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串珠镰刀菌辐照效应的研究
为研究γ射线在常温下对生理盐水和玉米中不同浓度串珠镰刀菌(Fusarium momiliforme)孢子的辐照杀灭效果, 用不同剂量的60Co γ射线对生理盐水和玉米中高、低2种浓度串珠镰刀菌孢子进行辐照,采用PDA培养基平板稀释法计数孢子数.γ射线辐照剂量与存活串珠镰刀菌数有明显的剂量-反应关系,生理盐水中高、低浓度串珠镰刀菌孢子试样中D10值为0.57、0.60 kGy,小杀灭剂量为4.0、3.0 kGy;玉米中高、低浓度串珠镰刀菌孢子试样中D10值为0.66、0.81 kGy,小杀灭剂量为4.0、3.0 kGy.γ射线对串珠镰刀菌孢子有明显的杀灭作用,4.0 kGy可全部杀灭实验浓度的串珠镰刀菌孢子.
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镰刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇对心肌细胞Ca2+通道的阻滞作用
目的观察镰刀菌毒素单端孢霉烯族化合物脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对培养心肌细胞Ca2+通道单通道电活动的影响.方法取新生1～2日龄Wistar大鼠,分离心肌细胞,培养基为80%DMEM与20%小牛血清,于37℃,在含5%CO2与95%空气的培养箱内进行培养,于培养24～48h期间进行实验记录.采用贴附式膜片钳技术,记录心肌细胞B、L、T三型Ca2+通道单通道电活动为加入毒素前对照,然后向培养基中加入1 mg·ml-1DON,以观察DON对心肌细胞Ca2+通道单通道电活动的影响.结果DON浓度为1 mg·ml-1时,心肌细胞B,L,T三型Ca2+通道均受到明显的阻滞.其阻滞作用表现在使B、L、T三型Ca2+通道的开放时间分别缩短47.3%,42.1%和17.1%,关闭时间分别延长283.3%,92.8%和40.7%,使通道的开放概率分别下降77.8%,71.1%和42.8%.而对流过B,L,T三型Ca2+通道的Ba2+流幅值均无明显影响.结论DON能抑制大鼠培养心肌细胞的Ca2+通道.
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致病性镰刀菌体外药敏试验研究
目的探讨用于镰刀菌敏感的抗真菌药物,为临床治疗提供参考.方法通过对镰刀菌的体外药敏试验,按照美国临床实验室标准化委员会推荐的M38-P方案,用微量稀释法测定40株茄病镰刀菌及6株串珠镰刀菌,对7种抗真菌药物即两性霉素B、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶、咪康唑、特比萘芬的敏感性.结果 40株茄病镰刀菌:MIC50:两性霉素B 4 μg/ml、酮康唑16 μg/ml、氟康唑64 μg/ml、伊曲康唑16 μg/ml、5-氟胞嘧啶64 μg/ml、咪康唑16 μg/ml、特比萘芬0.25 μg/ml,MIC90:除两性霉素B及特比萘芬外,其余药物均与MIC50相同,两性霉素B 8 μg/ml,特比萘芬4 μg/ml.6株串珠镰刀菌的MIC值除两性霉素B、氟康唑与茄病镰刀菌MIC50相同外,其余各药均低于茄病镰刀菌MIC50.结论特比萘芬MIC值较低,有望用于镰刀菌感染的治疗.
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镰刀菌致毛霉菌性肺炎一例
近年来随着医院感染菌种的不断变迁、大量抗生素的广泛应用,全身性真菌感染呈显著增高趋势,但由镰刀菌属菌引起的真菌性肺炎实为少见.我院于2006年6月份从痰中检出1例镰刀菌引起的毛霉菌性肺炎,现报告如下.
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真菌实验检测方法的现状及进展
随着器官移植的广泛开展,糖皮质激素、免疫抑制剂和广谱抗生素的大量使用,真菌感染的发生率越来越高.医院内真菌感染死亡率高达30%～60%,某些真菌如曲霉菌属和镰刀菌属引起的播散性感染的死亡率接近100%[1],而早期的抗真菌治疗对于降低死亡率至关重要[2].由于真菌感染早期症状隐匿,与其他细菌、病毒感染间无特异区别,因此,真菌的实验检测方法对真菌病的诊断具有重要的价值.本文就真菌实验检测方法的现状及进展做一简要综述.
