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浸润性乳腺癌的分子分型及相关治疗概况
概述浸润性乳腺癌的分子病理学分型及相对应的细胞起源、与组织病理学的相关性,以及其他重要的分子遗传学特征.从分子病理学角度,介绍浸润性乳腺癌基于分子表达模式的治疗概况.
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湖北省2012年流行株O139霍乱弧菌脉冲场凝胶电泳分型分析
目的 分析3起霍乱疫情病原O139霍乱弧菌分子分型特征和遗传相关性,探讨O139霍乱疫情流行特征.方法 对2012年湖北省3起霍乱疫情分离鉴定的35株O139霍乱弧菌菌株用水煮法提取DNA,利用聚合酶链反应检测霍乱肠毒素CT基因;取新鲜培养的菌株,制备约4.3个麦氏单位的细菌悬浮液,经裂解、洗涤及限制性内切酶NotI和SfiI酶切后进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,用凝胶成像仪获取电泳图像,分析DNA片段并用BioNumeries V4.6软件UPGMA方法(复选Dice相关系数)进行聚类分析. 结果 35株O139霍乱弧菌ctxA基因PCR扩增产物约为308 bp,分离自聚餐食用的凉菜、病人、带菌者及厕所标本(对应病人家)O139霍乱弧菌均为产毒株,经NotI酶切分为9种PFGE带型,SfiI酶切分为6种PFGE带型;A市2株病人分离菌和4株带菌者分离菌PFGE带型为KZGN11O139.CN0077+ KZGS12O139.CN0054,B市1株病人分离菌和1株厕所分离菌PFGE带型为KZGN11O139.CN0302+KZGS12O139.CN0058,C市和D市分离菌株优势型为KZGN11O139.CN0276+ KZGS12O139.CN0007,包括3株食品分离菌、2株厕所分离菌及16株病人和带菌者分离菌,另有6株PFGE带型呈现多样性. 结论 2012年湖北省霍乱疫情特点为散发以及聚餐导致的局限暴发,3起疫情的分离菌株带型各不相同,呈现多样性,其中2起为单一菌型感染,1起为混合菌型感染,传染来源复杂且不明确,提示应加强霍乱的病原学监测.
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2013-2015年河南省甲型副伤寒沙门菌分子分型与耐药研究
目的 了解河南省人群感染甲型副伤寒沙门菌的耐药状况与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子型别特征,为甲型副伤寒的疾病监测及其防治策略提供基线数据. 方法 对2013-2015年河南省监测哨点医院分离的67株甲型副伤寒沙门菌采用K-B纸片法检测对13种抗生素敏感性,并进行PFGE分子分型分析. 结果 67株甲型副伤寒沙门菌对8类13种抗生素均有不同程度的耐药,有63株为多重耐药菌株(占94.0％),其中耐2～3种9株(占13.4％),耐5～8种42株(占62.7％),耐9～10种8株(占11.9％),耐11～12种4株(占5.9％).菌株对头孢类、喹诺酮类等5类抗生素耐药率总体呈逐年上升趋势.经XbaⅠ酶切与PFGE电泳分析,67株甲型副伤寒沙门菌共获得10种带型,每种带型包含菌株数1～48株不等,相似度94.31％～100％. 结论 河南省甲型副伤寒沙门菌分离株耐药状况严重,PFGE带型呈多样性且具有一定的优势带型特点,同一PFGE菌株的耐药谱较为接近.
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2010～2012年深圳市龙岗区致感染性腹泻沙门菌的流行特征和分子分型
目的 分析2010～2012年深圳市龙岗区致感染性腹泻沙门菌的流行特征及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,为沙门菌病的防控提供参考依据. 方法 对147株沙门菌进行生化鉴定和血清分型,利用PFGE进行分子分型,采集相关的流行病学信息并分析. 结果 龙岗区2010～2012年沙门菌的流行具有明显季节性,第三季度为高峰期(46.3％,96/147);患者主要为婴幼儿(27.9％,41/147)和青壮年(23.1％,37/147),男女比例为1.37∶1(85/62).147株沙门菌分属于33种血清型,肠炎沙门菌(35.4％,52/147)和鼠伤寒沙门菌(28.6％,42/147)为优势血清型,Xba Ⅰ酶切将其分为105种带型,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌分别有17和34种PFGE型别,优势分子型别分别是XE5、XE1和XP8.AvrⅡ酶切显示本地区可能有数起小型暴发. 结论 深圳市龙岗区2010～2012年沙门菌PFGE型别较多,菌株来源复杂,主要呈散发状态,偶有局部小型暴发,夏秋季要做好学龄前儿童和青壮年沙门 菌病的防控工作.
