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大鼠髁突软骨细胞发育中差异蛋白的表达变化
目的:初步建立大鼠髁突软骨细胞发育过程中蛋白表达差异谱,寻找并鉴定其差异表达蛋白.方法:体外培养出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞,应用甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞.提取各组软骨细胞总蛋白,采用iTRAQ标记定量蛋白,2D nano-HPLC和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术动态、定量观察出生后大鼠髁突软骨细胞发育过程中差异蛋白的表达及其量变情况,所得数据用MASCOT软件处理,筛选样本之间有意义的差异蛋白,运用GO法进行蛋白分类.结果:共鉴定500种差异蛋白,其中137种具有可信度表达,包括15种高可信度表达,相对分子量在7806.24～608459.2,主要功能为参与各类代谢及发育过程、细胞骨架结构、信号转导,响应各类刺激、免疫应答以及细胞间联系及运输等.结论:本研究获得了目前较为全面的大鼠髁突软骨细胞发育中差异蛋白表达谱,并运用质谱技术成功鉴定了差异表达蛋白,为进一步研究髁突软骨细胞内蛋白功能及在颞下颌关节疾病中的改变与作用奠定基础.
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生长期兔颞下颌关节盘前移位对髁突软骨内Ihh和PTHrP表达的影响
目的:研究颞下颌关节盘前移位对生长期兔髁突软骨印度豪猪蛋白(Ihh)和甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)表达的影响,探讨关节盘前移位与下颌骨髁突生长发育之间的关系.方法:取3个月龄日本大耳白兔21只,建立颞下颌关节盘前移位动物模型,分别于建模后4、8、12周处死取材,观察髁突软骨组织学变化,并通过免疫组织化学方法检测Ihh、PTHrP在髁突软骨中的表达与定位.结果:关节盘移位后4周,髁突软骨结构轻度紊乱;8周时,髁突前部软骨形态结构发生显著改变;12周时,软骨正常结构丧失进一步加剧.关节盘移位后4周,可见Ihh、PTHrP在增殖带深层细胞内明显表达,8周、12周时在髁突深层软骨细胞内表达.结论:颞下颌关节盘前移位导致髁突软骨结构进行性病理性损害,Ihh和PTHrP在盘移位后髁突软骨病理性改变的过程中发挥重要作用,提示关节盘前移位可能通过Ihh-PTHrP负反馈信号通路对生长期髁突软骨内成骨过程产生影响.
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骨髓基质细胞诱导分化修复髁突软骨面缺失的实验研究
目的:采用骨髓基质细胞(BMSCs)体内修复髁突软骨全层缺失.方法:15只山羊,9只作为实验组,将BMSCs和少量软骨细胞(7∶3比例混合)按5×107/mL与生物可降解材料复合后,植入山羊髁突软骨全层缺失处；对照组6只山羊,髁突软骨全层缺失区植入支架材料,分别于术后4、8、12周每个时间段取材3只实验动物,2只对照组动物；2组分别用HE染色、Ⅱ型胶原分泌的免疫组化法进行评价.结果:实验组术后4周,山羊髁突软骨缺失区能形成成熟的软骨组织,12周时软骨未退变.对照组不能形成成熟的软骨组织.结论:骨髓基质细胞在自体软骨细胞基质的诱导下,可以修复山羊颞下颌关节髁突软骨面全层缺失.