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血液病并发突破性真菌血症患者九例临床特点及文献复习
血液病患者是侵袭性真菌感染的高危人群，随着抗真菌策略（预防、经验、诊断驱动、靶向治疗）的广泛应用，突破性真菌血症的报道也越来越多。突破性真菌血症指已用系统性抗真菌药物预防或治疗连续7d 以上出现的真菌血症［1］。近10年来，国外突破性假丝酵母菌血症的比例从13％上升至30％，甚至有研究报道高达70％［2］，其病死率高于非突破性真菌血症［3－4］，但国内却少有对突破性真菌血症的报道。本文对血液病住院患者发生的突破性真菌血症病例的临床特征进行回顾性分析，同时结合国外文献研究探讨其危险因素及诊疗措施。
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急性髓性白血病合并镰刀菌感染1例临床观察
目的 提高对免疫低下患者镰刀菌感染的认识,探讨治疗方案.方法 报道1例急性髓性白血病化疗后合并镰刀菌感染患者的临床表现、治疗经过和转归.结果 患者女,54岁,化疗后出现发热,全身红色丘疹,组织培养见大量菌丝,涂片见大量孢子,经两性霉素B及伏立康唑抗真菌治疗,病情一度稳定,但终突发脑出血,抢救无效死亡.结论 镰刀菌感染是急性髓性白血病化疗后少见的致死性并发症,对异常皮肤损害应尽快进行组织涂片及培养,早期明确诊断,及时给予抗真菌治疗.
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2005～2006年眼部真菌感染的病原学及药物敏感性分析
目的 分析眼部真菌感染的菌属分布变化及其体外药敏试验.设计 回顾性研究.研究对象 北京市眼科研究所2005-2006年1246份眼部可疑真菌感染标本.方法 标本接种于沙保罗培养基,在28℃、40%湿度环境下培养8～10天,并应用纸片法分析培养阳性真菌菌株对常用抗真菌药物的敏感性.主要指标 菌属种类与季节分布;真菌菌株对那他霉素、特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、两性霉素B的敏感性.结果 1246份标本中,真菌培养阳性330株(26.5%).其中来自角膜、房水、玻璃体、结膜、睑板腺及其他眼组织的比例分别为92.4%、2.7%、1.5%、0.6%、1.0%、1.8%.培养阳性菌株72.4%分布在9月到次年2月,在3～8月者占27.6%.镰刀菌属占64.55%,曲霉属13.03%.对那他霉素、特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、两性霉素B的敏感性分别为88.18%、35.15%、11.82%、5.76%及33.64%.镰刀菌属对那他霉素敏感,其次是特比萘芬和两性霉素B;曲霉属对特比萘芬敏感,其次是两性霉素B和那他霉素.结论 镰刀菌属和曲霉属是我国北方眼部真菌感染主要的致病菌.绝大多数真菌菌株对那他霉素、特比萘芬和两性霉素B敏感,对伊曲康唑和氟康唑的耐药性较高.(眼科,2008,17:44-47)
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氟康唑联合达克宁治疗真菌性角膜炎疗效观察
真菌性角膜炎是一种由真菌引起的感染性角膜病变,致盲率极高.常见的致病真菌有镰刀菌属、念珠菌属、曲霉菌属、青霉菌属和酵母菌等.