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河南省德尔卑沙门菌和阿贡纳沙门菌耐药与分子分型研究
目的 分析2009-2012年河南省德尔卑沙门菌和阿贡纳沙门菌临床分离株的耐药状况与脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型,为以德尔卑沙门菌、阿贡纳沙门菌等非伤寒沙门菌为代表的食源性疾病暴发预警、调查、溯源及公共卫生意义上的抗生素使用策略提供基线与参考数据. 方法 根据国际PulseNet细菌性传染病分子分型监测网络公布的非伤寒沙门菌PFGE分型技术与美国临床与实验室标准协会(CLSI)沙门菌K-B法药敏测试方案,对2009-2012年分离自河南省5个哨点医院的德尔卑沙门菌与阿贡纳沙门菌进行13种抗生素的药敏测试及PFGE脉冲场凝胶电泳分子分型分析. 结果 76株德尔卑沙门菌与84株阿贡纳沙门菌对8类13种抗生素均有不同程度的耐药,耐3种以上抗生素的有141株(88.13％).其中耐3～5种抗生素38株(占23.75％),耐6～8种抗生素66株(占41.25％),耐9～10种抗生素22株(占13.75％),耐11～12种抗生素15株(占9.38％).84株阿贡纳沙门菌经Xba Ⅰ酶切与脉冲场凝胶电泳后获得36种带型,每种带型包含1～9个菌株,相似度50.77％～100％,以AGN27与AGN33为主要优势带型.76株德尔卑沙门菌经XbaⅠ酶切与脉冲场凝胶电泳后获得41种带型,每种带型包含菌株数1～12个菌株,相似度43.25％～100％,以DER17与DER34为主要优势带型. 结论 河南省临床分离株德尔卑沙门菌和阿贡纳沙门菌耐药状况较严重,PFGE带型呈现出多样性的同时又具有较显著的优势带型特点,部分带型与其对应的耐药谱具有一定的关联性及相同的聚集性.
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肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染分子流行病学方法研究进展
肠出血性大肠埃希菌O157:H7严重危害着人类的健康,已成为世界范围内的公共卫生问题.随着分子生物学的发展,质粒图谱分析,脉冲场凝胶电泳分型、随机扩增多态性分析、限制性片段长度多态性分析、扩增片段长度多态性分析、多位点可变数量串联重复序列分析、多位点测序分型等技术被先后应用于O157:H7感染的分子流行病学研究,本文对其研究进展进行了简要的综述.
关键词： 肠出血性大肠埃希菌O157 H7 分子流行病学 分子分型 综述 -
A群链球菌的分子分型研究进展及应用
A群链球菌(GAS)是全球范围内的重要致病菌,可引起多种严重感染性疾病、免疫介导性疾病和中毒性疾病.GAS的分子分型鉴定是其分子流行病学的重要研究内容,近年多种分子分型技术应用于GAS分型鉴定研究,该文对A群链球菌的主要分子分型技术的原理、应用和相关性研究进行综述.