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不同方法诱导的骨髓基质细胞用于修复山羊髁突软骨缺失的实验研究
目的:比较用诱导因子诱导及用部分成体软骨细胞诱导的骨髓基质细胞(BMSCs)复合生物材料修复山羊颞下颌关节髁突软骨全层缺失的效果.方法:取山羊6只,分为2个实验组及1个对照组,每组2只.实验Ⅰ组植入经诱导因子(TGF-131、IGF-1、地塞米松)诱导的BMSCs与支架(PIuronic F-127溶胶)复合物,实验Ⅱ组植入软骨细胞-BMSCs(按3:7比例混合)的细胞-支架复合物,对照组仅植入支架材料.于术后8周取材,进行颞下颌关节软骨面缺失修复的大体观察、修复组织的HE染色、Ⅱ型胶原分泌的免疫组化染色.结果:术后8周实验Ⅱ组髁突软骨缺失区由软骨样组织修复.HE染色及免疫组化染色结果均提示修复组织为成熟的软骨组织.而实验Ⅰ组及材料对照组缺损区仅由少量的纤维性组织修复,不能形成成熟的软骨组织.结论:骨髓基质细胞在自体软骨细胞基质的诱导下,可以修复山羊髁突软骨面全层缺失,二维培养诱导后的BMSCs在山羊髁突软骨缺失区难以达到修复作用.
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血管内皮生长因子在颞下颌关节软骨细胞中的表达
目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在颞下颌关节髁突软骨改建过程中的作用.方法:采用新西兰大耳白兔30只,分为术后24h和1、3、5、8周5个时间组及1个对照组,每组5只,用打击装置造成动物单侧下颌骨骨折,行钛合金小夹板坚强内固定,按时间分组处死动物取双侧颢下颌关节标本,观察髁突和关节盘软骨的组织学变化,应用免疫组化和原位杂交方法检测髁突软骨细胞内血管内皮生长因子及其受体Flt-1的表达,应用计算机图像分析系统计算阳性染色的灰度积分,应用SPSS10.0软件包进行配对q检验.结果:下颌外伤后双侧颢下颌关节髁突和关节盘均有不同程度损伤,髁突软骨增殖层和肥大层细胞胞质中检测到血管内皮生长因子及其受体Fit-1的表达,表达阳性强度随愈合时间而变化,各组阳性染色的灰度积分值差异具有统计学意义(P<0.01).结论:血管内皮生长因子及其受体Flt-1对颞下颌关节髁突损伤的修复起重要的生物学作用.
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骨髓基质细胞修复山羊髁突软骨缺失的绿色荧光蛋白示踪
目的:采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)对骨髓基质细胞体内修复髁突软骨全层缺失进行示踪观察.方法:扩增PG13细胞株,获得大量含GFP基因的假病毒液,并直接转染骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs).将含有GFP基因转染标记的BMSCs和少量软骨细胞与生物可降解材料复合后,植入山羊髁突软骨全层缺失处,1个月后应用激光共聚焦显微镜检测修复组织中GFP标记的BMSCs的分布.结果:标记的BMSCs植入关节软骨缺损1个月后,修复组织仍能高效表达GFP.激光共聚焦显微镜下显示:多数新生软骨陷窝内有GFP标记的细胞.结论:标记的BMSCs可在髁突软骨全层缺失区分化为成熟的软骨细胞,并在髁突软骨缺失的修复中发挥重要作用.
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髁突骨软骨瘤的CT与MRI诊断价值比较
目的:比较CT和MRI在髁突骨软骨瘤诊断中的价值.方法:回顾分析29例髁突骨软骨瘤患者的CT和MRI表现,观察肿瘤形态、部位、与髁突的连续性、软骨帽、软骨膜结构以及髁突、颞骨关节面、颞下颌关节盘、关节腔、翼外肌等软、硬组织改变情况.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:CT和MRI均可显示髁突骨软骨瘤骨皮质和骨松质与髁突的连续性.MRI对软骨帽和软骨膜的检出率均显著高于CT(P＜0.05).CT和MRI的诊断准确率分别为72.4％和75.9％,差异无显著性(P＞0.05).CT和MRI对颞骨关节面改建(9例)、髁突脱位(9例)及假关节形成(11例)的检出率相同.MRI显示2例患侧和7例对侧颞下颌关节盘移位以及18例患侧和12例对侧关节腔积液,而CT无法显示关节盘移位和关节腔积液情况.MRI对翼外肌萎缩伴脂肪变性的检出率高于CT,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:CT和MRI均可清晰显示髁突骨软骨瘤骨皮质和骨松质与髁突的连续性特征以及毗邻硬组织改变情况,两者诊断准确率相当,但MRI在显示肿瘤的软骨帽和软骨膜结构以及颞下颌关节和毗邻软组织改变方面优于CT.