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我国中原地区653株真菌性角膜炎分离镰刀菌的基因型及药物敏感性
目的 研究中原地区真菌性角膜炎分离镰刀菌的基因型和体外药物敏感性.方法 测定2002-2011年河南省眼科研究所真菌性角膜炎患者角膜分离的镰刀菌758株的部分translation elongation factor (EF)1-a基因序列,通过部分EF1-α基因的序列比对进行镰刀菌菌种和基因型的鉴定.采用美国临床实验室标准研究所M38-A方案测定其中145株镰刀菌对伏立康唑、特比萘芬、那他霉素等12种药物的低抑菌浓度(MIC).结果 653株镰刀菌菌种及基因型通过EF1-α序列得到鉴定.中原地区真菌性角膜炎感染镰刀菌以腐皮镰刀菌种复合体(FSSC)多,386株(59.11％),包括15个种,43个基因型,常见的FSSC基因型是FSSC5-d(132/20.21％).赤霉菌种复合体(GFSC)居第2位,包括3个菌种,F.proliferatum 124株(18.99％),F.verticillioides 112株(17.15％)和GFSC18株(2.76％).尖孢镰刀菌复合体(FOSC)居第3位,11株(1.68％),6个基因型.体外药物敏感试验结果显示镰刀菌属对那他霉素、伏立康唑、两性霉素B敏感,对氟胞嘧啶、氟康唑、制霉菌素、克霉唑、咪康唑耐药.超过一半的镰刀菌对益康唑、酮康唑、伊曲康唑和特比萘芬敏感.FSSC对伏立康唑、咪康唑、特比萘芬、益康唑和那他霉素的MIC50高于F.verticillioides、F.proliferatum和GFSC.结论 中原地区真菌性角膜炎感染镰刀菌大多数位于3个复合体FSSC、GFSC和FOSC内,基因型(种)多.不同种镰刀菌对伏立康唑、咪康唑、特比萘芬和那他霉素的药物敏感性有差异.
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真菌性角膜炎334例的病原学分析
目的 分析真菌性角膜炎患者的致病菌属分布情况,为临床诊断和治疗提供数据.方法 收集2005年7月至2010年12月期间在山东省眼科医院确诊为真菌性角膜炎的352份角膜溃疡组织刮片以及术中切除角膜组织标本,采用沙保弱培养基,28℃条件下湿盒内培养7d,根据真菌菌落外观、菌丝、孢子形态、孢子排列方式及菌细胞形态进行菌种鉴定.并对送检角膜刮片和术中切除角膜组织标本真菌培养的阳性率、菌属分布、季节分布以及患者的来源、性别比例、年龄分布和职业等情况进行回顾性分析.对不同年份菌株检出率、菌株的季节分布差异等指标采用卡方检验方法进行分析.结果 352份确诊为真菌性角膜溃疡的培养标本中,真菌培养阳性334株,阳性率94.9％.其中203份角膜刮片标本培养阳性187份,阳性率92.1％；149份术中切除角膜组织培养阳性147份,阳性率为98.7％.分离到的菌株中镰刀菌属多见,共211株(63.2％).其次为曲霉菌属,共47株(14.1％).培养阳性菌株季节分布特点:1至3月份共培养出48株(14.4％)；4至6月份共培养出48株(14.4％)；7至9月份共培养出64株(19.2％),10至12月份共培养出174株(52.0％),四者比约1∶1∶1.3∶3.6,差异无统计学意义(x2=3.360,P=0.339).334例培养阳性患者中男女比例为2.04∶1；平均年龄为(48±22)岁.发病群体农民217例(65.0％),其他职业117例(35.0％).334例阳性患者中289例(86.5％)患者来自山东省内,45例(13.5％)患者来自山东省以外省份.结论 镰刀菌属是山东地区真菌性角膜炎主要的致病菌,10～12月份是真菌性角膜炎的好发季节.真菌性角膜炎标本的病原体培养阳性率高,对临床诊治具有重要作用.