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2006～2010年湖北省流行性脑脊髓膜炎病原学和血清学监测分析
[目的]分析湖北省2006～2010年流行性脑脊髓膜炎(流脑)病原学和血清学监测结果,掌握湖北省流脑的变迁规律.[方法]对2006～2010年分离的脑膜炎奈瑟菌(Nm)菌株进行生化鉴定、血清学分型和药物敏感性检测,并采用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行分子分型；对所有的脑脊液和血液标本进行Nm种属特异性荧光PCR检测；对健康人群血清,运用血清杀菌试验(SBA)进行C群杀菌力抗体水平测定.[结果]2007年湖北省Nm以B群为主,2008～2010年以来C群为优势菌群；对青霉素等6种抗生素均敏感,但对环丙沙星、米诺环素、萘啶酸、复方新诺明4种抗生素出现多重耐药；分子分型结果显示,湖北省B群Nm菌株具有高度的遗传多样性,未发现明显优势的克隆群,C群优势病原株为ST-4821型.RT PCR检测(988份脑脊液)确诊29例流脑病例,其中C群22例,A群2例、B群5例.C群杀菌力总保护率(抗体滴度≥1∶8)为38.10％.[结论]湖北省流脑菌株发生了从B群散发到C群流行的变迁,人群对C群Nm的免疫力不足.
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乌鲁木齐市水磨沟区霍乱弧菌分离株脉冲场凝胶电泳分析
[目的]了解新疆乌鲁木齐市水磨沟区相关年份霍乱弧菌分离株分子分型特征和遗传相关性.[方法]用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对霍乱菌株进行分子分型,用BioNumericsV4.0软件UPGMA方法进行聚类分析.[结果]54株受试菌以NotI酶切后分为34个型,除1998023、2001009、2006010、1998160外,其他菌株带型高度相似(相似系数0.98),不同年份分离菌株型别不相同.[结论]乌鲁木齐水磨沟区霍乱弧菌可能含有多个克隆系,且分离出的霍乱弧菌为地方株.
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沈阳地区致泻性大肠埃希菌的多重PCR检测及流行特征分析
目的 通过致泻性大肠埃希菌(DEC)的检测和分子分型,了解沈阳地区腹泻患者的DEC发生率及流行特征.方法 针对DEC毒力相关基因合成相应引物,建立多重PCR,用于检测沈阳地区2011-2014年腹泻患者粪便标本DEC.结果 应用多重PCR方法检测406份腹泻标本,检出DEC 27株,检出率为6.65％.其中EPEC 2株(0.49％)、EHEC 1株(0.25％)、ETEC 4株(0.99％)、EIEC 1株(0.25％)、EAEC 19株(4.68％),检出率以EAEC高.27株DEC中检出astA、pic、estlb、esc V、stx1A、stx2A和invE等7种基因组合模式,以astA毒力基因占优势.0～岁、18～岁、60～岁年龄组DEC检出率分别为5.56％(1/18)、6.51％(22/338)和8.00％(4/50),各年龄组腹泻患者DEC检出率差异无统计学意义(x2=0.192,P=0.908);男、女性腹泻患者DEC检出率分别为6.39％(14/219)和6.95％(13/187),差异无统计学意义(x2=0.051,P=0.822).2012、2013和2014年DEC检出率为11.83％(11/93)、6.03％(12/199)和3.51％(4/114),各年份DEC检出率差异无统计学意义(x2=5.952,P=0.051).结论 沈阳地区腹泻患者中DEC存在5种类型,以EAEC为主.多重PCR方法适用于大批量标本的DEC筛查与分离株的分型鉴定.
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复合PCR-RFLP技术用于尖音库蚊复组抗性相关酯酶基因分子分型
目的 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测法,建立尖音库蚊抗性酯酶等位基因分型方法.方法 根据尖音库蚊抗性酯酶基因保守区序列设计引物;提取单个蚊虫基因组DNA,采用PCR-RFLP分析的方法,对抗性酯酶等位基因分型.结果 酯酶基因扩增片段长度为860 bp,经限制性内切酶酶切后,尖音库蚊抗性Est-β11纯合型有5条带(70、89、147、198和347 bp);Est-β2纯合型出现4条带(60、147、207和437 bp);Est-β11/Est-β2杂合型出现5条带;Est-βN纯合型出现3条带(147、207和506 bp).结论 PCR-RFLP方法能快速、有效地检测尖音库蚊抗性酯酶等位基因类型.