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鼻阻塞对幼年大鼠髁突骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用
目的:通过幼年大鼠开口呼吸动物模型探讨鼻阻塞对髁突骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨向分化的作用.方法:40只4周龄SD大鼠随机分为2组,双侧鼻阻塞组28只,阻塞时间为8:00-16:00,至8周;对照组12只,不作处理.在建模初始、2周末、4周末分别取2组双侧髁突BMSCs体外培养并鉴定,CCK-8法比较2组细胞的增殖差异,RT-PCR法检测2组BMSCs成软骨标志基因(Agg、COL-Ⅱ、SOX-9)表达的差异.采用SPSS19.0软件包对实验数据进行统计学分析.结果:鼻阻塞组髁突BMSCs的细胞增殖曲线与对照组无显著差异(P＞0.05),但成软骨标志基因的表达显著下降(P＜0.05).结论:幼年大鼠双侧间歇性鼻阻塞致其生长发育期开口呼吸,出现下颌骨发育不足,与髁突BMSCs软骨向分化受到抑制有关.
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大鼠骨髓间充质干细胞与髁突软骨细胞共培养诱导软骨化分化的实验研究
目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞与髁突软骨细胞共培养对骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)向软骨化分化的影响.方法:分离、培养大鼠BMSCs与髁突软骨细胞,取第2代细胞以2∶1比例混匀为共培养组,细胞终浓度为1.2×104/mL;以相同浓度的髁突软骨细胞作为实验组,以相同浓度的BMSCs作为对照组.倒置显微镜下观察细胞形态;以CCK-8法检测细胞增殖;阿利新蓝染色、ALP染色及定量分析检测细胞成软骨分化;Western免疫印迹检测Ⅱ型胶原、X型胶原的表达.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:共培养组与实验组细胞呈多角形、铺路石样排列,为典型软骨细胞形态,而对照组细胞呈长梭形.细胞生长曲线显示,共培养组较其他2组细胞增殖能力强;共培养组与实验组阿利新兰染色、ALP染色均为阳性;Western免疫印迹显示,共培养组细胞的Ⅱ型胶原、X型胶原的表达显著升高.结论:在共培养中,BMSCs有利于髁突软骨细胞表型的维持以及促进软骨细胞的增殖;同时,髁突软骨细胞具有诱导BMSCs向软骨分化的作用.
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髁突特发性吸收的研究现状
颞下颌关节髁突特发性吸收(ICR)是一种髁突渐进性、不明原因的吸收导致前牙开(猞)、下颌后缩所致的严重的面部畸形的疾病.国内外的研究发现,ICR具有青春期女性发病倾向,患者雌激素水平降低或有口服避孕药史.但迄今学术界尚无法解释ICR患者不出现像骨质疏松症一样的全身性骨骼疾病,而只在髁突发生特异性吸收这一现象.本文对只发生在髁突吸收的这种特异性现象的研究现状进行了综述.
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穿腮腺入路治疗髁突骨折51例临床分析
目的:探讨下颌骨包括囊内骨折在内的髁突骨折手术方法及治疗效果,为临床治疗中佳手术入路的选择提供依据.方法:对51例髁突骨折采用穿腮腺入路的切开复位内固定方法,术后查阅病例资料,进行定期随访,评价患者治疗效果.结果:所有患者均解剖复位,咬合关系良好,术后关节活动正常,瘢痕隐蔽.结论:穿腮腺入路治疗髁突骨折是较好的方法,值得在临床推广.