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2009至2010年眼部真菌感染的病原学及药物敏感性分析
目的 分析眼部真菌感染的菌属分布及其体外药物敏感性.方法 系列病例研究.2009年1月至2010年12月北京市眼科研究所共保存1302份眼部标本,将其接种于马铃薯葡萄糖斜面培养基,在28℃、40％湿度环境下培养3～8d.培养阳性标本的药物敏感性分析采用纸片法.2009年和2010年标本真菌培养阳性率的比较采用x2检验.结果 1302份标本的真菌培养阳性数为292株(22.4％),其中2009年和2010年阳性率分别为21.2％ (135/637)和23.6％(157/665),差异无统计学意义(x2=1.092,P=0.296).标本培养的阳性率出现5月份和11月份两个峰值.标本培养结果显示,镰刀菌属多(59.6％,174/292),其次为曲霉菌属(16.8％,49/292)、链隔孢霉属(10.6％,31/292).在年龄分布方面,82.2％(240/292)的阳性病例集中于＞30 ～ 60岁；药物敏感性试验结果显示,对那他霉素、特比萘酚、氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑的敏感率分别为94.0％(63/67)、63.4％(154/243)、6.0％(17/285)、39.7％(98/247)、21.2％(65/306).结论 北京同仁医院眼科收治的患者中前3位常见的真菌菌属依次是镰刀菌属、曲霉菌属、链隔孢霉属.镰刀菌属及未明确病原真菌种属的感染应首选那他霉素.除镰刀菌属外,其他种属真菌对那他霉素、特比萘酚、两性霉素B敏感性高,对伊曲康唑敏感性低.几乎所有真菌菌株对氟康唑耐药.
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实验性大鼠镰刀菌性角膜溃疡中P物质的表达
目的 探讨大鼠真菌性角膜溃疡和细菌性角膜溃疡中P物质(sP)的表达变化过程与差异,以及其在真菌性角膜溃疡发病过程中的作用.方法 实验研究.将Wistar大鼠随机分为空白对照组、茄病镰刀菌组、金黄色葡萄球菌组,右眼为实验眼,左眼为对照眼.空白对照组大鼠5只,不做任何处理;茄病镰刀菌组接种茄病镰刀菌,金黄色葡萄球菌组接种金黄色葡萄球菌,制作角膜溃疡模型,模型制造成功后茄病镰刀菌组、金黄色葡萄球菌组各取25只大鼠分别于接种后1、5、8、10、14 d取角膜.应用HE染色观察角膜组织学变化,免疫组织化学法和RT-PCR法检测角膜中SP的表达,并对各组内不同时间点的数据进行方差分析,两两比较采用q检验;同一时间点组间数据进行t检验.结果 造模后实验组于1 d形成溃疡,基质浅层胶原纤维排列紊乱,中性粒细胞浸润;5 d溃疡加重,8 d溃疡缩小,成纤维细胞增生,新生血管长入;14 d基质层瘢痕样重构.SP表达于1 d增强(茄病镰刀菌组和金黄色葡萄球菌组吸光度值分别为0.3313±0.0133、0.3995±0.0191;mRNA为0.4525±0.0170、0.5532±0.0258),8 d强(茄病镰刀菌组和金黄色葡萄球组吸光度值分别为0.5525±0.0171、0.7050±0.0119;mRNA为0.5975±0.0221、0.7150±0.0238),10 d下降(茄病镰刀菌组和金黄色葡萄球菌组吸光度值分别为0.1533±0.0176、0.3125±0.0170;mRNA为0.2416±0.0082、0.4835±0.0082),14 d降至低于正常(茄病镰刀菌组和金黄色葡萄球菌组吸光度值分别为0.1150±0.0128、0.1675±0.0126;mRNA为0.1275±0.0126、0.2325±O.0171),差异有统计学意义(SP吸光度值比较:茄病镰刀菌组F=832.24,q值分别为35.3675、12.9044、27.3621、34.6506、22.4632、62.7296、70.0182、40.2664、47.5550、7.2886,均P＜0.01;金黄色葡萄球菌组F=636.17,q值分别为38.7494、11.4245、10.8298、28.6082、27.3249、49.5791、67.3575、22.2543、40.0327、17.7784,均P＜0.01.mRNA表达比较:茄病镰刀菌组F=658.60,q值分别为18.9941、9.5132、27.4719、42.0007、9.4809、46.4661、60.9948、36.9852、51.5139、14.5287,均P＜0.01;金黄色葡萄球菌组F=335.13,q值分别为16.9266、4.1677、7.1081、32.4724、12.7589、24.0347、49.3990、11.2759、36.6402、25.3643.