关键词： 尖音库蚊复组 抗性基因 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 分子分型 -
合肥市肉鸡沙门菌携带情况调查
目的 了解合肥市养殖屠宰环节中肉鸡沙门菌的带菌率、血清型分布、抗生素耐药谱分布以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型情况,为合肥市食品安全提供科学的基础数据,为进一步加强合肥市公共卫生安全提供科学依据.方法 2010年7-9月对合肥市10家肉鸡养殖场和14家屠宰户分别采用肛拭法和胴体漂洗法采集45份肉鸡活体和45份肉鸡胴体标本,根据GB/T 4789.4-2010对沙门菌进行分离、鉴定以及血清学分析;并采用PCR方法进行复核鉴定;对终确定的阳性菌株使用临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的纸片法进行药敏试验;同时采用PFGE方法确定其分子分型.结果 在45份肉鸡活体样本中未检出沙门菌;45份肉鸡胴体样本中检出12株沙门菌,检出率为26.7％,经PCR复核检测,所分离的12株沙门菌对invA和hilA基因的携带率均为100％; 12株沙门菌分为3种血清型,其中9株为印第安纳沙门菌,2株为鼠伤寒沙门菌,1株为肠炎沙门菌;12株沙门菌对实验中所采用的15种抗生素总耐药以及多重耐药菌株数均为10株;12株沙门菌共分出7种PFGE带型,9株印第安纳沙门菌共分离出5种不同的PFGE带型;同一血清型的沙门菌分子分型结果,基本位于同一大簇中;相同PFGE带型的菌株,耐药谱非常接近.结论 合肥市肉鸡胴体沙门菌检出率高,沙门菌的血清型、药敏性以及基因型具有多样性特征,耐药现象严重,相同PFGE带型的菌株,耐药谱非常接近.
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一种区分田鼠型与非田鼠型鼠疫耶尔森菌的PCR-RFLP方法
目的 建立一种快速区分鉴别田鼠型与非田鼠型鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的分子分型方法.方法 设计特异引物对93株不同来源、不同生物型鼠疫菌的天冬氨酸酶基因(aspA)进行PCR扩增,用限制性内切酶Hpy CH4Ⅳ对扩增产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析;直接测序法检测aspA基因多态性.结果 aspA基因扩增产物经Hpy CH4Ⅳ酶切后呈现2种基因型:田鼠型鼠疫菌(38株)均为101、126 bp 2个条带;非田鼠型鼠疫菌(55株)均为227 bp单一条带.测序结果证实酶切识别位点发生突变导致带型差异.结论 初步建立了鼠疫菌PCR-RFLP(聚合酶链反应-限制性片段长度多态性)法aspA基因分型方案,通过Hpy CH4Ⅳ酶切带型差异区分高毒力的非田鼠型菌株与低毒力的田鼠型菌株,适用于疫源地流行病学调查.
关键词： 鼠疫耶尔森菌 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 分子分型 -
脉冲场凝胶电泳技术简介及其在细菌分子分型中的应用
目前可用于细菌分子分型的方法较多,脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术以其重复性好、分辨力强的优势被作为细菌分子分型的“金标准”广泛应用；利用PFGE技术对细菌进行分型并分析细菌间分型结果的差异,可以有效地对疾病进行监测,追溯疾病的感染来源,明确感染途径,追溯其遗传特征,为细菌性疾病的预防与控制提供分子生物学证据.
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乳腺癌DCE-MRI影像特征与分子分型的关联性研究
探讨DCE-MRI影像特征与乳腺癌分子分型之间的关联性.回顾性分析60例术前、化疗前行免疫组化病理检查及DCE-MRI检查的乳腺癌恶性患者.根据免疫组化结果,将患者分为4种分子分型.利用计算机,半自动提取DCE-MRI中包括统计特征、形态特征、纹理特征以及动态增强特征的65维影像特征.利用单变量逻辑回归和多变量逻辑回归方法,评估影像特征和分子分型之间的关联性,并建立多元回归模型,后研究显著影像特征的分布情况.其中,MRI病灶统计特征与luminal A显著相关,病灶和背景的动态增强特征与luminalB、HER2、basallike显著相关(单变量逻辑回归矫正后P＜0.05).多变量逻辑回归结果显示,luminal A型、HER2型、basal like型都存在与其显著相关的影像特征,回归方程的P值分别为0.004 73、0.002 77、0.011 7.实验结果说明,DCE-MRI特征可作为潜在的乳腺癌分子分型的影像学标记.
