Tf分子构象的影响,并讨论结合反应的分子作用机制.结果表明,药物分子与转铁蛋白的相互作用表现为动态结合过程,PM与Tf分子的结合距离r值较小,说明发生了能量转移现象.药物分子对转铁蛋白分子的结构域微区构象产生影响,使结合位域的疏水性发生改变.转铁蛋白转运培氟沙星的热力学参数表明PM与Tf之间是以疏水作用力为主的分子间作用机制.依据计算机模拟建立的分子对接结果显示,PM与Tf的相互作用主要为疏水作用,兼有氢键的存在,计算机分子模拟与光谱实验结果一致.
-
转铁蛋白修饰的载基因前阳离子脂质体制备及其表达研究
本文制备、优化转铁蛋白修饰的前阳离子脂质体,并研究其相关性质.通过薄膜分散膜挤压法制备空白前阳离子脂质体;以鱼精蛋白缩合质粒DNA与空白前阳离子脂质体作用形成载基因前阳离子脂质体(PLPD);转铁蛋白(transferrin,Tf)再与PLPD作用形成转铁蛋白修饰的载基因前阳离子脂质体(Tf-PLPD);中心组合设计优化制备工艺;以lacZ为报告基因转染人肝癌细胞株HepG2;测定形态、粒径、电位和转染效率.结果显示,PLPD形态近似于球体,平均粒径为(228.9±8.0)nm,多分散指数为0.122±0.020(n=3);zeta电位为(-25.08±2.50)mV(n=3),转染效率(12.18±3.80)mU·mg-1(protein).Tf-PLPD平均粒径为(240±12)nm,多分散指数为0.150±0.030(n=3);zeta电位为(-24.10±2.50)mV(n=3);转染效率(24.26±2.60)mU·mg-1(protein)是裸质粒的20倍;实验结果也表明血清的存在不影响PLPD和Tf-PLPD的转染效率;PLPD和Tf-PLPD小于阳离子脂质体LPD对人肝癌细胞HepG2,SMMC7721和张氏正常肝细胞3种细胞株的毒性.由此可见,转铁蛋白修饰的前阳离子脂质体作为基因转运的非病毒载体具有良好的应用前景.
-
茵栀黄联合三联活菌治疗新生儿黄疸的临床研究
目的 观察茵栀黄颗粒联合三联活菌对新生儿黄疸血清总胆汁酸、转铁蛋白和C反应蛋白的影响.方法 82例新生儿黄疸随机分为对照组41例与试验组41例.2组均给予常规治疗及对症治疗,对照组给予茵栀黄颗粒3 g温开水或奶水送服,每日3次;试验组在对照组的基础上给予双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊105 mg,每日2次.2组患儿均治疗7d.治疗后,比较2组患儿血清胆红素、转铁蛋白、C反应蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、总胆汁酸、总胆红素、直接胆红素水平及药物不良反应发生情况.结果 治疗后,试验组总有效率为92.68％(38/41例),对照组为75.61％(31/41例),差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后,试验组血清胆红素为(54.41±7.21) μmol·L-1,对照组为(121.54±14.54)μmol·L-1(P＜0.05).试验组的C反应蛋白为(8.52±1.20)mg·L-1,对照组为(12.15±1.97)mg·L-1 (P ＜0.05).试验组的谷草转氨酶为(35.88±5.26)mmol·L-1,谷丙转氨酶为(45.54±6.43)mmol·L-1,碱性磷酸酶为(138.92±20.15) mmol·L-1,对照组的谷草转氨酶为(45.25±6.13)mmol· L-1,谷丙转氨酶为(102.15±14.31)mmol·L-1,碱性磷酸酶为(172.21±28.51) mmol·L-1,2组差异有统计学意义(P＜0.05).试验组总胆汁酸为(10.45±1.51)μmol·L-1,总胆红素为(10.35±1.55)μmol·L-1,直接胆红素为(18.52±2.26) μmol·L-1,对照组总胆汁酸为(23.16±3.31)μmol·L-1,总胆红素为(57.14±8.35) μmol·L-1,直接胆红素为(62.81±9.07) μmol·L-1 (P ＜0.05).试验组的转铁蛋白水平为(1.93 ±0.25)g·L-1,对照组转铁蛋白水平为(1.61±0.23)g·L-1 (P ＜0.05).药物不良反应主要表现为头痛、恶心、皮疹,对照组药物不良反应发生率为12.20％ (5/41例),试验组为7.32％(3/41例),差异无统计学意义(P＞0.05).结论 茵栀黄颗粒联合三联活菌对新生儿黄疸有较好的临床疗效,药物安全性高.
-
尿微量蛋白检测对早期诊断糖尿病肾病的价值
目的 探讨尿微量蛋白检测对诊断糖尿病早期肾损害的价值.方法 采用散射比浊法对52例尿蛋白定性阴性的糖尿病患者和38例健康体检人员尿液微量白蛋白(mAlb)、转铁蛋白(TRF)和α1-微球蛋白(α1-MG)进行检测,并对结果进行分析.结果 糖尿病组的尿mAlb、TRF和α1-MG的含量分别为(21.24±9.85)mg/L、(3.85±2.07)mg/L、(14.11±3.45)mg/L,明显高于正常对照组的(9.84±4.73)mg/L、(0.88±0.37)mg/L、(6.24±2.43)mg/L, P值均<0.01.52例糖尿病患者尿mAlb、TRF和α1-MG超过正常上限的阳性例数分别为19、30、26;阳性率分别为36.54%,57.69%和50.00%;在52例患者中mAlb和/或TRF与α1-MG同时阳性的例数为23例,阳性率为44.23%.结论 尿mAlb、TRF及α1-MG联合检测可作为糖尿病肾病早期诊断的敏感可靠的实验室指标,有助于临床全面判断肾脏损害的部位及损伤程度.
-
血清胱抑素C和尿微量白蛋白、转铁蛋白联合检测在糖尿病肾病早期诊断中的临床应用
目的：探讨血清胱抑素C(Cys-C)和尿微量白蛋白(UMA)、转铁蛋白(TRF)联合检测在糖尿病肾病早期诊断中的临床应用价值。方法选取本院2010年1月~2013年6月135例2型糖尿病患者，按照尿微量白蛋白排泄率并分为Ⅰ组(正常蛋白尿)、Ⅱ组(早期DN组)、Ⅲ组(蛋白尿组)，并选取健康者45例作为对照组，分析比较四组尿微量白蛋白、尿转铁蛋白、血清胱抑素C含量，并检测各组阳性。结果伴随病情加重， UMA、TRF、Cyc-C水平增高，且阳性检出率也随之增加，差异存在统计学意义(P<0.05)。结论 UMA、TRF、Cyc-C联合检测，对于糖尿病肾损害检测具有明显作用，简便可行。