均P＜0.01＝.相同时间点上两实验组间比较,茄病镰刀菌组SP表达低于金黄色葡萄球菌组,差异有统计学意义(SP吸光度值t=6.5493、7.3867、16.0505、14.5479、6.5360,均P＜0.05;mRNA表达比较t=7.2878、9.5232、8.8149、43.6256、11.1269,均P＜0.05＝.实验组左眼SP表达1 d达到高(吸光度值为0.2840±0.0212,mRNA为0.3950±0.0129),5 d降至正常水平(吸光度值为0.2125±0.0174,mRNA为0.3321±0.0041),与实验组比较差异有统计学意义(SP吸光度值比较:与茄病镰刀菌组比较t=4.2261、18.3314、35.5163、5.3609、13.4826;与金黄色葡萄球菌组比较t=9.0508、25.6639、63.4924、7.4828、7.1301;均P＜0.05.mRNA表达比较:与茄病镰刀菌组比较t=6.0249、31.9158、26.0413、9.1550、19.1741;与金黄色葡萄球菌组比较t=12.2636、53.4404、36.8727、15.8687、8.2939;均P＜0.05＝.结论 SP可能参与了真菌性角膜溃疡早期损伤和晚期修复过程,在真菌性角膜溃疡组表达低于细菌性角膜溃疡组可能参与了真菌性角膜溃疡疼痛较轻的机制.
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眼部真菌感染的病原学分析
目的分析眼部感染的真菌菌属分布与变化.方法对首都医科大学北京同仁眼科中心1989～2000年送检的2 609份眼部真菌标本进行培养,并对真菌培养的阳性率、季节分布、菌属分布及其变化进行回顾性分析.结果 2 609份眼部真菌培养标本中,真菌培养阳性775株(29.70%).其中角膜标本707株(91.22%),结膜标本22株(2.84%),前房标本15株(1.94%),玻璃体标本9株(1.16%),泪囊标本3株(0.39%),其他19株(2.45%).培养阳性菌株季节特点:1～6月份共培养出249株(32.13%),7～12月份培养出526株(67.87%),两者比约1∶2.1.主要培养阳性菌属为镰刀菌属,共455株(58.71%).其中1989～1994年共培养出阳性镰刀菌96株,占总检出菌数的53.63%;1995～2000年共培养出359株,占总检出菌数的60.23%,后6年较前6年增加了6.60%.其次为曲霉菌属,共130株(16.77%),前6年培养出40株(22.35%),后6年90株,占总检出菌数的15.10%,后6年较前6年下降7.25%.结论镰刀菌属是我国北方地区主要的眼部致病菌属,曲霉菌属致病的比例有所下降.
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感染性角膜病临床诊疗专家共识(2011年)
真菌性角膜炎真菌性角膜炎( fungal keratitis)是致病性真菌感染引起的一种致盲性角膜病,在我国居感染性角膜病致盲率的首位[1].该病主要与植物外伤有关,近年来其患病率有增高的趋势.一、病因和发病机制引起角膜感染的主要真菌菌属在不同地区差别较大.发达国家及气候较寒冷地区常见的致病菌为念珠菌属;我国主要以镰刀菌属(占70％ ～ 80％)和曲霉菌属(占10％)为主[2].本病有明显的致病危险因素,多与植物性眼外伤、配戴角膜接触镜、长期应用免疫抑制剂或糖皮质激素以及患慢性眼表损伤性疾病有关[2].
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伏立康唑长期应用可致黑素瘤
伏立康唑属三唑类(广谱)抗真菌药,通过抑制真菌中由细胞色素P450介导的14α-甾醇去甲基化,使真菌细胞膜麦角甾醇的生物合成受阻,用于曲霉属、镰刀菌属和足放线病菌属等引起的严重感染.伏立康唑治疗时耐受性一般良好,常见的不良反应包括外周性水肿、头痛、呼吸功能紊乱、视觉障碍、胃肠不适(恶心,呕吐,腹泻)、皮疹.国外报道在前期临床试验中,约有2%的患者可出现皮肤反应,包括光敏反应、唇炎和干燥症.随后又有伏立康唑可致严重光敏反应、加快皮肤光老化、假迟发性皮肤卟啉症和侵袭性鳞状细胞癌(SCC)的报告.2010年1月18日美国<皮肤病学文献>(Archives of Dermatology) 在线发表的一项观察报告表明,2例患者出现原位黑素瘤与长期应用伏立康唑相关.