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肿瘤的分子分型与分子靶向治疗
疾病的分子分型 (molecular classification) 是通过综合的分子分析技术为疾病分类提供更多的信息,从而使疾病分类的基础从宏观形态学转向以分子特征为基础的新的分类体系 (molecular characteristics-based classification).
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凋亡调节因子c-FLIP (L)与浸润性乳腺癌分子分型及预后的相关性
目的 探讨凋亡调节因子c-FLIP(L)在浸润性乳腺癌中的表达及与乳腺癌分子分型和预后的相关性.方法 采用免疫组织化学EnVision法比较1996年1月至1999年12月264例浸润性乳腺癌和癌旁组织中c-FLIP(L)蛋白的表达差异.在癌组织中检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、HER2、Ki-67、CK5/6、表皮生长因子受体(EGFR)的表达,依此进行分子分型,分析c-FLIP (L)与分子分型的相关性.结合随访资料评价c-FLIP(L)对乳腺癌预后的影响.结果 在264例浸润性乳腺癌组织中,c-FLIP (L)高表达率为84.5％(223/264),明显高于癌旁乳腺组织中的表达水平45.1％ (119/264),差异有统计学意义(x2=89.78,P=0.000).c-FLIP(L)蛋白在不同的乳腺癌分子分型中存在表达差异,其中在腔面B型(HER2阳性)中表达水平高,强阳性表达率为78.1％(25/32),在基底细胞样型中表达水平低,强阳性表达率仅占46.2％ (18/39),差异有统计学意义(P＜0.05).c-FLIP(L)在腔面B型(HER2阳性)中的强阳性表达率高于腔面A型(70/123,56.9％),P＜0.05;在HER2过表达型中的强阳性表达率高于基底细胞样型,P＜0.01.c-FLIP (L)在淋巴结阳性的乳腺癌组织中呈强阳性,在淋巴结阴性的组织中呈弱阳性[高表达者的比率分别为93.1％ (134/144)和72.5％ (87/120),P＜0.01].c-FLIP(L)蛋白表达对无病生存曲线分布有明显影响,高表达者预后较差(P＜0.01).c-FLIP(L)蛋白表达水平、淋巴结转移状态和分子分型是影响预后的独立因素(P＜0.05).结论 c-FLIP(L)在浸润性乳腺癌中高表达,其表达水平在不同的分子分型中存在差异.c-FLIP(L)蛋白高表达是乳腺癌预后不良的因素,可作为指导患者个体化治疗和预测预后的一个重要指标.
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碳酸酐酶Ⅸ蛋白在乳腺癌分子分型中的表达及其意义
目的 探讨碳酸酐酶Ⅸ蛋白在乳腺癌分子分型中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学MaxVision法检测117例乳腺浸润性导管癌中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、HER2、CK5/6、表皮生长因子受体(EGFR)、碳酸酐酶Ⅸ的表达.结果 浸润性导管癌患者年龄25 ～ 71岁,平均49.6岁.117例中分5型:管腔A型66例(56.4％)、管腔B型6例(5.1％)、HER2过表达型10例(8.6％)、基底细胞样型20例(17.1％)、未分类型15例(12.8％).碳酸酐酶Ⅸ在管腔A型和基底细胞样型乳腺癌中的表达比例分别为13.6％ (9/66)和8/20,差异有统计学意义(P＜0.05).管腔A型中碳酸酐酶Ⅸ的阳性表达率,肿瘤大径＞2 cm组(7/27,25.9％)明显高于≤2 cm组(2/39,5.1％),差异有统计学意义(P＜0.05).碳酸酐酶Ⅸ在组织学3级(18/50,36.0％)中的表达明显高于1级(2/21,9.5％)和2级(7/46,15.2％),差异有统计学意义(均P=0.006).碳酸酐酶Ⅸ表达阴性的病例中,ER和PR的阳性率分别为61.1％ (55/90)和55.6％ (50/90)；碳酸酐酶Ⅸ表达阳性的病例中,ER和PR的阳性率分别为37.0％(10/27)和29.6％(8/27).碳酸酐酶Ⅸ表达阴性组激素受体的阳性率均明显高于阳性表达组,二者差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 碳酸酐酶Ⅸ表达不仅与乳腺浸润性导管癌的分子分型有关,还与组织学分级、激素受体表达情况、肿瘤大小有关.碳酸酐酶Ⅸ是乳腺癌预后差的相对独立的标志物.