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髁突骨软骨瘤并发滑膜软骨瘤病的临床治疗:附3例报道
目的:探讨颞下颌关节骨软骨瘤并发滑膜软骨瘤病的诊断与治疗.方法:回顾2001-2013年颞下颌关节骨软骨瘤和滑膜软骨瘤病患者的临床资料,终确诊为原发性骨软骨瘤并发滑膜软骨瘤病患者共3例.对病史、临床表现、影像学检查和病理特征,以及之后3个月～5年的随访结果进行总结.结果:CT和MRI可提供精确的术前诊断,骨软骨瘤中发现游离软骨化或钙化小体,提示骨软骨瘤并发滑膜软骨瘤病可能.结论:治疗过程中需注意游离小体的存在,常提示骨软骨瘤并发滑膜软骨瘤病的可能,以免漏诊或误诊.
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微型钛板内固定治疗髁突骨折
目的:观察髁突骨折应用微型钛板内固定治疗的临床效果.方法:23例髁突骨折采用耳前或下颌下切口,以微型钛板行坚固内固定,随访观察6～36个月.结果:23例张口度均大于30mm,咬合关系良好,张口型满意,无下颌偏斜,关节区疼痛和弹响3例.结论:微型钛板性能稳定、改建成形容易,钛板内固定稳定可靠,手术治疗可免除颌间牵引或缩短颌间牵引时间,是治疗髁突骨折的良好方法.
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巨大髁突骨瘤1例报告及文献复习
骨瘤是常见的由分化成熟的骨组织构成的良性肿瘤,多来源于邻近骨质,发生于骨膜内层的骨母细胞,由成骨性纤维组织、成骨细胞及所产生的新生骨组成.发生于髁突的巨大骨瘤较为罕见,本文报道1例巨大髁突骨瘤病例,并结合相关文献,对其组织来源、病理分型、鉴别诊断和治疗等进行讨论.
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下颌骨髁突软骨瘤5例报告
发生于下颌骨髁突的软骨瘤罕见,临床报道极少.作者结合1989～2004年间收治的5例髁突软骨瘤患者的临床资料,对该病的临床特点、病理表现、诊断与治疗进行讨论.
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髁突骨瘤的外科治疗:附3例报告
通过对我院近年收治的3例髁突骨瘤进行回顾分析,探讨髁突骨瘤的手术方式.肿瘤和髁突切除后,同期用患侧增生伸长的冠突或自体肋软骨移植形成颞下颌关节.术后随访3个月～2年,疗效满意.该术式是治疗髁突骨瘤较为理想的方式.
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兔关节盘前移位后髁突软骨TGF-β1的表达及意义
目的探讨关节盘移位后髁突软骨中转化生长因子-beta 1(transforminggrowth factor-beta 1,TGF-β1)表达与分布的变化规律及可能意义.方法22只日本大耳白兔,16只用于建立关节盘前移位的动物模型,分别于术后1、2、4、8周处死,4只行模拟手术作为手术对照组,另2只不行手术作为空白对照.免疫组化法检测髁突软骨中TGF-β1的表达与分布.结果实验组关节盘成功前移位.对照组TGF-β1主要表达于髁突肥大层及钙化软骨层,实验组关节盘移位后,过渡层及增殖层中TGF-β1表达逐渐增强.8周时髁突软骨全层细胞几乎都表达TGF-β1.结论关节盘移位后TGF-β1的分布及含量发生了改变,这种改变与关节盘前移位病程进展一致.提示TGF-β1可能介导了关节盘移位后疾病发展过程中机械刺激对髁突的改建作用.