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黄草乌根部内生真菌的分离与鉴定
目的 从黄草乌的根部分离鉴定内生真菌.方法 利用PDA培养基进行黄草乌根部内生真菌的分离与纯化,根据菌落的形态特征并结合真菌的ITS序列进行菌株鉴定.结果 从黄草乌根部共分离到内生真菌52株,鉴定为20属34种,绝大部分属于子囊菌门,其中镰刀菌属和青霉菌属为优势属.结论 黄草乌根部的内生真菌具有多样性,可作为潜在的资源供药物筛选.
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茄病镰刀菌致角膜炎一例
2008年6月,本中心微生物实验室由一患者左眼分泌物培养标本中,分离出1株茄病镰刀菌.患者男,64岁.因左眼畏光流泪,视力下降7 d入院.无外伤史.采用标准对数视力表测视力,右眼1.2,左眼0.02,眼压正常,左眼混合性充血(+++),左角膜直径4 mm,灰白色混浊,边缘不规则,界较清楚,混浊区略高于角膜,不易拭去混浊物,前房无积脓,瞳孔2 mm,光反射消失.
关键词： 镰刀菌属 -
铁皮石斛内生真菌的分离及其体外抑菌和抗肿瘤活性初步研究
目的 分离铁皮石斛Dendrobium officinale内生真菌,研究内生真菌的分布并初步探讨和筛选具有抑菌和抗肿瘤活性的特异菌株.方法 利用组织分离法和分子生物学方法分离、鉴定内生真菌;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作为受试对象,采用对峙法和管碟法分别对内生真菌及其发酵代谢产物的醋酸乙酯萃取相进行抑菌实验;采用MTT法对内生真菌代谢产物醋酸乙酯萃取相进行体外抗肿瘤活性检测.结果 从铁皮石斛中分离得到28株内生真菌,分子鉴定结果显示,分离的内生真菌归属于10个属,其中镰刀菌属为优势属.抑菌实验结果显示28株内生真菌中,有7株至少能对1种指示菌有抑菌作用,其代谢产物的醋酸乙酯萃取相对3种指示菌和HepG2细胞具有不同程度的抑制作用.结论 铁皮石斛内生真菌种群丰富,从中分离得到的内生真菌具有潜在的抑菌和抗肿瘤活性,为进一步开发抑菌、抗肿瘤候选药物奠定基础.
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纳他霉素滴眼剂治疗兔眼真菌性角膜炎的药效研究
目的:探讨国产纳他霉素滴眼剂对真菌性角膜炎的治疗作用,为其临床应用提供实验基础.方法:成年健康新西兰白兔30只,随机分为6组,真菌性角膜炎(FK)模型组、生理盐水组、纳他霉素滴眼剂赋形剂组、Natacyn组、纳他霉素组和正常对照组,每组10只兔眼.除正常对照组外其余各组角膜基质注射法建立真菌性角膜炎模型.各组动物于造模后第4、10、15和21天于裂隙灯下观察兔眼溃疡情况并评分,第10和21天观察兔眼治愈情况,并记录各组角膜发生新生血管、虹膜炎、前房积脓、斑翳等发生情况.结果:(1)第10、15和21天Natacyn组和纳他霉素组兔眼溃疡评分低于FK模型组(均P＜ 0.001)；纳他霉素组和Natacyn组差别无统计学意义.(2) Natacyn组和纳他霉素组较FK模型组兔眼治愈率升高(均P＜ 0.001),而前2组治愈率差别无统计学意义.(3)纳他霉素和Natacyn组较FK模型组兔眼真菌性炎症并发症发生率低(均P＜ 0.001),而前2组真菌性炎症合并症发生率差别无统计学意义(P＞0.05).结论:纳他霉素滴眼剂可降低真菌性角膜炎兔眼溃疡评分、提高治愈率、有效预防并发症.