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Claudin-low型乳腺癌的临床病理及预后特征
目的 探讨Claudin-low型乳腺癌患者的临床病理及预后特征.方法 收集2010年1月至2011年12月青岛市中心医院233例浸润性乳腺癌患者病例及随访资料,采用组织芯片及免疫组织化学法检测Claudin-1、-3、-4、-7、-8的表达情况,并分析浸润性乳腺癌患者Claudin蛋白表达情况、Claudin-low型乳腺癌患者的临床病理及预后特征.结果 Claudin蛋白表达以Claudin-3(72/212,33.9%)和Claudin-4(56/212,45.2%)的表达率相近,Claudin-4的表达量高.21例Claudin-low型乳腺癌(21/212,9.0%)中,11例为三阴性乳腺癌(11/21,52.4%),组织学类型以非特殊型浸润性癌(14/21,66.7%)和化生性癌(3/21,14.3%)为主,其中化生性鳞状细胞癌不呈现Claudin-low型表达.与非Claudin-low型乳腺癌相比,Claudin-low型乳腺癌组织学3级及肿瘤直径>2 cm的比例较高,仅略低于三阴性乳腺癌.5年无病生存率(P>0.05)和总生存率(P=0.018)均低于非Claudin-low型乳腺癌.结论 Claudin-low型乳腺癌在临床病理及预后特征与其他各型乳腺癌存在不同之处,与差的预后相关.
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短串联重复序列基因分型对部分性葡萄胎的诊断价值
目的 探讨短串联重复序列(STR)基因分型对诊断部分性葡萄胎(PHM)的临床应用价值.方法 收集2007至2014年10例原组织学诊断为P-HM及6例“倾向PHM”或“绒毛形态异常,PHM不能除外”病例,总结其临床病理、治疗和随访资料.对HE切片进行组织形态学观察,采用免疫组织化学染色方法检测p57蛋白的表达.提取DNA,用AmpFlSTR(R)IdentifilerTM PCR试剂盒进行15个特定位点的STR多态性和1个性别识别基因位点检测,对葡萄胎进行分子分型.结果 患者年龄18～49岁(平均和中位年龄均为29岁).16例病例组织形态学表现为高度水肿和纤维化两种形态的绒毛(7/16)、不规则形状的绒毛(13/16)、中度以上的滋养细胞增生(2/16)、绒毛水池形成(8/16)、合体滋养细胞指状突起(14/16)、滋养细胞假包涵体(6/16)和有核的胎儿红细胞(8/16).STR基因分型结果显示16例组织学诊断为PHM、“倾向P-HM”或“绒毛形态异常,PHM不能除外”病例中单精纯合完全性葡萄胎(MCM)4例、单卵双精型部分性葡萄胎(DPM)3例、水肿型流产(HA)9例.单纯依靠组织学观察诊断PHM的误诊比例为13/16.p57免疫组织化学染色显示4例MCM中3例绒毛间质细胞和细胞滋养层细胞局灶表达p57(＜5％～20％+),1例弥漫表达p57(70％+);3例DPM弥漫表达p57(≥50％ +);9例HA中7例弥漫阳性表达p57(≥50％+),2例局灶表达p57(10％+).结论 P-HM的确诊仅依靠形态学观察和p57免疫组织化学染色有一定的误诊率,STR基因分型能够有效协助PHM病例的诊断.