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Ihh-PTHrP信号轴介导髁突软骨细胞对压力微环境改变的调控研究
目的：探究Ihh-PTHrP负反馈信号通路与静压力下髁突软骨细胞生物学响应的关系。方法体外分离培养4周龄健康雌性新西兰大白兔髁突软骨细胞，100 kPa 静压力条件下，分别对 P2代髁突软骨细胞进行0、1、2、3、4 h 的加压处理；采用Western印迹的方法比较分析髁突软骨细胞 COL2A1、Ihh 和 PTHrP的蛋白表达变化；通过 RT-qPCR检测分析静压力对 Ihh 和PTHrP基因水平表达的影响；选取0 h和3 h 组，使用扫描电子显微镜扫描分析静压力对髁突软骨细胞形态的影响；采用 SPSS 19．0软件包对数据进行统计学分析。结果 Western印迹实验发现：压力加载3 h后，COL2A1出现明显高表达；Ihh蛋白表达在0～2 h内逐渐升高，在2～4 h内却逐渐降低；PTHrP在0～2 h内蛋白表达逐渐升高，并在2～4 h内维持着一个较高水平的表达。RT-qPCR检测发现Ihh在压力加载1 h时出现明显高表达，而PTHrP则在2 h时出现明显高表达。100 kPa静压力加载3 h后，髁突软骨细胞突起增多、变长。结论兔髁突软骨细胞对压力微环境的改变具有一定的适应能力；适宜的静压力可以提高髁突软骨细胞的成软骨能力；Ihh-PTHrP负反馈信号通路参与髁突软骨细胞对压力微环境改变的适应性改建过程。
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生长期兔髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞生物学特性的比较研究
目的 建立软骨细胞体外培养模型,研究纤维软骨和透明软骨的生物学差异.方法 分离4周龄雌性兔双侧髁突软骨和膝关节骨骺软骨,采用胰酶和胶原酶联合消化的方法收集软骨细胞,分别进行体外培养并连续传代至P10.使用倒置显微镜观察细胞形态;采用阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色的方法分别对髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞进行鉴定;用细胞计数的方法绘制生长曲线;运用荧光定量PCR和Western印迹技术对软骨特异性指标Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、X型胶原、SOX9和Aggrecan进行检测,并使用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果 倒置显微镜观察示,髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞形态均会随细胞传代而发生改变,且P2代以后改变明显;基因和蛋白水平的检测均证实P2代后软骨细胞去分化明显.阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定结果均为阳性,对照组为阴性.实时定量荧光PCR和Western印迹结果证明:在纤维软骨中,Ⅰ型胶原的表达量高于透明软骨;而Ⅱ型胶原、X型胶原、SOX9和Aggrecan的表达量却明显低于透明软骨.结论 使用本方法培养软骨细胞简单有效;髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞体外培养均存在去分化现象,且两者Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、X型胶原、SOX9和Aggrecan的表达存在显著差异,生物学特性并不相同.
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细胞冻存对髁突软骨细胞去分化特性的影响研究
目的：研究细胞冻存处理对髁突软骨细胞去分化特性的影响。方法分离并体外培养2周龄新西兰大白兔双侧髁突软骨细胞，将 P1代冻存处理15 d后传代培养。采用倒置相差显微镜观察比较正常传代培养的 P2代髁突软骨细胞（对照组）和经冻存处理后传代的 P2代髁突软骨细胞（实验组）间的细胞形态；通过荧光定量 PCR和 Western 免疫印迹技术检测和分析两组间软骨细胞标志物 COL2、COL10、Sox9和 Aggrecan基因和蛋白水平的表达差异，并使用 SPSS13．0软件包对数据进行统计学分析。结果倒置相差显微镜观察发现实验组 P2代髁突软骨细胞会出现一定程度的形态学改变；但是并未发现实验组和对照组之间 COL2、COL10、Sox9和 Aggrecan的表达有统计学意义的差异；实验组和对照组软骨标志基因的表达均会较 P1代出现降低。结论体外培养髁突软骨细胞存在去分化现象，但细胞冻存处理并不会加速其去分化进程，所以体外培养的髁突软骨细胞可以通过冻存技术来实现髁突软骨细胞的暂存。
